肽或其盐及其制备方法技术

本发明专利技术涉及肽或其盐及其制备方法。所述肽具有例如4～8个氨基酸。本发明专利技术的制备方法包括如下步骤：以树脂作为起始原料，将具有保护基团的氨基酸连接至树脂，然后脱去保护基团，依次这样连接各个氨基酸，然后进行切肽和脱侧链保护基团得到粗品，经过纯化后得到所需的肽或其盐。

Peptide or its salt and its preparation method

The invention relates to a peptide or its salt and a preparation method. The peptide has, for example, 4~8 amino acids. The preparation method of the invention comprises the following steps: using resin as the starting materials, it will protect groups of amino acids connected to the resin, and then removal of protective groups, so connecting the various amino acids, peptides and then cut off the side chain protecting groups to get the crude, required by the purified peptide or its salt.

【技术实现步骤摘要】
肽或其盐及其制备方法
本专利技术涉及肽或其盐及其制备方法。
技术介绍
肽是由多个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物。作为多肽类药物已知有多种，例如，VVYP，是由氨基酸L-Val，L-Tyr和L-Pro按照L-val-L-val-L-Tyr-L-Pro的序列构成的四肽化合物，其最早是由日本的香川恭一教授利用酶解的方法制备的一种猪血蛋白混合物中的主要成分，见lifescience,1996,58(20):1745-1755，该猪蛋白混合物和VVYP具有降低胆固醇和血脂的作用。作为多肽类药物的制备方法，已知有生物合成和人工合成两种。例如，美国专利(US9233999B2)采用了一种重组蛋白的方法制备了VVYP。此外，美国专利(US5958885)中公开了一种VVYP的合成方法，但是该方法存在明显的缺陷，每一步都必须使用三氟乙酸，导致生产成本很高；三废比较多，使用氟化氢作为切割试剂将肽类从树脂上切割下来，氟化氢是剧毒的酸。
技术实现思路
为了克服上述现有技术中的问题，本专利技术人进行了长期锐意地研究，发现以树脂作为起始原料，将具有保护基团的氨基酸连接至树脂，然后脱去保护基团，依次连接各个氨基酸，然本文档来自技高网...

【技术保护点】
肽或其盐的制备方法，该方法包括：步骤A：以树脂作为起始原料，在碱性试剂的存在下，将具有α‑氨基保护基团的构成肽的C端的氨基酸连接至树脂，步骤B：用脱帽试剂将所述保护基团脱去，步骤C：在碱性试剂和偶联试剂存在下，按照肽的从C端到N端的顺序依次连接组成肽的各个氨基酸进行反应，从而形成肽连接树脂，其中，每个氨基酸的连接都是先连接具有α‑氨基保护基团的氨基酸进行接肽，然后用脱帽试剂将所述保护基团脱去进行脱帽，步骤D：进行切肽，得到肽或其盐的粗品，步骤E：纯化粗品，得到所述的肽或其盐。

【技术特征摘要】
1.肽或其盐的制备方法，该方法包括：步骤A：以树脂作为起始原料，在碱性试剂的存在下，将具有α-氨基保护基团的构成肽的C端的氨基酸连接至树脂，步骤B：用脱帽试剂将所述保护基团脱去，步骤C：在碱性试剂和偶联试剂存在下，按照肽的从C端到N端的顺序依次连接组成肽的各个氨基酸进行反应，从而形成肽连接树脂，其中，每个氨基酸的连接都是先连接具有α-氨基保护基团的氨基酸进行接肽，然后用脱帽试剂将所述保护基团脱去进行脱帽，步骤D：进行切肽，得到肽或其盐的粗品，步骤E：纯化粗品，得到所述的肽或其盐。2.权利要求1的制备方法，其中，步骤A中的所述树脂为2-氯三苯甲基氯树脂，碱性试剂选自：N,N-二异丙基乙氨(DIEA)和N-甲基吗啉(NMM)；步骤C中的碱性试剂选自：N,N-二异丙基乙氨和N-甲基吗啉；步骤C中偶联试剂选自O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(TBTU),O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、1-羟基苯并三唑(HOBT)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBop)。3.权利要求1-2中任一项的制备方法，其中，所述各步骤中接肽反应的温度是10～35℃，反应时间是0.5～8小时，脱帽反应的温度是20～35℃，反应时间是5～60分钟。4.权利要求1-3中任一项的制备方法，其中，所述各步骤中切肽试剂是三氟乙酸、三异丙基硅烷和水的混合物，三氟乙酸的比例是90～95％，三异丙基硅烷的比例是0～5％，水的比例是0～5％，在20～35℃切肽反应1～5小时。5.权利要求1-4中任一项的制备方法，其中，所述步骤E中的纯化是利用纳滤机进行的。6.权利要求1-5中任一项的制备方法，其中，所述步骤D中利用氮气吹干的方法得到了浓缩的粗品。7.权利要求1-6中任一项的制备方法，其中，在步骤A和步骤C中，具有α-氨基保护基团的氨基酸的投料量为，以摩尔数计，是所连接的树脂的1.5～6倍。在步骤A中，碱性试剂的投料量为(以摩尔数计)是所连接的树脂的2～10倍；在步骤C中，在连接每个氨基酸的接肽反应中，HBTU的投料量与具有α-氨基保护基团的氨基酸的量相等；HOBT的投料量为，以摩尔数计，是具有α-氨基保护基团的氨基酸的1.1～5倍；碱性试剂的投料量为，以摩尔数计，是具有保护基团的氨基酸的2～10倍，在步骤A-E中，氨基酸的α-氨基保护基团均为Fmoc；接肽试剂选自二氯甲烷，N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，N,N-二甲基乙酰胺，四氢呋喃和乙酸乙酯中的一种或更多种；脱帽试剂为哌啶(PIP):DMF等于1：2～10(体积比)；脱帽试剂的加入量和待脱帽的树脂的重量比例是5～25ml脱帽试剂/g树脂。8.权利要求1-7中任一项的制备方法，其中，所述肽选自：VVYP；AVLP；IGFP；LLIIVP...

【专利技术属性】
技术研发人员：金一，孙勇兵，王日康，杨世林，
申请(专利权)人：江西本草天工科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江西,36