用于预测屈光不正素因的方法和试剂技术
Methods and reagents for the prediction of ametropia
Provides methods and reagents for refractive errors based on prime opsin gene exon 3 splicing defects are used to determine the subjects of the. On the one hand, the invention provides a method for the determination of refractive factors, subjects include: (a) biological samples obtained from the test subjects, to determine one or more opsin gene in exon 3 splicing defects; and (b) one or more opsin gene in exon 3 splicing defects and ametropia associated factors.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预测屈光不正素因的方法和试剂交叉引用本申请要求于2015年2月27日提交的美国临时专利申请系列号62/126,284的优先权，其全部内容通过引用并入本文。背景许多人类疾病涉及基因剪接错误，包括囊性纤维化、杜氏肌营养不良和色素性视网膜炎。分别命名为OPN1LW和OPN1MW的L和M锥视蛋白基因编码L和M感光色素，并且每个在外显子2、3和4的序列中高度可变。最近，Ueyama等(Biochem.BiophysResCommun.，424，152，2012)发现与红绿色觉缺陷相关的锥视蛋白基因的变体导致剪接错误——其导致最终mRNA缺失外显子3。然而，L和M锥视蛋白基因中的剪接错误对屈光不正(refractiveerror)的影响是未知的。专利技术概述一方面，本专利技术提供了确定受试者屈光不正的素因的方法，包括：(a)测试从受试者获得的生物样品，以确定一个或多个视蛋白基因中的外显子3剪接缺陷；和(b)将一个或多个视蛋白基因中的外显子3剪接缺陷与屈光不正的素因相关联。在一个实施方式中，测试包括测试从受试者获得的生物样品，以确定与外显子3跳跃的视蛋白基因mRNA(“EX3...
【技术保护点】
用于确定受试者的屈光不正的素因的方法，包括：(a)测试从所述受试者获得的生物样品，以确定一个或多个视蛋白基因中的外显子3剪接缺陷；和(b)将一个或多个视蛋白基因中的外显子3剪接缺陷与屈光不正的素因相关联。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.27 US 62/126,2841.用于确定受试者的屈光不正的素因的方法，包括：(a)测试从所述受试者获得的生物样品，以确定一个或多个视蛋白基因中的外显子3剪接缺陷；和(b)将一个或多个视蛋白基因中的外显子3剪接缺陷与屈光不正的素因相关联。2.权利要求1所述的方法，其中所述测试包括测试从所述受试者获得的所述生物样品，以确定与外显子3跳跃的视蛋白基因mRNA(“EX3(-)mRNA”)相比的全长视蛋白基因mRNA的相对量；并且其中所述相关联包括将所述全长视蛋白基因mRNA与EX3(-)mRNA的相对量与屈光不正的素因相关联。3.权利要求2所述的方法，其中确定所述全长视蛋白基因mRNA与EX3(-)mRNA的相对量包括：(i)从存在于所述生物样品的视蛋白基因mRNA的cDNA产生扩增产物，其中所述扩增产物跨越外显子3；和(ii)检测对应于全长视蛋白基因mRNA的扩增产物和对应于EX3(-)mRNA的扩增产物。4.权利要求3所述的方法，其中检测所述扩增产物包括使用与邻近外显子3的末端的所述扩增产物结合的引物从所述扩增产物产生引物延伸产物。5.权利要求4所述的方法，其中通过MALDI-TOFF质谱法检测所述引物延伸产物。6.权利要求2所述的方法，其中确定所述全长视蛋白基因mRNA与EX3(-)mRNA的相对量包括：(i)产生所述生物样品中存在的视蛋白基因mRNA的cDNA；和(ii)检测对应于全长视蛋白基因mRNA的cDNA和对应于EX3(-)mRNA的cDNA。7.权利要求6所述的方法，其中所述检测包括(i)使所述cDNA与跨越外显子3并且能够选择性扩增所述一个或多个视蛋白基因的引物对在适合于扩增所述cDNA的条件下接触，和(ii)扩增所述cDNA以产生包括全长cDNA扩增产物的第一扩增产物群，和包括EX3(-)扩增产物的第二扩增产物群。8.权利要求6所述的方法，其中所述检测包括使所述cDNA与探针接触，所述探针具有与(I)对应于全长视蛋白基因mRNA的cDNA；和(II)对应于EX3(-)mRNA的cDNA的全序列互补性，其中所述接触在适合于所述探针与所述cDNA杂交的条件下...
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