肠癌临床耐药基因检测的标准品及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种肠癌临床耐药基因检测的标准品及其应用。该标准品包括：最低检测限参考品，最低检测限参考品至少包括两个不同级别的变异频率的DNA混合物，每个级别的变异频率的DNA混合物包括以下表1所示的突变位点。通过包含上述肠癌突变相关的多个基因突变位点的DNA混合物作为最低检测限参考品，且该标准品中包括至少两个级别的变异频率的DNA混合物，能够检验不同厂家的试剂盒在检测相应基因突变时，是否能检测出突变，以及所能检测的突变频率，从而能够验证各试剂盒的检测结果的准确性和可靠性，进而为临床用药提供相对准确的指导意义。

The standard and application of clinical drug resistance gene detection in colorectal cancer

The present invention provides a standard for the detection of the clinical resistance gene of colon cancer and its application. The standard includes: the lowest limit of reference, the lowest detection limit, the reference material contains at least two different levels of mutation frequency of the DNA mixture, each level of the frequency variation of the DNA mixture includes the following table 1 shows the mutation site. The DNA mixture containing the cancer mutations in several genes mutation as the lowest detection limit of reference DNA mixture comprises at least two levels of frequency variation and the standard of the test kit to different manufacturers in the detection of the corresponding gene mutation, whether can detect mutations, and can detect the mutation frequency, so as to verify the accuracy and reliability of test results of each kit, so as to provide a relatively accurate clinical significance.

【技术实现步骤摘要】
肠癌临床耐药基因检测的标准品及其应用
本专利技术涉及肠癌试剂盒检测领域，具体而言，涉及一种肠癌临床耐药基因检测的标准品及其应用。
技术介绍
近些年来，靶向治疗使肿瘤的死亡率得到了有效的控制。靶向治疗具有高选择性和低毒性等优点，可以长期指导临床用药，其作用机理是针对肿瘤细胞特有的靶点设计结合药物，避免了传统治疗方法的缺点，从而达到抑制肿瘤细胞分裂增殖的作用，对患者而言不仅延长了患者的生存时间还改善了患者的生存质量。目前，临床上已经确定的与肿瘤或癌症突变相关的基因有很多个，而当这些基因发生突变时，改变了细胞对相应的靶向药物的敏感性，从而引起耐药性。为了更有效地指导临床用药，需要对不同的患病个体进行相应肿瘤突变位点的检测，因而，市场上也出现了各种用于检测不同肿瘤或癌症的相关基因突变的检测试剂盒。而目前市场上各个不同厂家生产的检测试剂盒并无同一标准，因而，使用这类基因突变检测试剂盒的检测结果也存在差异，进而使得检测结果对临床用药的指导意义不大。针对这一现状，目前还没有很好的解决办法。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种肠癌临床耐药基因检测的标准品及其应用，以解决现有技术中肠癌基因突变的检测试剂盒的检测结果存在多样性而缺乏临床指导意义的问题。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种肠癌临床耐药基因检测的标准品，该标准品包括：最低检测限参考品，最低检测限参考品至少包括两个不同级别的变异频率的DNA混合物，每个级别的变异频率的DNA混合物包括以下表1所示的突变位点：表1：进一步地，最低检测限参考品包括L1级别的变异频率的DNA混合物和L2级别的变异频率的DNA混合物，其中，L1级别的变异频率的DNA混合物中，各突变位点的变异频率在1.6～7.5％之间，L2级别的变异频率的DNA混合物中，各突变位点的变异频率在0.68～4.9％之间。进一步地，L1级别的变异频率的DNA混合物和L2级别的变异频率的DNA混合物中，各突变位点的变异频率如下表2所示：表2：进一步地，标准品还包括L3级别的变异频率的DNA混合物，L3级别的变异频率的DNA混合物中各突变位点的变异频率在0.49～2.74％；更优选L3级别的变异频率的DNA混合物中各突变位点的变异频率如表3所示：表3：进一步地，标准品还包括L4级别的变异频率的DNA混合物，L4级别的变异频率的DNA混合物中各突变位点的变异频率在0.03～0.6％；更优选L4级别的变异频率的DNA混合物中各突变位点的变异频率如表4所示：表4：进一步地，每个级别的变异频率的DNA混合物的浓度均为5～10ng/μL；更优选为5ng/μL。进一步地，最低检测限参考品中的DNA混合物来源于肿瘤细胞系的DNA；优选采用的肿瘤细胞系包括A549细胞系、NCI-H2122细胞系、A427细胞系、NCI-H1573细胞系、NCI-H441细胞系、HCT116细胞系、THP-1细胞系、NCI-H2347细胞系、SK-HEP-1细胞系以及BEAS-2B细胞系。进一步地，标准品还包括阴性参考品；优选地，阴性参考品为最低限检测参考品中的突变位点为阴性的DNA；更优选，阴性参考品中DNA的浓度为5～10ng/μL；进一步优选为5ng/μL；更优选地，阴性参考品中DNA为细胞系DNA；更优选地，细胞系DNA为BEAS-2B细胞系DNA、AMO-1细胞系DNA、NCI-H596细胞系DNA以及NCI-H929细胞系DNA；进一步优选地，细胞系DNA为超声打断后的DNA产物。进一步地，标准品还包括阳性参考品；优选地，阳性参考品为表1所示的突变位点的DNA混合物；更优选，阳性参考品中的DNA混合物中各突变位点的变异频率如表2的L1级别所示。进一步地，标准品还包括至少两个级别的变异频率的重复性参考品；优选地，重复性参考品为表1所示的突变位点的DNA混合物；更优选，重复性参考品为表2所示的L1级别的变异频率的重复性参考品和L2级别的变异频率的重复性参考品。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了上述任一种标准品在检验肠癌突变基因检测试剂盒的灵敏度中的应用。应用本专利技术的技术方案，通过包含上述肠癌突变相关的多个基因突变位点的DNA混合物作为最低检测限参考品，且该标准品中包括至少两个级别的变异频率的DNA混合物，能够检验不同厂家的试剂盒在检测相应基因突变时，是否能检测出突变，以及所能检测的突变频率，从而能够验证各试剂盒的检测结果的准确性和可靠性，进而为临床用药提供相对准确的指导意义。具体实施方式需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。如
技术介绍
所提到的，现有技术中与癌症相关的基因突变的检测试剂盒的检测结果存在多样性而缺乏临床指导意义，而目前尚无有效的解决办法。在本申请一种典型的实施方式中，提供了一种肠癌临床耐药基因检测的标准品，该标准品包括：最低检测限参考品，最低检测限参考品至少包括两个不同级别的变异频率的DNA混合物，每个级别的变异频率的DNA混合物包括以下表1所示的突变位点：表1：由于市场上的肠癌相关的基因突变的检测试剂盒，不同厂家的试剂盒所能检测的基因突变频率不同，即对基因突变检测的准确性和灵敏度均存在差异。本申请的上述肠癌临床耐药基因检测的标准品，通过包含上述肠癌突变相关的多个基因突变位点的DNA混合物作为最低检测限参考品，且该标准品中包括至少两个级别的变异频率的DNA混合物，能够检验不同厂家的试剂盒在检测相应基因突变时，是否能检测出突变，以及所能检测的突变频率，从而能够验证各试剂盒的检测结果的准确性和可靠性，进而为临床用药提供相对准确的指导意义。在现有的基因突变检测试剂盒市场上，通过建立含有上述突变位点的不同变异频率的最低检测限参考品，即可为现有基因突变检测试剂盒的检测结果的准确性进行验证，进而为临床用药提供相对更准确的指导。对于上述两个不同级别的变异频率的DNA混合物，具体的变异频率设置根据目前市场上常规试剂盒能够检测的突变频率进行设置即可。在本申请一种优选的实施例中，最低检测限参考品包括L1级别的变异频率的DNA混合物和L2级别的变异频率的DNA混合物，其中，L1级别的变异频率的DNA混合物中，各突变位点的变异频率在1.6～7.5％之间，L2级别的变异频率的DNA混合物中，各突变位点的变异频率0.68～4.9％之间。在本申请一种更优选的实施例中，L1级别的变异频率的DNA混合物和L2级别的变异频率的DNA混合物中，各突变位点的变异频率如下表2所示：表2：理论上，作为标准品的同一级别的变异频率的DNA混合物中，各突变位点的变异频率最好一致，这样各突变位点在相同检测条件下被检出的概率就越接近，这样的标准品检测结果就越可信。但在实际操作中，难以实现各突变位点的变异频率完全一致这一理想的状态，而本申请经过无数次的实验验证，同一级别的变异频率的DNA混合物中，各突变位点的变异频率在上述范围内，也具有各突变位点在同样检测检测条件下都能被检出的优势。因而，将上述标准品用于检验各肠癌突变基因检测试剂盒的准确性和灵敏度，结果更可靠。为了进一步提高该标准品对不同试剂盒的检测灵敏度，在本申请一种优选的实施例中，标准品还包括L3级别的变异频率的D本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肠癌临床耐药基因检测的标准品，其特征在于，所述标准品包括：最低检测限参考品，所述最低检测限参考品至少包括两个不同级别的变异频率的DNA混合物，每个级别的所述变异频率的DNA混合物包括以下表1所示的突变位点：表1：

【技术特征摘要】
1.一种肠癌临床耐药基因检测的标准品，其特征在于，所述标准品包括：最低检测限参考品，所述最低检测限参考品至少包括两个不同级别的变异频率的DNA混合物，每个级别的所述变异频率的DNA混合物包括以下表1所示的突变位点：表1：2.根据权利要求1所述的标准品，其特征在于，所述最低检测限参考品包括L1级别的变异频率的DNA混合物和L2级别的变异频率的DNA混合物，其中，L1级别的变异频率的DNA混合物中，各所述突变位点的变异频率在1.6～7.5％之间，所述L2级别的变异频率的DNA混合物中，各所述突变位点的变异频率在0.68～4.9％之间。3.根据权利要求2所述的标准品，其特征在于，所述L1级别的变异频率的DNA混合物和所述L2级别的变异频率的DNA混合物中，各所述突变位点的变异频率如下表2所示：表2：4.根据权利要求2所述的标准品，其特征在于，所述标准品还包括L3级别的变异频率的DNA混合物，所述L3级别的变异频率的DNA混合物中各所述突变位点的变异频率在0.49～2.74％；更优选所述L3级别的变异频率的DNA混合物中各所述突变位点的变异频率如表3所示：表3：5.根据权利要求4所述的标准品，其特征在于，所述标准品还包括L4级别的变异频率的DNA混合物，所述L4级别的变异频率的DNA混合物中各所述突变位点的变异频率在0.03～0.6％；更优选所述L4级别的变异频率的DNA混合物中各所述突变位点的变异频率如表4所示：表4：6.根据权利要求1至5中任一项所述的标准品，其特征在于，每个级别的所述变异频率的DNA混合物的浓度均为5～10ng/μL；更优选为5ng/μL。7.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鑫媛，张春涛，刘东来，王海波，
申请(专利权)人：臻和北京科技有限公司，中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11