The invention discloses a device and a method for detection of tumor stem cell migration into the ball and the ability of the apparatus includes a lower chamber and the upper chamber, a filter chamber is arranged between the lower chamber and the upper chamber, second organic material film forming surface of the filtering chamber bottom, second organic materials for membrane aperture 20 50um; the first organic film formed on the bottom surface of the chamber, aperture of the first organic material film is 8 12um. The method is to suspend the tumor stem cells in DMEM medium and then turn them into the upper chamber. The stem cell culture medium is added into the lower chamber. After incubating in the incubator, the filtration chamber is washed, dyed and observed under microscope. The invention integrates the tumor cell ball formation experiment with the Transwell invasion and Migration Experiment skillfully, the same device can not only verify the ability of the stem cell's pelletizing, but also verify the invasion and migration ability of the stem cells, and improve the success rate and efficiency of the experiment.
【技术实现步骤摘要】
检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的装置及方法
本专利技术设计细胞学装置,具体是一种检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的装置及方法。
技术介绍
肿瘤干细胞对肿瘤的存活、增殖、转移及复发有着重要作用。从本质上讲,肿瘤干细胞通过自我更新和无限增殖维持着肿瘤细胞群的生命力;肿瘤干细胞的运动和迁徙能力又使肿瘤细胞的转移成为可能。因此肿瘤干细胞常常存在于缺氧小生境、血管小生境、侵袭小生境中,可以长时间处于休眠状态并具有多种耐药分子而对杀伤肿瘤细胞的外界理化因素不敏感,导致肿瘤复发、迁移,以致难以治愈。可见肿瘤干细胞是一群既具有自我更新能力又具有较强的侵袭迁移的细胞,而目前的实验均只能单方面证明肿瘤干细胞的自我更新能力或侵袭迁移能力。肿瘤细胞的成球实验(成球大小及数目)和Transwell侵袭迁移实验分别是衡量肿瘤细胞干性及迁移运动能力的金标准,但均具有缺陷性。在经典的肿瘤干细胞成球实验中,将肿瘤细胞放在干细胞培养基中培养,通常第二天即可观察到细胞球形成(具体成球时间依细胞类型而定)。通过显微镜下观察细胞球直径与个数来判断该细胞在该环境中的自我更新能力。然而形成的细胞球可能并未具有高侵袭迁移能力,并非所谓的具有高运动迁移能力的干细胞,即出现假阳性结果。而在经典的Transwell侵袭迁移实验中,对于多见的贴壁细胞,常用且普遍采用的是将细胞种在Transwell小室,在血清或趋化因子的诱导下细胞穿过小室薄膜并在小室底面贴壁生长,然后进行经典染色操作(结晶紫或DAPI)去计数穿过小室的细胞数量。然而对于干细胞因其悬浮生长的特点,不贴壁,所以在经典的实验操作过程中极易造 ...
【技术保护点】
一种检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的装置,包括下室(1)和上室(2),其特征在于:在所述下室(1)和上室(2)之间设置有过滤室(3),过滤室(3)的底面形成第二有机材料膜(5),第二有机材料膜(5)的孔径为20‑50um;所述上室(2)的底面形成第一有机材料膜(4),第一有机材料膜(4)的孔径为8‑12um。
【技术特征摘要】
1.一种检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的装置,包括下室(1)和上室(2),其特征在于:在所述下室(1)和上室(2)之间设置有过滤室(3),过滤室(3)的底面形成第二有机材料膜(5),第二有机材料膜(5)的孔径为20-50um;所述上室(2)的底面形成第一有机材料膜(4),第一有机材料膜(4)的孔径为8-12um。2.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的装置,其特征在于:所述上室(2)为上端开口的圆台型结构,其上缘均布多个弧形缺口(7)且沿上室(2)的外圆周壁均布多个挂件(6)弧形缺口(7)与挂件(6)交错分布。3.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的装置,其特征在于:所述过滤室(3)为上端开口的圆台型结构,其上缘向外形成凸台(8)。4.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的装置,其特征在于:所述第二有机材料膜(5)的孔径为20um。5.根据权利要求1所述的一种检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的装置,其特征在于:所述第一有机材料膜(4)的孔径为8um。6.一种检测肿瘤干细胞成球能力和迁移运动能力的方法,其特征在于:包括以下步骤:a.将成球的肿瘤干细胞消化成单个细胞,并用PBS缓冲液洗涤后重悬于D...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨学军,易立,童鹿青,张辰,海龙,李涛,
申请(专利权)人:天津医科大学总医院,
类型:发明
国别省市:天津,12
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