外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统技术方案

本发明专利技术公开了一种外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统。其中，该方法包括以下步骤：S1，采用红细胞密度离心分离介质将外周血细胞中的红细胞去除；以及S2，使用流式细胞分选法将B淋巴细胞从去除了红细胞的外周血细胞中分选出来。应用本发明专利技术的技术方案，能够快速、高效地将人的体液样品中的所有红细胞与血液中的其它有核白细胞包括淋巴瘤细胞进行有效分离，不会对人血液内的各种细胞(包括肿瘤细胞)产生任何影响，从而很好地保持了原有的细胞形态，以极大地便于利用流式细胞仪进行肿瘤细胞分选以及后续的鉴别与判断。

The method, kit and system for the separation of B lymphocytes in peripheral blood and the kit and system for identification of hematogenous lymphoid tumor cells

The invention discloses a method, a kit and a system for the separation of B lymphocytes in the peripheral blood, and a kit and system for identifying the blood derived lymphoid tumor cells. The method includes the following steps: S1, removing erythrocytes from peripheral blood cells by using red cell density centrifugation separation medium, and S2, sorting out B lymphocytes from peripheral blood cells which remove red blood cells by flow cytometry. The technical scheme of the invention can quickly and efficiently all red blood cells and blood fluid samples in the other white blood cells including lymphoma cells effectively, not in the blood of the various cells (including tumor cells) have no effect, so as to maintain the original cell to form, greatly facilitate tumor cell sorting and subsequent identification and judgment by flow cytometry.

【技术实现步骤摘要】
外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统
本专利技术涉及生物医学
，具体而言，涉及一种外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统。
技术介绍
恶性淋巴瘤是一组起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤的总称。其中高发病率的B细胞非霍奇金淋巴瘤类别中的弥漫性大B细胞淋巴瘤是成人最常见的恶性淋巴瘤。由于淋巴瘤具有高度异质性，其治疗上也差别很大(如放、化疗，手术等)，不同病理类型和分期的淋巴瘤无论从治疗强度还是预后上都存在很大差别。B细胞淋巴瘤的预后和治疗取决于淋巴瘤的具体类型以及分期分级。在B细胞淋巴瘤病人体内有效分离血源性淋巴瘤细胞，首先必须去除血液中的大量红细胞。目前临床或医学实验中通用的去除红细胞的方法是使用低渗裂解法裂解去除红细胞。然而在低渗裂解过程中，伴随着红细胞的裂解，许多淋巴肿瘤细胞也受到了的损害，使细胞形态与特性发生改变，从而严重影响了后续的一系列针对肿瘤细胞的鉴别性实验。荧光原位杂交(FluorescenceinsituHybridization，FISH)技术用于病理组织中的肿瘤细胞检测已有广泛报道。其中一项主要技术应用即为使用荧光标记的染色体着丝粒特异探针对体液中处于间期的肿瘤细胞进行染色体数目的识别(正常细胞染色体为二倍体)，以发现存在于肿瘤细胞内的非二倍体染色体，即超二倍体或多倍体染色体，从而达到识别肿瘤细胞的目的。目前临床上偶有使用某一特定染色体探针检测淋巴瘤细胞的染色体异倍体的报道，但染色体异常细胞可见于血小板增生引起的血中某些白细胞染色体数目异常，或人体内自然形成的某些少量白细胞染色体数目异常，以及染色体探针非特异着色引起的血细胞假阳性染色体数目异常，因此单独进行染色体数目异常检测判断肿瘤细胞势必会有不可忽视的假阳性。近来已有所报道，原癌基因在淋巴瘤上呈阳性表达的病人，其生存率明显降低。因此，原癌基因的表达可作为判断淋巴瘤病人预后的独立指标之一。目前临床上常规开展的原癌基因表达主要是针对病理标本使用免疫染色方法进行原癌基因蛋白表达的检测。但此类单纯的免疫染色对于那些原癌基因不表达的肿瘤细胞，则会造成不可避免的假阴性判别。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统，以解决现有技术中周血中分选B淋巴细胞容易造成B淋巴细胞损失的技术问题。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种从外周血中分选B淋巴细胞的方法。该方法包括以下步骤：S1，采用红细胞密度离心分离介质将外周血细胞中的红细胞去除；以及S2，使用流式细胞分选法将B淋巴细胞从去除了红细胞的外周血细胞中分选出来。进一步地，红细胞密度离心分离介质在20℃下的比重为1.080～1.081克/毫升，红细胞密度离心分离介质包含：硫酸铁、氯化锌、硝酸铁中的一种和蔗糖。进一步地，步骤S1具体包括：将外周血离心后去掉血浆，将得到的外周血细胞加入到红细胞密度离心分离介质的顶层，离心，收集上层去除了红细胞的外周血细胞。进一步地，步骤S2具体包括：将去除了红细胞的外周血细胞加入荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体，孵育，然后洗涤除去未结合的荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体，使用流式细胞仪分选得到B淋巴细胞。进一步地，荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体特异性地识别下述人的B细胞表面标示物的一种或多种CD5、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD30、CD38、CD43、CD45、CD77、CD79a。根据本专利技术的另一个方面，提供一种用于从外周血中分选B淋巴细胞的试剂盒。该试剂盒包括：红细胞密度离心分离介质、缓冲液和荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体。进一步地，红细胞密度离心分离介质在20℃下的比重为1.080～1.081克/毫升，红细胞密度离心分离介质包含硫酸铁、氯化锌、硝酸铁中的一种和蔗糖。进一步地，荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体特异性地识别下述人的B细胞表面标示物的一种或多种CD5、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD30、CD38、CD43、CD45、CD77、CD79a。根据本专利技术的再一个方面，提供一种用于从B细胞淋巴瘤病人的外周血中分选、提取及鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒。该试剂盒包括：红细胞密度离心分离介质、缓冲液、荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体、荧光标记的抗淋巴细胞肿瘤标示物抗体和染色体倍体检测探针。进一步地，红细胞密度离心分离介质在20℃下的比重为1.080～1.081克/毫升，红细胞密度离心分离介质包含硫酸铁、氯化锌、硝酸铁中的一种和蔗糖。进一步地，荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体特异性地识别下述人的B细胞表面标示物的一种或多种CD5、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD30、CD38、CD43、CD45、CD77或CD79a。进一步地，荧光标记的抗淋巴细胞肿瘤标示物抗体特异性地识别下述一种或多种抗原：ki-67、Bcl-2、Bcl-6、EGFRvIII、C-myc、MUM1、PAX5、OCT2或BOB1。进一步地，染色体倍体检测探针为12号染色体着丝粒探针。根据本专利技术的又一个方面，提供一种从外周血中分选B淋巴细胞的系统。该系统包括上述任一种从外周血中分选B淋巴细胞的试剂盒。进一步地，系统还包括流式细胞分选仪。根据本专利技术的再一个方面，提供一种用于从B细胞淋巴瘤病人的外周血中分选、提取及鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的系统。该系统包括上述任一种用于从B细胞淋巴瘤病人的外周血中分选、提取及鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒。进一步地，系统还包括流式细胞分选仪、半自动或全自动免疫分析仪。应用本专利技术的技术方案，利用红细胞密度离心分离介质可以将外周血中的红细胞与白细胞细胞进行快速有效的分离，在无融破裂解红细胞实验步骤的情况下，在不丢失血中B淋巴细胞的基础上，可以取得令人满意的实验结果，证明利用此方法能够快速、高效地将人的体液样品中的所有红细胞与血液中的其它有核白细胞包括淋巴瘤细胞进行有效分离，不会对人血液内的各种细胞(包括肿瘤细胞)产生任何影响，从而很好地保持了原有的细胞形态，以极大地便于利用流式细胞仪进行肿瘤细胞分选以及后续的鉴别与判断。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1示出了实施例1中B淋巴细胞分选结果示意图；图2示出了实施例1中红细胞分离介质(即红细胞密度离心分离介质)和红细胞裂解液在分离过程中对B淋巴细胞的影响；图3示出了实施例1中红细胞分离介质(即红细胞密度离心分离介质)去除红细胞后和红细胞裂解液裂解红细胞后B淋巴细胞染色细胞形态观察；以及图4示出了实施例1中B淋巴瘤细胞鉴定结果示意图。具体实施方式需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本专利技术。针对
技术介绍
中描述的技术问题，专利技术人发现，如何在淋巴瘤病人标本上联合检测原癌蛋白表达与淋巴瘤细胞的另一个显著特征-染色体异倍体拷贝数，成为需要迫切解决的现实问题。为此，本专利技术一方面提供了利用红细胞密度离心分离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从外周血中分选B淋巴细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，采用红细胞密度离心分离介质将外周血细胞中的红细胞去除；以及S2，使用流式细胞分选法将B淋巴细胞从去除了红细胞的外周血细胞中分选出来。

【技术特征摘要】
1.一种从外周血中分选B淋巴细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，采用红细胞密度离心分离介质将外周血细胞中的红细胞去除；以及S2，使用流式细胞分选法将B淋巴细胞从去除了红细胞的外周血细胞中分选出来。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述红细胞密度离心分离介质在20℃下的比重为1.080～1.081克/毫升，所述红细胞密度离心分离介质包含：硫酸铁、氯化锌、硝酸铁中的一种和蔗糖。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：将所述外周血离心后去掉血浆，将得到的外周血细胞加入到所述红细胞密度离心分离介质的顶层，离心，收集上层去除了红细胞的外周血细胞。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：将去除了红细胞的外周血细胞加入荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体，孵育，然后洗涤除去未结合的所述荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体，使用流式细胞仪分选得到所述B淋巴细胞。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体特异性地识别下述人的B细胞表面标示物的一种或多种CD5、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD30、CD38、CD43、CD45、CD77、CD79a。6.一种用于从外周血中分选B淋巴细胞的试剂盒，其特征在于，包括：红细胞密度离心分离介质、缓冲液和荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述红细胞密度离心分离介质在20℃下的比重为1.080～1.081克/毫升，所述红细胞密度离心分离介质包含硫酸铁、氯化锌、硝酸铁中的一种和蔗糖。8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体特异性地识别下述人的B细胞表面标示物的一种或多种CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彦萍，
申请(专利权)人：李彦萍，
类型：发明
国别省市：江苏,32