人外周血微泡中的ＭＩＲＮＡ表达和其用途制造技术

本发明专利技术提供新的方法和组合物，其通过检查包含微泡的样品和其中的ｍｉＲ而用于病症的诊断、预后和治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人外周血微泡中的MIRNA表达和其用途专利技术人 :Clay B. Marsh, Melissa G. Hunter, Noura Ismail优先权要求和关于联邦政府赞助的研究的声明本申请要求2007年9月14日提交的美国临时专利申请60/993，809和2008年5 月22日提交的美国临时专利申请61/055，178的优先权，其通过引用完整地并入本文。本 专利技术并非由任何政府做出并且政府在本专利技术中没有权利。
技术介绍
微RNA(miRNA或miR)是动物和植物中表达的小的非编码RNA。它们调节细胞功 能、细胞存活、细胞活化和发育期间的细胞分化。7 ；8微RNA是19-25个核苷酸RNA的小的非编码家族，其通过以序列特异性方式靶向 信使RNA (mRNA)，诱导翻译抑制或mRNA降解(取决于miRNA和它们的靶之间的互补程度) 来调节基因表达(Bartel，D. P. (2004)Cell 116,281-297 ；Ambros. V. (2004)Nature 431， 350-355)。许多miR在序列上在远缘生物体之间是保守的，表明这些分子参与重要过程。 的确，miR参与发育期间基因表达的调节(Xu, P.等(2003) Curr. Biol. 13，790-795)，细胞 增殖(Xu, P.等(2003) Curr. Biol. 13，790-795)，细胞凋亡(Cheng，A.M.等(2005)Nucl. AcidsRes. 33，1290-1297)，葡萄糖代谢(Poy,M. N.等(2004) Nature 432，226-230)，压力抗 性(Dresios, J.等(2005)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102，1865-1870)和癌症(Calin, G. A 等(2002)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99,1554-15529 ；Calin, G. A.等(2004)Proc. Natl. Acad. Sci USAlOl，11755-11760 ；He，L.等(2005) Nature 435,828-833 ；和 Lu，J.等(2005) Nature 435 :834_838)。还有强有力的证据表明miR在哺乳动物造血中起作用。在小鼠中，miR-181、 miR-223和miR-142在造血组织中差异表达，并且它们的表达在造血和谱系定向(lineage commitment)期间被调节(Chen, C. Ζ.等(2004) Science 303,83-86) miR-181 在鼠造血祖 细胞中的异位表达导致B细胞区室中的增殖(Chen，C. Ζ.等(2004) Science 303,83-86) 鼠造血系统的细胞中的系统性miR基因特征谱分析显示与神经元组织相比造血系统中不 同的miR表达模式，并且鉴定了在细胞分化期间发生的单独的miR表达变化(Monticelli， S.等(2005)GenomeBiology 6，R71)。最近的研究已经鉴定，miR-221 和 miR-222 在 CD34+ 脐血祖细胞的人红细胞生成培养物中下调(Felli，N.等(2005)Proc. Natl. Acad. Sci USA. 102,18081-18086) ο已发现这些miR靶向癌基因c_Kit。进一步的功能研究表明这两 种miR在红细胞生成培养物中的下降在翻译水平上开启了 Kit蛋白产生，导致早期红系细 胞的扩增(FelIi,N.等(2005)Proc. Natl. Acad. Sci USA. 102，18081-18086)。与 miR 调控 细胞分化的假说一致，发现miR-223是牵涉C/EBPa和NFI-A的调控回路(circuit)的关键 成员，其在全反视黄酸处理的急性早幼粒细胞性白血病细胞系中控制粒细胞的分化(Fazi， F.等(2005)Cell 123,819-831)。在B细胞慢性淋巴细胞性白血病中已鉴定到两种miR的频繁缺失和降低的表达9。 这些发现促进了很多的论文，其证明miR在头颈癌，小细胞肺癌，胶质母细胞瘤，乳腺癌，慢 性淋巴细胞性白血病和Burkitt淋巴瘤中异常表达9_12。最近，已经报道了巨噬细胞中炎症和miR之间的关系。13为了检测此类病症，已获得组织样品以证实此类巨噬细胞的存在。另外，至今，一直没有报道证明在血液中循环的微泡(microvesicle)包含miR。本专利技术的另外的优势，目的和特征将部分地在随后的说明书中阐明并且在检查下 列内容后对本领域技术人员来说将部分地变得显然，或可以从本专利技术的实践中认识到。如 附加的权利要求中特别指出的，可以实现和获得本专利技术的目的和优势。专利技术概述在一个方面中，提供了用于鉴定特定miR的方法，所述miR存在于微泡中，和/或 在组织、液体和/或细胞中具有改变的特定miR的表达水平。微泡促进细胞之间的联系。许多细胞(包括巨噬细胞、血小板、T-细胞和肿瘤)释 放包含核酸和/或蛋白的小的微泡1A包含在微泡内的因子调节血管发生、细胞生长和细 胞分化1;3。在另一个方面中，确定了 miR在液体例如患特定病症的患者的外周血中的存在。在另一个方面中，确定了 miR在患肺纤维化的患者的肺组织中的存在。在另一个方面中，本文提供了诊断或预测受试者(例如，人)中的特定病症的方 法。根据一种特定的方法，将来自受试者的受试样品中至少一种miR基因产物的水平与对 照样品中相应的miR基因产物的水平进行比较。相对于对照样品中相应的miR基因产物的 水平，受试样品中miR基因产物水平的变化(例如增加，减少)表示受试者患有急性炎性病 症，或者处于发生急性炎性病症的风险中。在一个实施方案中，来自受试者的受试样品中miR基因产物的水平大于对照的水 平。在另一个实施方案中，所述至少一种miR基因产物选自本文所示的miRNA。在特定的实施方案中，被诊断或预测的病症是导致单核吞噬细胞和/或THP-I细 胞释放微泡的病症。在特定的实施方案中，被诊断或预测的病症是引起炎性应答的病症。在另一个实施方案中，本专利技术是治疗受试者(例如，人)的癌症和/或炎性病症的 方法。在一个特定的方法中，将有效量的用于抑制至少一种miR基因产物的表达的化合 物施用给受试者，所述miR基因产物选自表I-VI中的一个或多个组。在一个实施方案中，用于抑制至少一种miR基因产物的表达的化合物抑制选自表 I-VI中的一个或多个组的miR基因产物的表达。本专利技术进一步提供了用于治疗癌症和/或炎性病症的药物组合物。在一个实施方 案中，本专利技术的药物组合物包含至少一种miR表达抑制化合物和药学上可接受的载体。在 特定的实施方案中，所述至少一种miR表达抑制化合物对miR基因产物是特异的，所述miR 基因产物的表达，与正常相比，在来自患病的患者的血液中更高。在另一个实施方案中，药物组合物还包含至少一种抗炎剂。在一个实施方案中，本专利技术是用于治疗与miR基因产物的过表达有关的癌症和/ 或与miR基因产物的过表达有关的肺部病症的药物组合物。此类药物组合物包括有效量的 至少一种miR基因产物和药学上可接受的载体，其中所述至少一种miR基因产本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断或预测受试者中的疾病或病症的方法，其包括：ｉ）确定来自受试者的包含微泡的样品中至少一种ｍｉＲ基因产物的水平；和ｉｉ）将样品中所述至少一种ｍｉＲ基因产物的水平与对照进行比较，其中与对照的水平相比，来自受试者的样品中所述至少一种ｍｉＲ基因产物的水平的增加诊断或预测所述病症。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-9-14 60/993,809;US 2008-5-22 61/055,178一种诊断或预测受试者中的疾病或病症的方法，其包括i)确定来自受试者的包含微泡的样品中至少一种miR基因产物的水平；和ii)将样品中所述至少一种miR基因产物的水平与对照进行比较，其中与对照的水平相比，来自受试者的样品中所述至少一种miR基因产物的水平的增加诊断或预测所述病症。2.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物选自表I中所示的组和其组合。3.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物选自表II中所示的过滤后的表 达的血浆miR的组和其组合。4.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物选自表III中所示的组和其组合。5.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物选自表IV中所示的组和其组合。6.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物选自表V中所示的组和其组合。7.权利要求1的方法，其中所述至少一种miR基因产物选自表VI中所示的组和其组合。8.—种生物标志物，其包含一种或多种微泡作为疾病病因学的生物标志物和先天免疫 应答的系统性介体。9.权利要求8的生物标志物，其中所述生物标志物分离自外周血中的微泡。10.权利要求1的方法，其中所述病症在表I中列出，包括结肠腺癌，结肠直肠癌，前列 腺癌，肺癌，乳腺癌，B细胞淋巴瘤，胰腺癌，弥漫性大BCL癌，CLL，膀胱癌，肾癌，缺氧-肿瘤， 子宫平滑肌瘤，卵巢癌，丙型肝炎病毒相关肝细胞癌，ALL，阿尔茨海默病，骨髓纤维化，骨髓 纤维化，真性红细胞增多症，血小板增多症，HIV, HIV-I潜伏期。11.权利要求1的方法，其中所述表达的miRNA发现于血浆微泡中并且包括下列的一 种或多种miR-223、miR-484、miR-191、miR_146a、miR-016、miR_026a、miR-222、miR-024、 miR-126 和 miR-32。12.权利要求1的方法，其中所述表达的miR发现于PBMC中并且包括下列的一种或 多种miR-223、miR-150、miR_146b、miR-016、miR-484、miR_146a、miR-191、miR_026a、 miR-O19b 和 miR_020a。13.权利要求1的方法，其中所述疾病是结肠腺癌并且至少下列MiR上调miR-20a、 miR-21、miR-106a、miR-181b 和 miR-203。14.权利要求1的方法，其中所述疾病是结肠直肠癌并且至少下列MiR上调miR-19a、 miR-21、miR-127、miR-31、miR-96、miR-135b 和 miR-183 ；并且至少下列 miR 下调miR_30c、 miR-133a、miR-143、miR-133b 和 miR-145。15.权利要求1的方法，其中所述疾病是前列腺癌并且至少下列MiR上调mir21；并且 至少下列 miR 下调15a、miR-16-l、miR-143 和 miR-145。16.权利要求1的方法，其中所述疾病是肺癌并且至少下列MiR上调miR-17-92、 miR-19a、miR-21、miR-92、miR-155、miR-191、miR-205 和 miR-210 ；并且至少下列 miR 下调 miR-let_7017.权利要求1的方法，其中所述疾病是乳腺癌并且至少下列MiR上调miR-21和miR-155 ；并且至少下列 miR 下调miR_125b 和 miR-145。18.权利要求1的方法，其中所述疾病是B细胞淋巴瘤并且至少下列MiR上调 miR—155、miR—17—92、miR-19a> miR—92、miR—142、miR—155、miR—221、miR—17—92、miR-19a> miR-21、miR-92、miR-155、miR-191、miR-205 和 miR-210。19.权利要求1的方法，其中所述疾病是胰腺癌并且至少下列MiR上调miR-103、 miR-107、miR-18a、miR-31、miR-93、miR-221、miR-224 和 miR-155 ；并且至少下列 miR 下调 miR—133ει、miR—216、miR—217。20.权利要求1的方法，其中所述疾病是弥漫性大BCL并且至少下列MiR上调miR-155 和 miR-17-92。21.权利要求1的方法，其中所述疾病是慢性淋巴细胞性白血病并且至少下列MiR上 调miR-23b、miR-24-l、miR-146、miR-155、miR-195、miR-221、miR-331、miR-29a、miR-195、 miR-34a 和 miR_29c ；并且至少下列 miR 下调miR_15a、miR-16-1、miR-29 和 miR-223。22.权利要求1的方法，其中所述疾病是膀胱癌并且至少下列MiR上调miR-223、 miR-26b、miR-22 1、miR-103—1、miR-185、miR_23b、miR-203、miR-17_5p、miR-23a 禾口 miR-205。23.权利要求1的方法，其中所述疾病是肾癌并且至少下列MiR上调miR-28、 miR-185、miR-27 和 miR-let_7f-2。24.权利要求1的方法，其中所述疾病是缺氧_肿瘤并且至少下列MiR上调miR-23、 miR-24、miR-26...

【专利技术属性】
技术研发人员：CB马什，MG皮珀，N伊斯梅尔，
申请(专利权)人：俄亥俄州立大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：US[美国]