一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置制造方法及图纸
【技术实现步骤摘要】
一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置
本专利技术涉及一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置，特别是涉及一种利用藻毒素产毒基因检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置。
技术介绍
湖泊水体富营养化会引发蓝藻水华的爆发，蓝藻水华已成为我国乃至世界所面临的重大环境污染问题之一。蓝藻水华中有部分蓝藻能产生藻毒素，例如铜绿微囊藻，铜绿微囊藻是水体中最为常见的蓝藻，它是水体中的初级生产者，在水环境中发挥着重要的作用。铜绿微囊藻可以产生微囊藻毒素(microcystin，MC)，它是一种环状的寡肽肝毒素，在全世界很多国家的天然水体中都能检测到微囊藻毒素。微囊藻毒素(microcystin，MC)影响浮游植物、无脊椎动物和脊椎动物的生长。MC可以导致水体内细菌、原生动物和其他浮游植物(包括硅藻和绿藻)中毒，抑制它们生长繁殖，改变食物链结构，使得铜绿微囊藻成为优势藻种。MC不仅对水体中其他生物具有危害作用，而且还对湖泊、河流生态、牲畜和人类水源供给带来负面影响，研究表明，生活在蓝藻水华高发地区的人群，肝癌发病率要明显高于其他地区，因此，针对产微囊藻毒素蓝藻的检测的研究已成为环保领域的研究热点...
【技术保护点】
一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法，包括如下步骤：步骤一，取地表水水样，经过微孔过滤后，将滤膜进行总DNA提取纯化，得到DNA样本；步骤二，以步骤一获得的DNA样本为模板进行PCR扩增；步骤三，对PCR扩增产物进行纯化；步骤四，将纯化后的DNA进行质粒转化过程，获得转化了质粒的白色菌落；步骤五，选取饱满的单菌落接种于培养液中，并振荡培养过夜，以用于菌液PCR鉴定和测序分析；步骤六，将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒，测定质粒浓度后，梯度稀释，将稀释后的质粒作为标准样品，建立标准样品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线，即得到标准曲线；步骤七，取步骤一中得到的DNA样本作为模板...
【技术特征摘要】
1.一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法，包括如下步骤：步骤一，取地表水水样，经过微孔过滤后，将滤膜进行总DNA提取纯化，得到DNA样本；步骤二，以步骤一获得的DNA样本为模板进行PCR扩增；步骤三，对PCR扩增产物进行纯化；步骤四，将纯化后的DNA进行质粒转化过程，获得转化了质粒的白色菌落；步骤五，选取饱满的单菌落接种于培养液中，并振荡培养过夜，以用于菌液PCR鉴定和测序分析；步骤六，将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒，测定质粒浓度后，梯度稀释，将稀释后的质粒作为标准样品，建立标准样品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线，即得到标准曲线；步骤七，取步骤一中得到的DNA样本作为模板，进行定量PCR测定获得待测样本，根据所述标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。2.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法，其特征在于：于步骤二中，采用PCR反应体系为50μL，引物信息为：上游引物5’-GCCCACAAAACCCCAACTC-3’，下游引物5’-TTTCTGCCTAATCTTTTCCCCTCT-3’；反应程序为：95℃预变性5分钟，随后94℃30秒，退火温度60℃40秒和72℃延伸40秒，进行30个循环，最终72℃延伸10分钟；最后通过1.5％的琼脂糖凝胶电泳确认PCR扩增产物。3.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法，其特征在于：于步骤三中，利用DNA胶回收试剂盒进行胶回收，对PCR扩增产物进行纯化，并通过1.5％的琼脂糖凝胶电泳确认回收是否成功。4.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法，其特征在于：于步骤四中，将经步骤三纯化后的DNA插入质粒载体中，并进一步转化到DH5α感受态大肠杆菌溶液，然后涂布到加入Amp抗性的LB固体培养基上，通过蓝白斑筛选，挑选转化了质粒的白色菌落。5.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法，其特征在于：于步骤五中，选取饱满的单菌落接种于含有Amp的液体LB培养液中，于37℃、200转/分钟振荡培养过夜，以用于菌液PCR鉴定和测序分析。6.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法，其特征在于，步骤七进一步包括：加入实时定量PCR所需试剂，反应体系为20μL，2μLDNA样品；设置进行阴性对照和阳性对照，以去离子水作为阴性对照，以产微囊藻毒素蓝藻的DNA作为阳性对照；进行实时定量PCR反应，进行PCR扩增；反应结束后，将DN...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕾，张东，姜蕾，王先云，吴雪飞，
申请(专利权)人：上海城市水资源开发利用国家工程中心有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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