本发明专利技术公开了基因ClC‑3在制备治疗肥胖症药物中的应用。在经过符合伦理学的途径收集不同BMI人群的脂肪组织并进行分析，发现了本发明专利技术所述新药物靶点ClC‑3基因表达水平与BMI升高显示肥胖程度存在明显正相关。在高脂饮食诱导肥胖小鼠模型中，与正常基因型相比ClC‑3基因敲除小鼠能够显著对抗高脂饮食诱导的腹部脂肪体积肥大和体重增加，并显著抑制肥胖合并的代谢紊乱和腹部脂肪炎症。本发明专利技术发掘了ClC‑3作为新的控制肥胖的药物靶点，开拓了一个新的应用领域，具有很好的发展前景。
ClC gene 3 in preparation for the application of obesity drugs
The invention discloses a gene ClC 3 in preparation for the application of obesity drugs. After the way ethical collection of different BMI groups of adipose tissue and analysis, found the new drug targets ClC 3 gene expression level with increased BMI shows there is a significant positive correlation between the degree of obesity. In high fat diet induced obese mice, compared with normal ClC genotype 3 gene knockout mice could induce significantly against high fat diet abdominal fat volume hypertrophy and weight increase, and significantly inhibit obesity and metabolic disorders and abdominal fat inflammation. The invention discovers ClC 3 as a new target of drug control obesity, and develops a new application field, has good prospects for development.
【技术实现步骤摘要】
基因ClC-3在制备治疗肥胖症药物中的应用
本专利技术涉及基因ClC-3，具体地说，涉及基因ClC-3的肥胖应用。
技术介绍
ClC-3是电压门控氯离子通道(ChlorideChannels,ClC)蛋白家族中的成员，目前发现其作为细胞膜氯离子通道或细胞内反向转运子参与跨膜氯离子转运，并因此参与调控调控细胞容积、细胞增殖和凋亡、胰岛素分泌等细胞基本生理功能，并可能参与高血压血管重构、血管炎症和肿瘤转移等病理生理过程。肥胖(Obesity)是指体内脂肪细胞的体积和细胞数增加，同时局部脂肪异常过度沉积以及体脂占体重的百分比异常增高。肥胖与多种心血管和代谢性疾病密切相关，已成为威胁全球人类健康的一个严重的公共卫生问题。已证实腹部肥胖是导致糖尿病、高血压、冠心病、动脉粥样硬化、脂肪肝和某些癌症的重要危险因素，减重即可明显降低上述疾病的发病率，并改善机体心血管、免疫、能量代谢等功能，预防和治疗肥胖症及其合并症对于提高人群生活质量和延长人均寿命具有重要意义。正常脂肪组织更新为前脂肪细胞增殖和分化形成成熟的脂肪细胞，小体积脂肪细胞具有胰岛素敏感性，而病理性肥胖时脂肪细胞体积明显增大，而胰岛素敏感性显著降低，表现为大体积脂肪细胞在总脂肪细胞中百分率明显增加，脂肪细胞增殖分化能力下降，整体表现为糖、脂肪代谢紊乱，脂肪炎症反应水平明显增高；随肥胖水平增加，胰岛素抵抗水平升高，促进肥胖相关心血管和代谢性疾病的发生发展。因此减小脂肪细胞体积(在整体表现为减重和减少腹部脂肪体积)，进而降低脂肪组织炎症是预防肥胖症及其相关疾病的重要策略和靶标。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供ClC-3基因作为药物靶点在筛选和制备治疗肥胖症及相关疾病药物中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术经过大量实验，发现基因ClC-3作为药物靶点能用于制备治疗肥胖症药物。基因ClC-3能用于抑制增大的脂肪细胞体积，减少脂肪组织炎症。上述肥胖症包括身体质量指数(BodyMassIndex，BMI)≥25Kg/m2。ClC-3基因改善肥胖作用包括减弱脂肪细胞成脂作用、降低内脏脂肪沉积、减少腹部脂肪重量和体积、减轻脂肪组织炎症和控制体重。上述肥胖症相关疾病是指肥胖合并症中的一种或几种，包括高血压、2型糖尿病、动脉粥样硬化、冠心病、脂肪肝，且并不限于上述疾病。上述控制体重是指等量饮食摄入量下体重增长维持在较低水平。应用抑制ClC-3基因策略制备的药物可包括基因药物和化学药物，且并不限于上述类型药物。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：在经过符合伦理学的途径收集不同BMI人群的脂肪组织并进行分析，发现了本专利技术所述新药物靶点ClC-3基因表达水平与BMI升高显示肥胖程度存在明显正相关。在高脂饮食诱导肥胖小鼠模型中，与正常基因型相比ClC-3基因敲除小鼠能够显著对抗高脂饮食诱导的腹部脂肪体积肥大和体重增加，并显著抑制肥胖合并的代谢紊乱和腹部脂肪炎症。本专利技术发掘了ClC-3作为新的控制肥胖的药物靶点，开拓了一个新的应用领域，具有很好的发展前景。附图说明：图1：人群ClC-3mRNA、蛋白质水平及形态学分析ClC-3水平与肥胖程度的相关性，收集人群大网膜脂肪组织并在(A)mRNA及(B)蛋白质水平上分析不同人群ClC-3水平与BMI值的相关性；(C)脂肪细胞体积与ClC-3水平的相关性分析；(D)高脂诱导的小鼠肥胖模型中白色脂肪组织ClC-3水平与饲育时长的相关性分析，*vsNC4W,P<0.001；**vsNC16W,P<0.05；图2：ClC-3介导了高脂饮食诱导小鼠肥胖模型的发生发展，不同时程、不同饵料及不同基因型小鼠组间(A)摄食量、(B)体重增速、(C)白色脂肪含量及(D)腹部脂肪沉积情况的变化及差异；(E)不同时程、不同饲料及不同基因型小鼠组间脂肪细胞体积及数量的变化及差异，*vsWT-HFD,P<0.05；**vsWT-HFD,P<0.01；***vsWT-HFD,P<0.001。图3：高脂饮食诱导肥胖小鼠模型糖代谢参数的比较。给野生型(WT)和ClC-3基因敲除(KO)小鼠喂饲正常(NC)和高脂饮食(HFD)喂养4周和16周后，进行(A)空腹胰岛素水平和(B)空腹血糖水平检测，同时进行(C)腹腔葡萄糖耐量试验和(D)腹腔胰岛素耐量试验，并(E)检测附睾白色脂肪组织的胰岛素受体底物磷酸化水平，*vsWT-HFD,P<0.05；**vsWT-HFD,P<0.01；图4：各组小鼠附睾白色脂肪组织炎症水平的比较，(A)免疫组化及(B)流式细胞计数法对脂肪组织中浸润的巨噬细胞进行标记并比较不同组小鼠间巨噬细胞浸润情况的差异，*vsWT-HFD,P<0.05；**vsWT-HFD,P<0.01；图5：各组小鼠血清及附睾脂肪组织炎症因子和炎症标志物蛋白表达水平比较。包括(A)血清CRP水平；(B)脂肪组织中IL-6、MCP-1、TLR-4、脂联素和TLR-4的mRNA水平；(C)脂肪组织中TLR-4及NF-KbP65亚基磷酸化蛋白表达。*vsWT-HFD,P<0.05；**vsWT-HFD,P<0.01。具体实施方式实施例1腹部内脏脂肪组织ClC-3mRNA、蛋白质表达水平与肥胖呈正相关(一)材料与方法1、临床人类腹部内脏脂肪取材及分组：经中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会批准后，从中山大学孙逸仙纪念医院收集志愿者人群的腹腔大网膜脂肪组织(1g)。根据志愿者个体的BMI值，将检测组织样本分为低BMI组(BMI值＝16-21)、正常BMI组(BMI值＝21-25)和高BMI组(BMI值≥25)。2、高脂饮食致肥胖小鼠的分组、喂养按文献报道选用野生型雄性C57BL/6J小鼠，所有动物适应性饲养1周，共分成4组，饲育方案如下：1.正常饮食喂养4周组(NC4W)：正常饲料喂养，4周后收集标本；2.高脂饮食喂养4周组(HFD4W)：高脂饲料喂养，4周后收集标本；3.正常饮食喂养16周组(NC16W)：适应性饲料喂养，16周后收集标本；4.高脂饮食喂养16周组(HFD16W)：高脂饲料喂养，16周后收集标本。高脂动物饲料(western-typediet,WD)由广东省实验动物中心提供，由普通小鼠饲料加入脂肪和胆固醇(含21％脂肪和0.15％胆固醇，w/w)制成，辐照消毒。所有动物寄养在中山大学公共卫生学院清洁级动物实验室，按照上述动物分组，将5组小鼠按组别在层流架中分笼喂养，自由饮水摄食，室温控制在24℃左右，12小时白天/夜晚周期，每天用紫外灯消毒一次。所有动物同步给药，每天一次，实验到第16周末结束，此时小鼠为22周龄。3、脂肪组织切片HE染色大网膜脂肪组织切片由中山大学附属第二医院病理科制备石蜡切片。切片脱蜡后PBS清洗5min×3次后甩去多余水分，组织上滴加苏木精染色2min后用自来水流洗1min，并用1％盐酸酒精分化数秒，自来水流洗数分钟并返蓝处理1s继续自来水流洗2min，1％伊红染色2min后按免疫组化法进行脱水封片处理。4、脂肪细胞体积测定人大网膜脂肪组织切片上脂肪细胞体积测定方法如下：本文档来自技高网...
【技术保护点】
基因ClC‑3在制备治疗肥胖症药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.基因ClC-3在制备治疗肥胖症药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，基因ClC-3在制备抑制增大的脂肪细胞体积，...
【专利技术属性】
技术研发人员：王冠蕾，赵晓苗，李杰，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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