本发明专利技术属于多肽化学与免疫学领域，尤其涉及NT‑proBNP抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的NT‑proBNP特异性抗体、所述抗体在制备检测NT‑proBNP的用途和定量检测NT‑proBNP的试剂盒。本发明专利技术的公开的所述NT‑proBNP抗原表位肽的氨基酸序列具有：(I)SEQ ID NO.1所示；或(II)与(I)所述序列至少有90％同源性的序列。本发明专利技术提供的定量检测人NT‑proBNP的试剂盒能有效解决现有的检测NT‑proBNP方法的灵敏度差、检测操作繁琐的缺陷。
Kit and preparation method for quantitative detection of human NT proBNP
The invention belongs to the field of peptide chemistry and immunology, especially relates to a kit NT proBNP epitope peptide, NT proBNP specific antibody, a peptide prepared by the antigen and the antibody in the preparation and use of quantitative NT detection proBNP detection NT proBNP. The present invention discloses the NT proBNP epitope peptide amino acid sequence is: (I) SEQ ID NO.1 shown; or (II) and (I) the sequence of at least 90% homology sequence. The sensitivity of the kit for quantitative detection of human NT proBNP can effectively solve the existing detection methods, proBNP NT defect detection process.
【技术实现步骤摘要】
定量检测人NT-proBNP的试剂盒及其制备方法
本专利技术属于多肽化学与免疫学领域，尤其涉及定量检测人NT-proBNP的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
心肌细胞首先合成108个氨基酸的BNP原，称之为proBNP(BNP前体)。在受到心肌细胞的刺激后(例如，心肌细胞拉伸)，proBNP在蛋白酶作用下列解为NT-proBNP(氨基末端-proBNP或N端-proBNP)和生物活性激素BNP。NT-proBNP是BNP激素原分裂后没有活性的N-末端片段，与BNP相比，半衰期更长，更稳定，其浓度可反映短暂时间内新合成的而不是贮存的BNP释放，因此更能反映BNP通路的激活。血浆NT-proBNP水平随心衰程度加重而升高。NT-proBNP水平与心衰相关关系为：50岁以下的成人血浆NT-proBNP浓度450pg/ml，诊断急性心衰的敏感性和特异性分别为93％和95％；50岁以上的人血浆浓度900pg/ml，诊断心衰的敏感性和特异性分别为91％和80％。NT-proBNP<300pg/ml为正常，可排除心衰，其阴性预测值为99％。心衰治疗后NT-proBNP＜200pg/ml提示预后良好。肾功能不全，肾小球滤过率<60ml/min时NT-proBNP1200pg/ml诊断心衰的敏感性和特异性分别为85％和88％。NT-proBNP值正常可以排除心衰(阴性预测值接近100％)。此外，NT-proBNP有助于区分心源性和非心源性呼吸困难。NT-proBNP值的高低与伴有呼吸困难心衰的症状严重程度相关。在急性心衰的诊断中，NT-proBNP明显优于临床判断，而二者联合的方法又优于单一诊断方法。NT-proBNP的测定主要采用双抗体夹心的免疫学方法，检测方法则包括：金标法，该法具有快速简便、易观察的特点，但是灵敏度不高；透射免疫浊度法，该测定方法简便、快速，可自动化，适合于批量检测，但是免疫透射比浊的方法学及临床应用尚需做进一步的验证。综上所述，现有的检测NT-proBNP方法均有灵敏度差、检测操作繁琐的缺陷。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供的NT-proBNP抗原表位肽、抗体及NT-proBNP定量检测试剂盒，能有效解决现有的检测NT-proBNP方法的灵敏度差、检测操作繁琐的技术缺陷。本专利技术提供了一种NT-proBNP抗原表位肽，所述NT-proBNP抗原表位肽的氨基酸序列具有：(I)SEQIDNO.1所示；或(II)与(I)所述序列至少有90％同源性的序列。作为优选，具有与(I)或(II)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸序列获得的氨基酸序列，且与(I)或(II)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。作为优选，所述多个为2个。其中，本领域公知的是在同一个属中NT-proBNP蛋白的编码序列可能存在微小的差别，但这种差异通常并不会导致该NT-proBNP蛋白丧失或改变功能，同理，NT-proBNP抗原表位肽是针对NT-proBNP蛋白的序列重组设计的，因此，NT-proBNP抗原表位肽基于同一个属中具有微小的差别，通常并不会影响其抗原表位肽的特异性。本专利技术提供的NT-proBNP抗原表位肽在制备检测NT-proBNP产品中的应用。作为优选，所述NT-proBNP抗体由所述的NT-proBNP抗原表位肽制备而成的单克隆或多克隆抗体。本专利技术公开的NT-proBNP抗原表位肽制备而成的单克隆或多克隆抗体可用于临床检验的免疫实验方法，主要方法包括：ELISA法、化学发光法、荧光层析法、胶体金免疫测定法等。本专利技术公开的NT-proBNP抗原表位肽是根据NT-proBNP抗原的结构重组设计的，所述NT-proBNP抗原表位肽选取NT-proBNP抗原序列中亲水性强的序列组合在一起形成较强的抗原表位。由所述NT-proBNP抗原表位肽制备得到的NT-proBNP抗体能特异性的与NT-proBNP抗原结合，实验数据表明，所述NT-proBNP抗体的特异性强。本专利技术还提供了一种定量检测人NT-proBNP的试剂盒，所述定量检测人NT-proBNP的试剂盒采用的时间分辨荧光分析法(TRFIA)的原理设计。本专利技术测定NT-proBNP水平，TRFIA是在荧光分析(FIA)的基础上发展起来的，它是一种特殊的荧光分析。荧光分析利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外-可见分光分析法中杂色光的影响，同时，荧光分析与普通分光不同，光电接受器与激发光不在同一直线上，激发光不能直接到达光电接受器，从而大幅度地提高了光学分析的灵敏度。与经典的时间分辨荧光免疫分析方法不同，时间分辨荧光免疫层析技术采用荧光纳米微球作为标记物，当将含有待测抗原(抗体)的样品滴在加样区，待测样品中的抗原(抗体)与结合垫中的荧光纳米微球标记的抗体(抗原)结合并通过毛细作用向前层析，当达到检测区后，与检测线上固定的抗体(抗原)结合，形成微粒-抗体-抗原-抗体夹心复合物并被固定在检测线上，而多余的荧光微球标记物继续向前层析，与固定在对照线二抗结合。反应结束后，用紫外光源(365nm)对检测区扫描检测，检测线和对照线上荧光纳米微球发出高强度的荧光(615nm)，且衰变时间也较长。利用延缓测量时间，待样品基质中自然发生的短寿命荧光(1-10ns)全部衰变后，再测量稀土元素的特异性荧光，这样就可以完全排除特异本底荧光的干扰。通过检测线和对照线荧光强度的强弱及其比值，即可分析出样品中待测物的浓度。时间分辨荧光免疫层析具有以下优势：1、灵敏度高，比金标、普通荧光灵敏度高2-3个数量级；2、可定量检测，根据内置的标准曲线，可给出待测物的具体浓度；3、标记物稳定，抗干扰强，检测结果重复性好；4、操作简便，检测时间短，可用于现场筛查；5、成本相对便宜，性价比高。本专利技术提供的一种定量检测人NT-proBNP的试剂盒，包括所述的NT-proBNP抗原表位肽制备的NT-proBNP抗体作为检测抗体。作为优选，所述的定量检测人NT-proBNP的试剂盒，所述NT-proBNP抗原表位肽制备的NT-proBNP抗体标记在荧光微球上。在一种实施例中，所述NT-proBNP抗体为鼠源性抗体。作为优选，所述的定量检测人NT-proBNP的试剂盒，还包括抗NT-proBNP抗体；所述抗NT-proBNP抗体能捕获所述NT-proBNP抗体。作为优选，所述的定量检测人NT-proBNP的试剂盒，还包括NT-proBNP抗体的第二抗体。在一种实施例中，所述NT-proBNP抗体的第二抗体为羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体。在一种实施例中，所述NT-proBNP抗体的第二抗体为羊抗鼠IgG。作为优选，所述的定量检测人NT-proBNP的试剂盒，还包括底板以及附着于底板上依次排列的样品垫层、结合垫层、包被膜和吸水纸；所述结合垫层上包被有荧光微球标记的NT-proBNP抗体。其中，依次排列的样品垫层、结合垫层、包被膜和吸水纸制备成时间分辨免疫层析试纸条；所述结合垫层上包被有荧光微球标记的NT-proBNP抗体。所述包被膜上设有检测区和对照区，所述检测区设于靠近结合垫层一侧，所述对照区设于靠近吸水纸一侧，所述检测区与所述对照区相互间隔设置。所述检测本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种NT‑proBNP抗原表位肽，其特征在于，所述NT‑proBNP抗原表位肽的氨基酸序列具有：(I)SEQ ID NO.1所示；或(II)与(I)所述序列至少有90％同源性的序列。
【技术特征摘要】
1.一种NT-proBNP抗原表位肽，其特征在于，所述NT-proBNP抗原表位肽的氨基酸序列具有：(I)SEQIDNO.1所示；或(II)与(I)所述序列至少有90％同源性的序列。2.根据权利要求1所述的NT-proBNP抗原表位肽，其特征在于，具有与(I)或(II)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或两个氨基酸序列获得的氨基酸序列，且与(I)或(II)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。3.权利要求1或2所述NT-proBNP抗原表位肽在制备检测NT-proBNP产品中的应用。4.一种NT-proBNP抗体，其特征在于，NT-proBNP抗体为权利要求1或2权利要求1或2所述NT-proBNP抗原表位肽制备而成的单克隆或多克隆抗体。5.一种定量检测人NT-proBNP的试剂盒，其特征在于，包含权利要求4所述NT-proBNP抗体。6.根据权利要求5所述的定量检测人NT-proBNP的试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：周腊梅，黄若磐，胡守旺，宋旭东，
申请(专利权)人：广州瑞博奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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