一种编码玉米mTERF蛋白的基因ZmSmk3及其克隆方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种编码玉米mTERF蛋白的基因ZmSmk3和所述基因ZmSmk3的克隆方法，包括以下步骤：分别提取若干纯合突变体和纯合野生型植株叶片的DNA；将提取的纯合突变体DNA混合构建纯合突变体DNA池；将提取的野生型DNA混合构建野生型DNA池；分别对构建的纯合突变DNA池和野生型DNA池进行热不对称交错PCR，获得PCR产物片段；用琼脂糖凝胶电泳检测获得的PCR扩增产物片段，回收纯合突变体DNA池中均出现的特异条带，进行测序获得突变基因ZmSmk3的序列。所述基因ZmSmk3编码mTERF蛋白，该基因的突变影响籽粒发育进程，以及对育种实践具有重要的指导意义。

【技术实现步骤摘要】
一种编码玉米mTERF蛋白的基因ZmSmk3及其克隆方法和应用
本专利技术涉及植物基因工程
，尤其涉及一种编码玉米mTERF蛋白的基因ZmSmk3及其克隆方法和应用。
技术介绍
线粒体是重要的能量转换站，能够高效地将有机物中储存的能量转换为细胞生命活动的直接能源ATP(三磷酸腺苷)，为生命活动提供能量来源(MackenzieandMcIntosh,1999；Gualbertoetal.,2014)。它具有自主的DNA复制、转录和蛋白质合成系统，是半自主细胞器。其中，大多数的线粒体蛋白由核编码，受到细胞核的调控。线粒体基因的表达是一个复杂的生物学过程，包括RNA(核糖核酸)的转录、RNA编辑、内含子剪切、RNA的翻译、成熟及降解(HammaniandGiegé,2014)。线粒体的基因组中包含20-23个第二类内含子，只有在某些物种中线粒体cox1的内含子为第一类内含子(Bonen,2008)。大多数的线粒体基因内含子能够被顺式剪切，而某些内含子因为缺乏剪切特异的元件，只能够被反式剪切(Bonen,2008)。在细菌和酵母线粒体中，第二类内含子的剪切是由成熟酶(MATs,matu本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种编码玉米mTERF蛋白的基因ZmSmk3，其特征在于，所述基因ZmSmk3的序列如Seq ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种编码玉米mTERF蛋白的基因ZmSmk3，其特征在于，所述基因ZmSmk3的序列如SeqIDNo.1所示。2.权利要求1所述的基因ZmSmk3的克隆方法，包括以下步骤：1)分别提取若干ZmSmk3纯合突变体和纯合野生型玉米植株叶片的DNA；2)将提取的纯合突变体DNA混合构建多个纯合突变体DNA池；将提取的野生型DNA混合构建野生型DNA池；3)对步骤2)中构建的纯合突变体DNA池和野生型DNA池进行热不对称交错PCR，获得突变体和野生型的PCR扩增产物片段；4)用琼脂糖凝胶电泳检测步骤3)获得的PCR扩增产物片段，回收纯合突变体DNA池中均出现的，野生型DNA池未出现的特异条带，进行测序获得突变基因ZmSmk3的序列。3.根据权利要求2所述的克隆方法，其特征在于，步骤2)中所述纯合突变体DNA池为3个；野生型DNA池为1个。4.根据权利要求3所述的克隆方法，其特征在于，步骤3)中所述的热不对称交错PCR包括第一轮PCR和第二轮PCR；所述第一轮PCR的模板为3个纯合突变体DNA池和1个野生型DNA池，所述第一轮PCR的引物包括第一轮特异扩增引物TIR9-1和随机引物，所述引物TIR9-1的序列如SeqIDNo.3所示。5.根据权利要求4所述的克隆方法，其特征在于，所述第二轮PCR的模板为第一轮PCR获得的产物...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱法展，任雪梅，潘振远，谭增栋，秦瑶，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42