重组型耐热DNA聚合酶及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种重组型耐热DNA聚合酶：包括DNA结合结构域、蛋白结构域连接接头以及无3’‑5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶，DNA结合结构域通过蛋白结构域连接接头连接到无3’‑5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶的N端，其中DNA结合结构域为Sso7d结构域、HMf类蛋白或来自甲烷嗜热菌的DNA拓扑异构酶Ⅴ的HhH结构域；无3’‑5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶为Taq、Tth、Tma、Pfu、Deep、Vent或Tgo DNA聚合酶的缺失突变体。本发明专利技术还提供了上述重组型耐热DNA聚合酶在DNA测序中的应用。本发明专利技术的重组型耐热DNA聚合酶的续进性和延伸速度明显增强，在PCArg反应测序过程中，节约时间，使用本发明专利技术中的测序酶，可以获得更长的读长，以及更高的测序成功率。

【技术实现步骤摘要】
重组型耐热DNA聚合酶及其应用
本专利技术涉及酶工程领域，尤其涉及一种重组型耐热DNA聚合酶及其应用。
技术介绍
在测序应用上需要提高聚合酶的效率。通常DNA测序依靠生成四种不同类型的单链DNA片段库来实现，单链DNA片段的一端是确定不变的，而另一端终止于不同的核苷酸(鸟嘌呤核苷酸G，腺嘌呤核苷酸A，胸腺嘧啶核苷酸T，胞嘧啶核苷酸C)。四种不同类型的DNA片段基于长度大小而被分离，在高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶上呈现不同的条带，每个条带线性地对应DNA序列中的每一个特定的核苷酸，从而鉴定出给定的单核苷酸在序列中的位置。目前DNA测序主要有两种方法：Maxam和Gilbert的化学法和Sanger的双脱氧核苷酸终止法。天然聚合酶的许多特性不适合DNA测序，测序酶应该具备的特性包括：(1)较高的持续合成能力：持续合成能力是指酶从引物-模板退火复合物上脱离之前链持续延伸的程度。(2)耐热性：在高温条件下抵抗失活或分解的能力是酶在现代高技术投入循环测序反应中的最重要的因素。(3)核苷酸类似物嵌入染色末端：嵌入类似物的能力对双脱氧链终止法起决定性因素。带每个标记染料末端的终止的效率必须与避免低质量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组型耐热DNA聚合酶，其特征在于：包括DNA结合结构域、蛋白结构域连接接头以及无3’‑5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶，所述DNA结合结构域通过所述蛋白结构域连接接头连接到所述无3’‑5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶的N端，其中所述DNA结合结构域为Sso7d结构域、来自耐热菌的HMf类蛋白或来自甲烷嗜热菌的DNA拓扑异构酶Ⅴ的HhH结构域；所述无3’‑5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶缺失突变体、Tth DNA聚合酶缺失突变体、Tma DNA聚合酶缺失突变体、Pfu DNA聚合酶缺失突变体、Deep DNA聚合酶缺失突变体、Vent DNA聚合酶缺失突变...

【技术特征摘要】
1.一种重组型耐热DNA聚合酶，其特征在于：包括DNA结合结构域、蛋白结构域连接接头以及无3’-5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶，所述DNA结合结构域通过所述蛋白结构域连接接头连接到所述无3’-5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶的N端，其中所述DNA结合结构域为Sso7d结构域、来自耐热菌的HMf类蛋白或来自甲烷嗜热菌的DNA拓扑异构酶Ⅴ的HhH结构域；所述无3’-5’核酸外切酶活性的耐热DNA聚合酶为TaqDNA聚合酶缺失突变体、TthDNA聚合酶缺失突变体、TmaDNA聚合酶缺失突变体、PfuDNA聚合酶缺失突变体、DeepDNA聚合酶缺失突变体、VentDNA聚合酶缺失突变体或TgoDNA聚合酶缺失突变体。2.根据权利要求1所述的重组型耐热DNA聚合酶，其特征在于：所述Sso7d结构域的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求1所述的重组型耐热DNA聚合酶，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：史进，
申请(专利权)人：北京擎科新业生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11