千层纸素苷在制备保护和治疗肝损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了千层纸素苷在制备保护和治疗肝损伤药物中的应用，特别是千层纸素苷在制备保护和治疗对乙酰氨基酚所致肝损伤药物中的应用。本发明专利技术针对现有技术中没有千层纸素苷对对乙酰氨基酚所致肝损伤的研究，提出了千层纸素苷在制备保护和治疗对乙酰氨基酚所致肝损伤药物中的应用的技术方案。通过实验证明，千层纸素苷可有效对抗对乙酰氨基酚的肝损伤作用，并且降低AST和ALT活性，保护肝细胞免受氧化应激损伤和对抗对乙酰氨基酚中间代谢产物N－乙酰－对苯醌亚胺( NAPQI) 的强大氧化作用，通过氧化应激作用影响对乙酰氨基酚产生的肝毒性从而发挥其对肝损伤的保护和治疗作用。

【技术实现步骤摘要】
千层纸素苷在制备保护和治疗肝损伤药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，涉及千层纸素苷的应用，具体涉及千层纸素苷在制备保护和治疗对乙酰氨基酚所致肝损伤药物中的应用。
技术介绍
对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）又称扑热息痛，是一类重要的非甾体类抗炎药，是目前临床上广泛使用的解热镇痛药。近年来，其过量使用和滥用所造成的严重肝脏毒性引起临床和基础研究者的关注，是药物性肝损伤和急性肝功能衰竭的最常见原因，尤其是在美国、西欧，占成人急性肝功能衰竭的病例的一半，在中国也有相当一部分比例。药物性肝损伤是临床常见病，发病后血清中ALT、AST活性会升高，肝细胞坏死、肝硬化。APAP肝中毒是因为代谢产生的NAPQI不能被有限的谷胱甘肽结合，造成肝内NAPQI亲电子基和氧自由基大量的堆积所导致的。也有报道指出，APAP肝中毒是因为其中间产物与细胞色素醇P450共价结合使其发生改变，引起肝细胞损伤。目前临床上对于过量对乙酰氨基酚所致急性肝损的治疗方法主要是服用N-乙酰半胱氨酸(NAC)，但治疗效果并不理想，其主要原因是在于对乙酰氨基酚引起肝损伤的机理十分复杂，尚不十分清楚，且NAC治疗效果与中毒时间有密切关系，一般过量使用对乙酰氨基酚8小时内使用NAC有较好疗效。近年来，越来越多的天然产物或其提取物被发现可以改善一些临床药物的毒性反应并降低其不良反应，且一般具有毒性低、价格便宜的优点。黄芩是一种具有解热镇痛抗炎作用并且具有抗菌和抗病毒功效的中药，千层纸素苷（Oroxyloside，OAG，C22H20O11，式Ⅰ所示）是唇形科植物黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的主要药效成分之一，具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗病毒等活性。千层纸素苷的分子式结构如下式1所示：式Ⅰ目前对千层纸素苷的研究较少，特别是关于千层纸素苷在保护和治疗对乙酰氨基酚所致肝损伤方面的研究更未见相关文著。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供千层纸素苷在制备保护和治疗肝损伤药物中的应用，所述肝损伤为对乙酰氨基酚所致肝损伤。本专利技术的目的是通过以下技术措施实现的：千层纸素苷在制备对乙酰氨基酚所致肝损伤药物中的应用，所述应用中，千层纸素苷的用量可根据患者年龄、体重、摄入对乙酰氨基酚份量及疗程安排等变化进行给药，其日剂量可以是100mg-8000mg，所述给药方式优选为口服给药。千层纸素苷在制备对乙酰氨基酚所致肝损伤药物中的应用中，其发挥保护和治疗的作用机制是千层纸素苷可有效对抗对乙酰氨基酚的肝损伤作用，并且降低AST和ALT活性，保护肝细胞免受氧化应激损伤和对抗对乙酰氨基酚中间代谢产物N－乙酰－对苯醌亚胺(NAPQI)的强大氧化作用，通过氧化应激作用影响对乙酰氨基酚产生的肝毒性从而发挥其对肝损伤的保护和治疗作用。本专利技术的有益效果：千层纸素苷可有效对抗对乙酰氨基酚所致的肝损伤作用，可用于制备对乙酰氨基酚所致肝损伤药物，为病人提供了更好的选择。附图说明图1：组织H&E染色实验结果图。CON为空白对照组肝脏组织H&E染色实验验果；APAP为给药APAP组肝脏组织H&E染色实验结果；APAP+OAG为给药APAP+OAG组肝脏组织H&E染色实验结果。与CON组对比，在小鼠模型中给药APAP后的小鼠（APAP组）的肝脏有了明显的病理性损伤和坏死；与APAP模型组对比，而造模后给予OAG药物的小鼠（APAP+OAG组），肝脏则比起APAP组有了明显的改观。图2：ELISA实验和qRT-PCR验证结果图。由ELISA实验和qRT-PCR验证结果表明千层纸素苷可通过降低P450酶系的活性和一些炎症因子并有效地解救对乙酰氨基酚肝脏毒性。图3：WesternBlot实验结果图。WesternBlot验证肝脏中p-JNK,p-PERK,GRP78以及凋亡相关蛋白的表达水平。图4：Tunel法测凋亡实验结果图。由Tunel法实验验证了APAP造成肝损伤是通过凋亡途径，造成了肝组织细胞的凋亡，而加入OAG则使凋亡的细胞数量减少。图5：免疫组化实验结果图。免疫组化实验验证了肝脏组织中相关通路关键蛋白和凋亡蛋白的表达，APAP使相关蛋白表达增加，而OAG则可逆转此效应，最终产生了肝损伤的保护作用。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术作进一步阐述。实施例1：千层纸素苷在体内逆转对乙酰氨基酚造成的肝损伤实验一、实验材料（1）千层纸素苷（OAG）纯度大于98.64%，南京郎泽医药科技有限公司购得。溶于无菌水中配成0.1M的母液并于-20℃储藏（千层纸素苷稀释成100μM的浓度，同时将无菌水作为溶剂对照。在体内研究时用0.5%CMC-Na溶解千层纸素苷并采取灌胃的方式进行给药。（2）对乙酰氨基酚（APAP)购自Sigma-Aldrich。（3）抗体β-actin都是购自SantaCruzBiotechnology(California,USA)。二、实验方法（1）动物实验动物实验选用上海斯莱克实验动物中心体重在18-22g的SPF级雌性C57BL/6小鼠。小鼠的饲养条件为温度23±2℃、湿度55±5%以及12h的日照，同时给与符合啮齿类动物饲养标准的饮食和水。称重后分组给药，设3个组别，：生理盐水空白组（即CON组）；APAP模型组（即APAP组，APAP300mg/kg）、APAP造模后给予OAG组（即APAP+OAG组，APAP300mg/kg，OAG150mg/kg）。每组动物均为8只，单次腹腔注射APAP（300mg/kg），一小时后灌胃给予OAG（150mg/kg），23小时后处死小鼠取出肝脏组织，部分肝脏组织于-80℃保存，用于蛋白表达实验，部分肝脏固定于福尔马林溶液中，做石蜡切片用于组织染色实验。（2）组织H&E染色对三组别肝脏组织H&E染色，染色结果如图1所示。与空白对照组（CON组）对比，APAP模型组的小鼠（APAP组）肝脏有了明显的病理性损伤和坏死；而给予OAG药物的小鼠（APAP+OAG组）与APAP模型组对比，肝脏的损伤程度有了明显的改善。H&E染色结果可以看出坏死病变的损伤区域，肝纤维化现象，病变主要是中央静脉周围细胞变性坏死，APAP组肝细胞坏死程度高于空白对照组，H&E染色切片APAP组的肝脏细胞呈不规则变形，葡萄状排列，一些细胞破裂，胞浆溢出，给予OAG后肝脏细胞状况良好，病变程度轻。以上实验说明了千层纸素苷改善了肝细胞坏死程度，千层纸素苷对对乙酰氨基酚所致肝损伤具有良好的保护作用。（3）Enzyme-linkedimmunoassayELISA和实时定量PCR(qRT-PCR)把各组老鼠的肝脏组织匀浆裂解提取总蛋白，组织匀浆在4°C，12000g下离心15分钟。用BCATM蛋白检测试剂盒(Thermo，MA，USA)进行蛋白定量，IL-1β，IL-6(BosterBiotechCo.Ltd.，Wuhan，China)，CYP1A2和CYP2E1(ShanghaiLanpaiBiotechnologyCo.Ltd.，Shanghai，China)用ELISA试剂盒根据说明书按步骤操作检测肝脏组织中的含量。提取总RNA，并且进行RT-PCR步骤，相关目的m本文档来自技高网...

【技术保护点】
千层纸素苷在制备保护和治疗肝损伤药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.千层纸素苷在制备保护和治疗肝损伤药物中的应用。2.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽，郭青龙，廖琰，王晓萍，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32