miR-193a-3p的应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程领域，特别涉及miR‑193a‑3p的应用，本发明专利技术通过揭示miR‑193a‑3p在胰腺癌细胞中作为抑癌基因控制肿瘤细胞迁移及生长、miR‑193a‑3p拮抗胰岛素对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤干细胞的促进能力、胰岛素通过抑制miR‑193a‑3p促进调节胰腺癌细胞增殖和迁移，提供了miR‑193a‑3p在制备治疗胰腺癌的药物、抑制胰岛素影响胰腺癌的药物中的应用，同时miR‑193a‑3p还可用做诊断伴有胰腺癌发生的糖尿病患者中，是否可用胰岛素进行治疗的标志物，用于制备判断伴随胰腺癌的糖尿病患者是否适宜采用胰岛素治疗的装置，其判断结果可为伴随胰腺癌的糖尿病患者的治疗方案提供依据。

The application of miR 193A 3P

The invention belongs to the field of gene engineering, in particular to a miR application 193A 3P, the miR 193A revealed by 3p in pancreatic cancer cells as a tumor suppressor gene in controlling tumor cell migration and growth, miR 193A 3P insulin on tumor cell proliferation, migration, invasion and tumor stem cells to promote the ability of insulin through inhibition of miR 193A 3P promote the adjustment of proliferation and migration of pancreatic cancer cells and drugs, provides miR 193A 3p in preparation for treating pancreatic cancer inhibiting effects of drug application of insulin in pancreatic cancer, and miR 193A 3P also can be used as the diagnosis of diabetic patients with pancreatic cancer the availability of insulin, markers of treatment, for the preparation of judgment with diabetes in patients with pancreatic cancer using device suitable for insulin therapy, the results can be associated with pancreatic The treatment scheme for patients with adenocarcinoma of diabetes provides the basis.

【技术实现步骤摘要】
miR-193a-3p的应用
本专利技术属于基因工程领域，特别涉及miR-193a-3p的应用。
技术介绍
非编码RNA是指经过基因组转录但不翻译成蛋白质的RNA，其中microRNA(miRNA)是一类具有进化保守性的小分子非编码RNA，在癌症、心血管、糖尿病等疾病中已证实发挥重要作用；miRNA在不同癌症中被证实对癌症的发生具有调节作用，可作为临床潜在的治疗靶标胰腺癌为致死率最高的癌症，2年生存率不足20％，而5年生存率仅为2％，具有“癌中之王”之称，全球每小时胰腺癌患者死亡人数约为20人，通常被称为“隐形杀手”，主要是胰腺癌在早期阶段不显现任何症状，往往确诊的胰腺癌病人已处于癌症晚期，因而常规手术和化学疗法对胰腺癌治疗已失去作用；胰腺癌超强的转移能力是其致死的一个主要原因；胰腺癌的转移是其自身多基因多步骤的一个综合过程，包括EMT的发生、肿瘤血管生成、癌细胞对胞外基质的降解及肿瘤细胞干性的加强，这些过程并不是独立事件，而是一个相互影响的过程。但是，目前关于胰腺癌转移的具体分子调控机制还不是很清楚。胰腺癌病人较一般人群患糖尿病几率增大，具有1年以上糖尿病史患者发生胰腺癌的危险为无糖尿病患者的2.1倍；糖尿病为胰腺癌的危险因子或并发症，在胰腺癌病人中约50％伴有糖尿病的发生，约1％(>50岁)的病人诊断出糖尿病后3年内会伴有胰腺癌的发生；目前，临床对已确诊的糖尿病病人会进一步做胰腺病理检查，以确认糖尿病患者是否伴有胰腺癌的发生，可见糖尿病与胰腺癌的关系在临床诊断中被重视。糖尿病的治疗及早期预防是否可以减缓或阻止胰腺癌发生，已有的研究工作并没有解释清楚。目前，通常采用胰岛素(insulin)与降糖药的联合使用治疗糖尿病，但胰岛素影响细胞糖代谢，而增强糖代谢是肿瘤细胞后期获能的主要方式，关于胰岛素的治疗是否对癌症的起始或恶性发展具有影响，这也是目前关于胰岛素治疗中最为关切的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供miR-193a-3p在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。在胰腺癌细胞株中转染miR-193a-3p，利用划痕愈合、Trans-well细胞迁移和3D细胞培养分析发现，细胞的迁移和转移能力被显著下调；通过流式细胞分选技术检测胰腺肿瘤干细胞标志物CD133的表达，CD133阳性胰腺癌细胞所占比例明显减少；胰腺癌细胞形成微球体的能力同样被显著下调；细胞增殖、软琼脂克隆形成与裸鼠成瘤能力均被下调；说明miR-193a-3p在胰腺癌细胞中作为抑癌基因控制肿瘤细胞迁移及生长。本专利技术还提供miR-193a-3p在制备抑制胰岛素影响胰腺癌的药物中的应用。利用qRT-PCR分析与胰腺癌发生相关miRNAs的表达发现，相比未经胰岛素治疗的胰腺癌病人样本组织，miR-193a-3p的表达在胰岛素治疗的病人样本组织中被显著下调；在胰岛素处理的胰腺癌细胞中转染miR-193a-3p发现，miR-193a-3p拮抗胰岛素对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤干细胞的促进能力。本专利技术还提供miR-193a-3p用做诊断伴胰腺癌的糖尿病患者在用胰岛素治疗时，是否促进胰腺癌发展的标志物。通过流式细胞分选分析胰腺癌干细胞标志物CD133发现，胰岛素处理后CD133阳性胰腺癌细胞数目增多；同时，利用mammosphere微球体培养分析胰腺癌微球体形成，发现MIAPaCa-2细胞微球体形成能力在胰岛素刺激下显著增强。这些实验结果表明，胰岛素可显著提高胰腺癌细胞的迁移及肿瘤形成能力；利用qRT-PCR分析与胰腺癌发生相关miRNAs的表达发现，相比未经胰岛素治疗的胰腺癌病人样本组织，miR-193a-3p的表达在胰岛素治疗的病人样本组织中被显著下调；通过胰岛素处理胰腺癌细胞株MIAPaCa-2和PANC-1，经qRT-PCR分析发现，胰岛素处理胰腺癌细胞后miR-193a-3p的表达同样被显著下调；胰岛素通过抑制miR-193a-3p促进调节胰腺癌细胞增殖和迁移；伴有胰腺癌发生的糖尿病患者在接受胰岛素治疗时应区别对待,当检测出胰腺癌组织的miR-193a-3p表达量明显高于癌旁组织时(变化倍数大于2倍)，不宜采用胰岛素治疗糖尿病。本专利技术还提供miR-193a-3p应用于制备判断伴随胰腺癌的糖尿病患者能否采用胰岛素治疗的装置。优选地，所述装置包括RNA提取试剂、缓冲体系、反转录试剂、PCR扩增试剂和针对miR-193a-3p的引物对。相对于现有技术，本专利技术的优点如下，本专利技术通过揭示miR-193a-3p在胰腺癌细胞中作为抑癌基因控制肿瘤细胞迁移及生长、miR-193a-3p拮抗胰岛素对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤干细胞的促进能力、胰岛素通过抑制miR-193a-3p促进调节胰腺癌细胞增殖和迁移，提供了miR-193a-3p在制备治疗胰腺癌的药物、抑制胰岛素影响胰腺癌的药物中的应用，同时miR-193a-3p还可用做诊断糖尿病患者在用胰岛素治疗时促进胰腺癌发展的标志物，用于制备判断伴随胰腺癌的糖尿病患者是否适宜采用胰岛素治疗的装置，其判断结果可为伴随胰腺癌的糖尿病患者的治疗方案提供依据。附图说明图1：miR-193a-3p抑制BxPC-3细胞转移；在BxPC-3细胞中转染或感染pSIF-miR-193a-3p(miR-193a-3p)或pSIF-H1(CtrlRNA)，24小时后进行实验：(A)划痕愈合实验：上，划痕0小时和14小时后代表性视图；下，愈合面积量化结果；标尺为200μm；(B)Trans-well细胞迁移实验(左)和Trans-well基质胶侵袭实验(右)：上，代表性视图，标尺为100μm；下，单位面积迁移细胞数目量化结果；(C)3D细胞培养实验：上，细胞培养21天相差结构，标尺为200μm；下，插图显示单个细胞侵袭到周围基质胶中的放大图像，标尺为100μm；(D)4×104BxPC-3细胞感染pSIF-miR-193a-3p或对照pSIF-H1慢病毒，生物发光检测小鼠肺部转移灶点荧光信号强度。图2：miR-193a-3p抑制BxPC-3细胞干性维持；肿瘤细胞微球体形成实验：流式细胞分选统计CD133阳性肿瘤细胞数目(A)，1×104单细胞BxPC-3种植于低吸附的6孔细胞培养板,培养7天(B)，标尺为200μm。图3：miR-193a-3p抑制BxPC-3细胞增殖：(A)细胞增殖实验；左，MTT增殖曲线图；右，Westernblot检测DVL3和PCNA蛋白水平，-actin作为标准化内参；(B)软琼脂克隆实验；左，代表性视图；右，量化结果；(C)裸鼠皮下成瘤实验；左，肿瘤生长曲线；右，皮下注射6周后肿瘤代表性视图。图4：在MIAPaCa-2中抑制miR-193a-3p表达提高细胞肺转移能力：(A)划痕愈合实验；左，划痕0小时和16小时后代表性视图；右，愈合面积量化结果；标尺为200μm；(B)Trans-well细胞迁移实验(左)和Trans-well基质胶侵袭实验(右)；上，代表性视图，标尺为100μm；下，单位面积迁移细胞数目量化结果；(C)3D细胞培养实验；上，细胞培养21天相差结构，标尺为200μm；下，插图显示细胞侵袭到周围基质胶中的放大图像，标尺为100μm；(D)1×105MIAPaCa-2细胞感本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑193a‑3p在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-193a-3p在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。2.miR-193a-3p在制备抑制胰岛素影响胰腺癌的药物中的应用。3.miR-193a-3p用做诊断糖尿病患者在用胰岛素治疗时促进胰腺癌发展的标志物。4.mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺小宏，王延宾，袁鹏，王鑫，张承武，李林，
申请(专利权)人：南京北恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32