miR‑149‑3p及其拟似物在制备防治肥胖、动脉粥样硬化、高血脂的药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及microRNA的用途，特别是miR‑149‑3p及其拟似物在制备防治肥胖、动脉粥样硬化、高血脂及其并发症的药物中的应用。可将上述药物按照药物制备的常规方法制成注射制剂，口服制剂，喷雾制剂，软膏制剂或贴剂等。

The application of drug miR 149 3P analogues in the preparation of prevention and treatment of obesity, atherosclerosis, high blood lipids in

The invention belongs to the field of biological medicine, involving the use of microRNA, especially the application of drug miR 149 3P analogues for preventing obesity, atherosclerosis, hyperlipidemia and its complications in the system. These drugs can be made into injection preparation, oral preparation, spray preparation, ointment preparation or patch, etc. according to the conventional method of preparing the medicine.

【技术实现步骤摘要】
miR-149-3p及其拟似物在制备防治肥胖、动脉粥样硬化、高血脂的药物中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及microRNA的用途，特别是miR-149-3p及其拟似物在制备防治肥胖、动脉粥样硬化、高血脂及其并发症的药物中的应用。
技术介绍
随着社会经济的发展，肥胖已成为世界关注的热点问题，已成为全球流行性疾病。最新流行病学调查显示，美国已有高达三分之一以上人群超重或肥胖，美国医学会认为肥胖是一种疾病。在我国，随着生活水平的提高、生活方式的改变，肥胖患者的数量也急剧上升，超重和肥胖发生率已高达29％。美国每年用于肥胖及相关疾病的医疗费用高达1170亿美元，肥胖带来了沉重的社会负担和经济负担。在世界范围内，动脉粥样硬化性心血管疾病是全球发病率和死亡率居首位的疾病。《中国心血管病报告2012》统计数据表明：我国现有心血管病患者2.9亿人，其中心肌梗死患者至少250万，每年新发心肌梗死患者50万人，约每10秒就有1人死于心血管疾病。冠状动脉粥样硬化性心脏病，已经成为影响人类健康的一种重要疾病。冠状动脉粥样硬化发生机制复杂，目前认为，各种因素如炎症、氧化应激、激素缺乏、纤溶与凝血机制异常等引起血管内皮受损、内皮功能障碍，继而白细胞黏附、浸润，泡沫细胞形成，平滑肌细胞迁移，最终导致了脂质斑块的形成。动脉粥样硬化是一个炎性疾病，高胆固醇血症是疾病发生发展的重要因素。动脉粥样硬化早期，LDL侵入动脉壁，累积在内皮下，而后被氧化修饰。oxLDL刺激内皮细胞粘附分子(ICAM-1，VCAM-1)表达，趋化因子(CCL2)分泌，增加白细胞(单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞)迁移至内膜。胆固醇在许多疾病中其重要的作用，比如在动脉粥样硬化形成的早期，糖尿病等各种代谢性疾病。因此，调控胆固醇代谢可以阻止脂质代谢有关的疾病。为了监控甾体水平，细胞使用反馈系统调节SREBP的转录。在低水平的胆固醇情况，SREBP转运到高尔基体，活化后进入细胞核，活化靶基因(HMGCR，LDLR)的转录。在高水平的胆固醇情况，抑制靶基因转录。尽管真核细胞通过内源性合成和脂蛋白摄取胆固醇，胆固醇无法降解，必须排出并转运至肝脏，进行重新利用或排出体外，该过程叫胆固醇反向转运。细胞胆固醇流出由ABCA1和ABCG1调节，经ABCA1流出的胆固醇与低酯化的APOA1结合，ABCG1主要涉及成熟的HDL酯化。ABCA1也调节HDL生物合成。在小鼠和灵长类动物，miR-33a/b恰好调节ABCA1和ABCG1的3’UTR区，miR-33抑制细胞胆固醇流出至ApoA1和HDL，减少循环中HDL-C水平。基因敲除miR-33小鼠，血浆HDL-C水平升高，减少动脉粥样进展。ABCA1具有很长的3’UTR序列，所以有很多miRNA调节其表达，如miR-26，miR-10b，miR106b，miR-758等。microRNAs是一类长约22个核苷酸左右的进化保守的内源性非编码单链RNA小分子。自1993年Lee等发现第一个被称为lin-4的miRNA以来，研究者对miRNA的生物合成、功能及作用机制进行了大量的研究。microRNAs参与细胞分化、增殖、凋亡等过程。microRNAs在血管生成和心血管疾病中均具有重要的作用。这些miRNAs核苷酸序列与靶基因mRNA的3’UTR序列互补结合，抑制靶基因表达，从而调控各种生物功能。尽管一系列药物可用于治疗，但肥胖及心血管疾病的发病率和花费无论在发达国家还是在发展中国家都持续增加，目前的治疗主要是减缓疾病的进展。为了开发新的预防和治疗性药物，我们开发microRNA-149-3p及其拟似物在制备防治肥胖、动脉粥样硬化、高血脂及其并发症的药物中的应用。
技术实现思路
本专利技术关于microRNA的用途，特别是miR-149-3p及其拟似物在制备防治肥胖、动脉粥样硬化、高血脂及其并发症的药物中的应用。所述的miR-149-3p的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示：>hsa-miR-149-3pMIMAT0004609AGGGAGGGACGGGGGCUGUGC。所述miR-149-3p拟似物的核苷酸序列为在miR-149-3p的核苷酸序列的基础上对除了GGGAGGG碱基外的其它核苷酸进行的核糖修饰、碱基修饰和磷酸骨架修饰中的一种或几种的组合或核苷酸的增减替换。只要修饰后的核苷酸序列仍具有与miR-149-3p相同的活性就应当属于本专利技术所要保护的范围之内。优选的，所述miR-149-3p拟似物的核苷酸序列为在miR-149-3p的核苷酸序列的基础上对碱基进行了甲基化修饰，并对5’端利用胆固醇进行了标记。所述的并发症包括高血压、心肌肥大、心衰、高胆固醇、脂肪肝、糖尿病、肾病综合征、呼吸暂停综合征等。本专利技术还包括miR-149-3p作为肥胖、动脉粥样硬化、高血脂、冠心病的诊断检测的血清标志物。所述的miR-149-3p的核苷酸序列作为肥胖、动脉粥样硬化、冠心病、高血脂及其并发症的患病风险指标。所述的miR-149-3p的核苷酸序列作为肥胖、动脉粥样硬化、冠心病、高血脂及其并发症的预后指标。本专利技术还提供了一种预防和治疗肥胖、动脉粥样硬化、高血脂、冠心病、高血压及并发症的药物组合物，所述组合物包含有miR-149-3p或者miR-149-3p的拟似物以及药学上接受的载体。可将上述组合物按照药物制备的常规方法制成注射制剂，口服制剂，喷雾制剂，软膏制剂或贴剂等。附图说明图1探针法检测胞内miR-149水平；图2双荧光素酶报告分析miR-149-3p抑制GSK3a表达；图3动脉粥样硬化饮食miR-149-/-小鼠血浆TG、TC、LDL-C、HDL-C变化。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1miR-149检测方法：HepG2细胞于DMEM加10％胎牛血清培养，接种于6孔板，密度4×105/孔，置于37℃，5％CO2培养箱。16-20h后，细胞密度达到80％。转染miR-149-3p(购自于广州市锐博生物科技有限公司，hsa-miR-149-3p，MIMAT0004609，AGGGAGGGACGGGGGCUGUGC)或miR-control，转染剂量及方法如下表所示，转染后24h提取总microRNA。提取总microRNA(mirVanamiRNAIsolationKitPrcotcol(ambion)的方法细胞裂解:(1)收集102-107细胞或0.5-25mg组织，冷PBS洗涤。A.悬浮细胞：计数，102-107细胞低速离心，弃上清，重悬于1mLPBS，离心沉淀，放置冰上；B.贴壁细胞：弃培养基，PBS洗涤，置于冰上。胰酶消化，计数，失活胰酶，离心沉淀，弃上清，重悬在1mLPBS,低速离心沉淀，置于冰上。(2)裂解样品A.弃PBS，加300-600μLLysis/BindingSolution。如分离数量较少细胞，用300μL；数量较多用600uL。贴壁细胞，直接在培养皿本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑149‑3p及其拟似物在制备防治肥胖、动脉粥样硬化、高血脂及其并发症的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-149-3p及其拟似物在制备防治肥胖、动脉粥样硬化、高血脂及其并发症的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的并发症为高血压、心肌肥大、心衰、高胆固醇、脂肪肝、糖尿病、肾病综合征、呼吸暂停综合征中的任一种或几种。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述miR-149-3p拟似物的核苷酸序列为在miR-149-3p的核苷酸序列的基础上对除了GGGAGGG碱基外的其它核苷酸进行的碱基修饰、核糖修饰、磷酸骨架修饰或核苷酸的增减替换。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述miR-...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫东，周云，王艳东，聂小博，叶文凌，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：河南,41