从深海鱼中提取功能小肽的方法技术

本发明专利技术公开了从深海鱼中提取功能小肽的方法，包括分步酶解、等电点沉淀、二次超滤并纳滤和冷冻干燥。采用海洋蛋白酶和陆地蛋白酶协同酶解，先采用条斑紫菜蛋白酶，在此基础上继续采用风味蛋白酶酶解，可得到能保护胶原蛋白不被胃酸分解的功能小肽。有益效果为：得到的功能小肽与胶原蛋白之间通过分子间作用力和氢键连接，功能小肽在胶原蛋白分子表面附着，将其包裹，可保护胶原蛋白不被胃酸分解，并能促进其达到动物结缔组织、软骨及皮肤真皮层。

Method of extracting functional peptides from deep sea fish

The present invention discloses a method for extracting functional small peptides from deep-sea fish, including step by step enzymolysis, isoelectric point precipitation, two times ultrafiltration, nanofiltration and freeze drying. The enzymatic hydrolysis of Porphyra yezoensis protease was carried out by using marine protease and land protease. The functional peptides that could protect the collagen from gastric acid decomposition were obtained by enzymatic hydrolysis. The beneficial effect of the intermolecular hydrogen bonding and function between the small peptide and collagen obtained, adhesion function of small peptide in collagen molecules on the surface, the package can protect the collagen by acid decomposition, and can promote the animal skin to cartilage and connective tissue, dermis.

【技术实现步骤摘要】
从深海鱼中提取功能小肽的方法
本专利技术涉及小肽制备领域，具体是一种从深海鱼中提取功能小肽的方法。
技术介绍
天然存在的海洋活性多肽由于在生物体中含量低，而且提取困难，难以实现大量生产供给所需，化学人工合成多肽成本昂贵。所以，人们更多地把目光投向开发蛋白酶解产物获得活性多肽这条途径上来。由于海洋生物生存的环境与陆地生物完全不同，如高压、低温、高温和高盐等极端环境，为了适应这些极端的海洋生物环境，海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，同时，海洋生物蛋白资源无论在种类和数量上都远远大于陆地蛋白资源，并且未得到很好的开发。种类繁多的海洋蛋白氨基酸序列中，潜在着许多具有生物活性的氨基酸序列，用特异的蛋白酶水解，就释放出有活性的肽段。海洋生物蛋白资源是21世纪人类重要的蛋白类食物及生物活性物质的重要来源。我国目前的海洋生物蛋白资源总量在世界各国名列前茅，但我国目前的蛋白类水产品中，除一部分直接食用外，大部分通过简单的加工技术制成食品进入市场，加工技术落后，产品结构单一，产品的附加值低，使得产品在国际市场上的竞争力较差。因此，我国急需对海洋生物蛋白资源进行优化利用和高值化加工。胶原蛋白又称胶原，是由三条肽链相互缠绕形成的纤维状蛋白质，是一种糖蛋白，含有大量的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸及糖，广泛存在于动物的皮肤、骨、软骨及肌腱等组织中，是机体含量最多的一类蛋白质。胶原蛋白可用于修复皮肤疤痕、抗老、淡斑及美白等方面,是美容圣品，但通过食用方式补充胶原蛋白，其利用率极低，大部分会被机体分解，失去活性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从深海鱼中提取功能小肽的方法，提取得到的功能小肽可保护胶原蛋白不被胃酸分解，并能促进其达到动物结缔组织、软骨及皮肤真皮层。本专利技术针对
技术介绍
中提到的问题，采取的技术方案为：从深海鱼中提取功能小肽的方法，包括分步酶解、等电点沉淀、二次超滤并纳滤和冷冻干燥。分步酶解步骤为在深海鱼鱼糜中加入纯水匀浆，再加入条斑紫菜蛋白酶和活性短肽酶解，调节pH后加入风味蛋白酶酶解，得到酶解液。海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，用海洋蛋白酶酶解海产品可释放出许多不同的活性肽段。先采用条斑紫菜蛋白酶，在此基础上继续采用风味蛋白酶酶解，可得到能保护胶原蛋白不被胃酸分解的功能小肽。目前未有采用其他蛋白酶酶解得到上述功能小肽的报导。采用海洋蛋白酶和陆地蛋白酶协同酶解，具有显著的创造性。深海鱼鱼糜中加入20~30倍体积水，条斑紫菜蛋白酶的加入量为5~8wt‰，酶解温度25~35℃，pH为7.0~9.0，酶解时间为30~40min，酶解结束后灭酶。上述酶解条件下，条斑紫菜蛋白酶的酶解效率高又不会造成资源浪费，为最优选条件。风味蛋白酶加入量为1~3wt﹪，酶解pH为6.0~7.0，酶解温度为52~60℃，酶解时间为15~25min，酶解结束后灭酶，过滤取滤液。上述酶解条件下，风味蛋白酶的酶解效率高又不会造成资源浪费，为最优选条件。活性短肽的加入量为条斑紫菜蛋白酶质量的10~20﹪，氨基酸序列为HSHACTSYYHPCSKLLCVCANCSR。上述活性短肽可通过范德华力和静电作用来改变条斑紫菜蛋白酶的三级结构，使条斑紫菜蛋白酶的酶解活力得到明显提高。等电点沉淀步骤为将酶解液过滤，调节滤液的pH值为4.5~4.8，静置后离心取沉淀。在上述pH环境下，功能小肽呈电中性，微溶于水，大部分以沉淀形式从水溶液中分离出来。二次超滤并纳滤步骤为先采用截留相对分子质量30~40kD的膜超滤，再采用截留相对分子质量4~8kD的膜超滤，最后将滤过液进行纳滤除盐。为了防止膜孔堵塞或膜损害，先采用大孔超滤膜进行超滤，再采用小孔超滤膜超滤，有效去除分子量大于4~8kD的杂质。纳滤可较彻底的去除溶液中的无机盐及分子量小于200Da的杂质，对功能小肽进一步进行纯化。冷冻干燥步骤中加入20~35wt%聚乙烯吡洛烷酮作为冻干添加剂，冷冻干燥得到功能小肽冻干粉。功能小肽需要含有合适的剩余水分来保持在储存过程中性质的稳定，过度的干燥将使蛋白质分子表面的氢键和极性基团暴露而变性。冷冻干燥过程中，加入聚乙烯吡洛烷酮，可保护功能小肽的蛋白伸展、四级结构，从而对功能小肽活性进行保护。上述功能小肽与胶原蛋白之间通过分子间作用力和氢键连接，功能小肽在胶原蛋白分子表面附着，将其包裹，可保护胶原蛋白不被胃酸分解，并能促进其达到动物结缔组织、软骨及皮肤真皮层，具体作用机理尚不明确。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1.海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，用海洋蛋白酶酶解海产品可释放出许多不同的活性肽段。先采用条斑紫菜蛋白酶，在此基础上继续采用分风味蛋白酶酶解，可得到能保护胶原蛋白不被胃酸分解的功能小肽。目前未有采用其他蛋白酶酶解得到上述功能小肽的报导。采用海洋蛋白酶和陆地蛋白酶协同酶解，具有显著的创造性。2.氨基酸序列为HSHACTSYYHPCSKLLCVCANCSR的活性短肽可通过范德华力和静电作用来改变条斑紫菜蛋白酶的三级结构，使条斑紫菜蛋白酶的酶解活力得到明显提高。3.上述功能小肽与胶原蛋白之间通过分子间作用力和氢键连接，功能小肽在胶原蛋白分子表面附着，将其包裹，可保护胶原蛋白不被胃酸分解，并能促进其达到动物结缔组织、软骨及皮肤真皮层，具体作用机理尚不明确。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术方案作进一步说明：实施例1：从深海鱼中提取功能小肽的方法，包括分步酶解、等电点沉淀、二次超滤并纳滤和冷冻干燥。分步酶解步骤为在深海鱼鱼糜中加入纯水匀浆，再加入条斑紫菜蛋白酶和活性短肽酶解，调节pH后加入风味蛋白酶酶解，得到酶解液。海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，用海洋蛋白酶酶解海产品可释放出许多不同的活性肽段。先采用条斑紫菜蛋白酶，在此基础上继续采用风味蛋白酶酶解，可得到能保护胶原蛋白不被胃酸分解的功能小肽。目前未有采用其他蛋白酶酶解得到上述功能小肽的报导。采用海洋蛋白酶和陆地蛋白酶协同酶解，具有显著的创造性。深海鱼鱼糜中加入20~30倍体积水，条斑紫菜蛋白酶的加入量为5~8wt‰，酶解温度25~35℃，pH为7.0~9.0，酶解时间为30~40min，酶解结束后灭酶。上述酶解条件下，条斑紫菜蛋白酶的酶解效率高又不会造成资源浪费，为最优选条件。风味蛋白酶加入量为1~3wt﹪，酶解pH为6.0~7.0，酶解温度为52~60℃，酶解时间为15~25min，酶解结束后灭酶，过滤取滤液。上述酶解条件下，风味蛋白酶的酶解效率高又不会造成资源浪费，为最优选条件。活性短肽的加入量为条斑紫菜蛋白酶质量的10~20﹪，氨基酸序列为HSHACTSYYHPCSKLLCVCANCSR。上述活性短肽可通过范德华力和静电作用来改变条斑紫菜蛋白酶的三级结构，使条斑紫菜蛋白酶的酶解活力得到明显提高。等电点沉淀步骤为将酶解液过滤，调节滤液的pH值为4.5~4.8，静置后离心取沉淀。在上述pH环境下，功能小肽呈电中性，微溶于水，大部分以沉淀形式从水溶液中分离出来。二次超滤并纳滤步骤为先采用截留相对分子质量30~40kD的膜超滤，再采用截留相对分子质量4~8本文档来自技高网...

【技术保护点】
从深海鱼中提取功能小肽的方法，包括分步酶解、等电点沉淀、二次超滤并纳滤和冷冻干燥，其特征在于：所述的分步酶解步骤为在深海鱼鱼糜中加入纯水匀浆，再加入条斑紫菜蛋白酶和活性短肽酶解，调节pH后加入风味蛋白酶酶解，得到酶解液。

【技术特征摘要】
1.从深海鱼中提取功能小肽的方法，包括分步酶解、等电点沉淀、二次超滤并纳滤和冷冻干燥，其特征在于：所述的分步酶解步骤为在深海鱼鱼糜中加入纯水匀浆，再加入条斑紫菜蛋白酶和活性短肽酶解，调节pH后加入风味蛋白酶酶解，得到酶解液。2.根据权利要求1所述的从深海鱼中提取功能小肽的方法，其特征在于：所述的深海鱼鱼糜中加入20~30倍体积水，条斑紫菜蛋白酶的加入量为5~8wt‰，酶解温度25~35℃，pH为7.0~9.0，酶解时间为30~40min，酶解结束后灭酶。3.根据权利要求1所述的从深海鱼中提取功能小肽的方法，其特征在于：所述的风味蛋白酶加入量为1~3wt﹪，酶解pH为6.0~7.0，酶解温度为52~60℃，酶解时间为15~25min，酶解结束后灭酶，过滤取滤液。4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：李健，
申请(专利权)人：兰溪市哥特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33