用于15种肺炎致病菌快速检测的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于15种肺炎致病菌快速检测的试剂盒。该试剂盒可以检测肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、嗜肺军团菌、肺炎衣原体15种致病菌，其中包括了临床常见的和难培养的肺炎致病菌。通过基因芯片和多重不对称PCR反应相结合，对肺炎致病菌所对应的16S rDNA和特异基因序列进行检测，分别从“属”和“种”的级别同时对待检测样品中细菌的种类进行鉴定。本发明专利技术的试剂盒弥补了目前临床肺炎致病菌检测不及时不全面的缺陷，为肺炎患者早诊断、早治疗提供了一种新的检测手段。

Kit for rapid detection of 15 kinds of pneumonia pathogens

The invention discloses a reagent box for rapid detection of 15 kinds of pneumonia pathogenic bacteria. The kit can detect Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Mycoplasma pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter Bauman, Enterococcus faecalis, Enterococcus, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Stenotrophomonas maltophilia, Burke Holder, from onion Legionella and Chlamydia pneumoniae 15 kinds of pathogenic bacteria, including clinical common and difficult to cultivate the pathogen of pneumonia. Through the combination of gene chip and multiple asymmetric PCR reaction, detection of 16S and rDNA specific gene sequence of pneumonia pathogens of the genus and species were from the species level at the same time to detection of bacteria in samples were identified. The kit of the invention makes up for the defects caused by pathogen detection is not timely comprehensive clinical pneumonia, pneumonia in patients with early diagnosis and early treatment provides a new means of detection.

【技术实现步骤摘要】
用于15种肺炎致病菌快速检测的试剂盒
本专利技术涉及基因技术，尤其涉及用于15种肺炎致病菌快速检测的试剂盒。
技术介绍
近年来，由于空气污染的加剧及公共卫生事件的发生，呼吸道疾病引起越来越多的关注。肺炎是指包括终末气道，肺泡和肺间质等在内的肺实质性炎症，是全球感染性疾病死亡的首要原因[1]。据世界卫生组织(WHO)统计，每年约有350万人死于下呼吸道感染，居所有死亡原因的第三位[2]。在美国,肺炎和流行性感冒位于所有死因的第九位，2010年和2011年均有5万多人死于肺炎[3-5]，而且该统计没有将肺炎导致的败血症以及死于肺炎并发症的癌症、帕金森等病例纳入肺炎组，所以实际因肺炎死亡的人数比这个数还要高[2]。肺炎的致病原有很多，包括细菌、病毒、真菌、寄生虫等，其中最重要最常见的是细菌。众所周知，肺炎按照发病环境可分为社区获得性肺炎(CAP)和医院获得性肺炎(HAP)。大部分CAP患者只需要门诊就诊，但仍有大约20％的患者仍需住院治疗[8]。CAP致病菌以革兰氏阳性菌为主，其中又以肺炎链球菌为第一位，占35-80％，其次为流感嗜血杆菌，嗜肺军团菌，肺炎支原体，肺炎衣原体，金黄色葡萄球菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于15种肺炎致病菌快速检测的试剂盒，其中，所述15种肺炎致病菌为肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、嗜肺军团菌、肺炎衣原体；所述试剂盒包括：制备的基因芯片、用于多重不对称PCR反应的引物混合液；基因芯片上包括用于与待检样品进行杂交的探针；探针包括第一探针；第一探针用于鉴定肺炎致病菌的特异基因，由此确定被测细菌的种；用于鉴定肺炎链球菌的第一探针，其序列为：CAAAGTAGTACCAAGTGCCATTGATTTTCTTTTTTTTTTTT；用于鉴定金黄...

【技术特征摘要】
1.一种用于15种肺炎致病菌快速检测的试剂盒，其中，所述15种肺炎致病菌为肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、嗜肺军团菌、肺炎衣原体；所述试剂盒包括：制备的基因芯片、用于多重不对称PCR反应的引物混合液；基因芯片上包括用于与待检样品进行杂交的探针；探针包括第一探针；第一探针用于鉴定肺炎致病菌的特异基因，由此确定被测细菌的种；用于鉴定肺炎链球菌的第一探针，其序列为：CAAAGTAGTACCAAGTGCCATTGATTTTCTTTTTTTTTTTT；用于鉴定金黄色葡萄球菌的第一探针，其序列为：CAAAGAACTGATAAATATGGACGTGGCTTTTTTTTTTTT；用于鉴定流感嗜血杆菌的第一探针，其序列为：GAACGTGGTACACCAGAATACAACATCGCTTTTTTTTTTTT；用于鉴定肺炎支原体的第一探针，其序列为：TGAGGTGAATGGGTTGTTGAATCCGTTTTTTTTTTTT；用于鉴定铜绿假单胞菌的第一探针，其序列为：TTGTGCCTGCTCGACCCGCTGGACGGGGTCTACAACTACCTCGCCCAGTTTTTTTTTTTT；用于鉴定鲍曼不动杆菌的第一探针，其序列为：TCGATCCACGTGCTAAAGTGATTTTTTTTTTTTT；用于鉴定粪肠球菌的第一探针，其序列为：TTACATGGGCCAAATGGTGAAGATGGAACATTTTTTTTTTTT；用于鉴定屎肠球菌的第一探针，其序列为：TCCTTTTTCCGTCATCAGTATAAAGTATAGTTTTTTTTTTTT；用于鉴定肺炎克雷伯杆菌的第一探针，其序列为：AAAGCCGGCGTGTACGATAATTTTTTTTTTTT；用于鉴定大肠埃希菌的第一探针，其序列为：CGCCAAATCCGCAACGTAATGACAGTGTACCAACCCTTTTTTTTTTTTT；用于鉴定阴沟肠杆菌的第一探针，其序列为：GCAGGCGATCTGTACGTTCAGGTTTTTTTTTTTTT；用于鉴定嗜麦芽窄食单胞菌的第一探针，其序列为：TACCACCCGTACCTGGACTTTTTTTTTTTTT；用于鉴定洋葱伯克霍尔德菌的第一探针，其序列为：TGGTGCGCTCGGGCTCGATCGACATTTTTTTTTTTTT；用于鉴定嗜肺军团菌的第一探针的序列为：ATAGCATTGGTGCCGATTTGGGGAAGAATTTTTTTTTTTT；用于鉴定肺炎衣原体中的第一探针，其序列为：ACTGCCGTAGATAGACCTAACCCGGCCTATTTTTTTTTTTT；探针包还包括第二探针；第二探针用于鉴定肺炎致病菌的16SrDNA基因，由其确定被测细菌的属；用于鉴定所述肺炎链球菌的第二探针，其序列为：TGTGAGAGTGGAAAGTTCACACTGTTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述金黄色葡萄球菌的第二探针，其序列为：ACATATGTGTAAGTAACTGTGCACATCTTGACGGTATTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述流感嗜血杆菌的第二探针，其序列为：GAGGAAGGTTGATGTGTTATTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述肺炎支原体的第二探针，其序列为：GACCTGCAAGGGTTCGTTTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述铜绿假单胞菌的第二探针，其序列为：TTGCTGTTTTGACGTTACTTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述鲍曼不动杆菌的第二探针，其序列为：CCTAGAGATAGTGGACGTTACTTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述粪肠球菌的第二探针，其序列为：AGTGCTTGCACTCAATTGGAAAGAGGAGTGGTTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述屎肠球菌的第二探针，其序列为：CAAGGATGAGAGTAACTGTTCATCCCTTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述嗜麦芽窄食单胞菌的第二探针，其序列为：CCAGCTGGTTAATACCCGGTTGGGATTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述洋葱伯克霍尔德菌的第二探针，其序列为：TTGGCTCTAATACAGTCGGTTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述嗜肺军团菌的第二探针，其序列为：AGGGTTGATAGGTTAAGAGCTGATTAATTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述肺炎衣原体中的第二探针，其序列为：CCGAATGTAGTGTAATTAGGCTTTTTTTTTTTT；用于鉴定所述肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌的第二探针，其序列为：GGTTAATAACCTCATCGATTGACGTTACCCTGCTTTTTTTTTTTT；所述引物包括16对引物，每对引物下游5’端标记生物素，其中：对应于肺炎链球菌的特异基因lytA的正向引物lytA-F的序列为：CCATCTGGCTCTACTGTGAA，反向引物lytA-R的序列为：GAGAACGGCTTGACGATT；对应于金黄色葡萄球菌的特异基因nuc的正向引物nuc-F的序列为：AGCGATTGATGGTGATAC，反向引物nuc-R的序列为：AAGCCTTGACGAACTAAAG；对应于流感嗜血杆菌的特异基因P6的正向引物P6-F的序列为：TCTAACAACGATGCTGCAGG，反向引物P6-R的序列为：CCAGCATCAACACCTTTACC；...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈良安，马秀清，王升启，刘琪琦，李春笋，梁志欣，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京,11