聚合酶组合物、制备和使用所述聚合酶组合物的方法技术

本公开内容提供了用于核酸聚合的组合物、方法、试剂盒、系统和装置。具体地，提供了允许核酸扩增的修饰的聚合酶及其生物活性片段。在一个方面，本公开内容涉及用于核酸测序、基因分型、拷贝数变异分析、双端测序和其它形式的遗传分析的修饰的聚合酶。在一些方面，本公开内容涉及用于产生用于各种下游过程的核酸文库或核酸模板的修饰的聚合酶。在一些方面，本公开内容涉及可跨聚合酶的种类或家族转移以提供具有改变的催化性质的新型聚合酶的同源氨基酸突变的鉴定。在一些方面，本公开内容提供了相较于参照聚合酶具有增强的催化性质的修饰的聚合酶。

Polymerase composition, method for preparation and use of the polymerase composition

The present disclosure provides compositions, methods, kits, systems and devices for nucleic acid polymerization. Specifically, a modified polymerase allowing for nucleic acid amplification and its biologically active fragment are provided. In one aspect, this disclosure relates to modified polymerases for nucleic acid sequencing, genotyping, copy number variation analysis, double ended sequencing, and other forms of genetic analysis. In some aspects, this disclosure relates to a polymerase that is used to produce nucleic acid libraries or nucleic acid templates for various downstream processes. In some respects, this disclosure relates to the identification of a class of amino acid mutations that can be crossed polymerase type or family transfer to provide a novel polymerase with altered catalytic properties. In some respects, this disclosure provides a modified polymerase that has enhanced catalytic properties compared to the reference polymerase.

【技术实现步骤摘要】
聚合酶组合物、制备和使用所述聚合酶组合物的方法本申请是申请日为2012年8月10日、专利技术名称为“聚合酶组合物、制备和使用所述聚合酶组合物的方法”的中国专利技术专利申请No.201280048344.9的分案申请。相关申请的交叉参考本申请要求在35U.S.C.§119(e)下保护2011年8月10日提交的美国临时申请号61/522,125、2011年10月10日提交的美国临时申请号61/545,434、2012年1月10日提交的美国临时申请号61/585,133、2012年5月7日提交的美国临时申请号61/643,844和2012年8月9日提交的标题为"POLYMERASECOMPOSITIONS,METHODSOFMAKINGANDUSINGTHESAME"的美国临时申请号61/681,593的优先权的利益，将所述美国临时申请的公开内容通过引用整体并入本文。序列表本申请因此通过引用并入与其一起提交的电子序列表的材料。将电子序列表中的材料以2012年8月9日创建的标题为“LT00556PCT_Sequence_Listing_ST25.txt”的文本(.txt)文件提交，所述文件具有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于进行核酸扩增的方法，包括：产生具有修饰的聚合酶、引物、核酸模板以及一个或多个核苷酸的扩增反应混合物，其中所述修饰的聚合酶具有SEQ ID NO:15所示的序列，并且还包含选自下组的一个或多个氨基酸取代：E471K、N485R、R492K、D513K、A675K、D732R、S739W、V740R和E745Q，其中所述编号是相对于SEQ ID NO:15的氨基酸序列的，并且所述修饰的聚合酶相对于具有SEQ ID NO:15所示序列的参照聚合酶具有增加的解离时间常数；和将扩增反应混合物经历扩增条件，其中使用所述修饰的聚合酶将所述一个或多个核苷酸的至少一个聚合至引物的末端。

【技术特征摘要】
2011.08.10 US 61/522,125;2011.10.10 US 61/545,434;1.一种用于进行核酸扩增的方法，包括：产生具有修饰的聚合酶、引物、核酸模板以及一个或多个核苷酸的扩增反应混合物，其中所述修饰的聚合酶具有SEQIDNO:15所示的序列，并且还包含选自下组的一个或多个氨基酸取代：E471K、N485R、R492K、D513K、A675K、D732R、S739W、V740R和E745Q，其中所述编号是相对于SEQIDNO:15的氨基酸序列的，并且所述修饰的聚合酶相对于具有SEQIDNO:15所示序列的参照聚合酶具有增加的解离时间常数；和将扩增反应混合物经历扩增条件，其中使用所述修饰的聚合酶将所述一个或多个核苷酸的至少一个聚合至引物的末端。2.权利要求1所述的方法，其中所述扩增条件包括高离子强度溶液的存在。3.权利要求2所述的方法，其中所述高离子强度溶液含有约100mM至约500mM的盐。4.权利要求3所述的方法，其中所述盐包括NaCl和/或KCl。5.权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·范德霍恩，T·尼基弗罗夫，罗国斌，M·兰狄斯，D·马祖尔，E·托泽，T·林斯库姆，
申请(专利权)人：生命技术公司，
类型：发明
国别省市：美国,US