一种蛋白调控系统及其制备方法和应用技术方案

本发明专利技术涉及一种蛋白调控系统及其制备方法和应用，所述蛋白调控系统中的二氢叶酸还原酶与所要调控的目的蛋白之间采用刚性连接肽进行连接，所述刚性连接肽为(EAAAK)n或A(EAAAK)nA，其中n为1‑6中的任意整数，优选n为6。本发明专利技术的蛋白调控系统具有更高的目的蛋白表达量、更高的调控比例和更高的调控幅度，具有很广阔的应用价值。

A protein regulation system and preparation method and application thereof

The invention relates to a protein regulation system and preparation method and application thereof, between the dihydrofolate reductase protein regulation system and the regulation of protein peptide use of rigid connection, the rigid connection peptide (EAAAK) or n A (EAAAK) nA, where n is the 1 arbitrary integer 6 the optimum N was 6. The protein regulatory system of the present invention has higher target protein expression, higher regulation ratio and higher regulation range, and has wide application value.

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白调控系统及其制备方法和应用
本专利技术属于生物工程领域，涉及一种蛋白调控系统及其制备方法和应用，具体涉及一种采用刚性连接肽连接后优化的蛋白调控系统及其应用。
技术介绍
DDD(DHFRdegradationdomain)调控系统是一种利用泛素蛋白酶系统对目的蛋白进行调控的调控系统，它利用大肠杆菌的二氢叶酸还原酶(ecDHFR)与目标蛋白融合通过控制稳定剂添加与否对目的蛋白进行蛋白水平的调控。ecDHFR可以被DHFR抑制剂甲氧苄氨嘧啶(TMP)所稳定。当没有添加稳定剂TMP时，ecDHFR及与其融合的蛋白会被泛素标记，然后被蛋白酶体识别并降解，从而实现目的蛋白的不表达。而当添加稳定剂TMP时，TMP会与ecDHFR结合并且稳定ecDHFR，从而使ecDHFR及与其融合的蛋白保持稳定的状态不被泛素化降解，目的蛋白可以正常表达。TMP与ecDHFR结合从而稳定蛋白不被降解这个状态是可逆的，添加TMP可以稳定ecDHFR，而撤走TMP会导致ecDHFR及其融合蛋白的降解，从而通过控制TMP的量来控制目的蛋白的表达水平。TMP是一种常用并且廉价的人用药，可以直接在人体上使用。另外TM本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白调控系统，其特征在于，所述蛋白调控系统中的二氢叶酸还原酶与所要调控的目的蛋白之间采用刚性连接肽进行连接。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白调控系统，其特征在于，所述蛋白调控系统中的二氢叶酸还原酶与所要调控的目的蛋白之间采用刚性连接肽进行连接。2.根据权利要求1所述的蛋白调控系统，其特征在于，所述刚性连接肽为(EAAAK)n或A(EAAAK)nA，其中n独立地选自1-6中的任意整数，优选n为6；优选地，所述刚性连接肽为A(EAAAK)nA，其中n为1-6中的任意整数，优选n为6。3.根据权利要求1或2所述的蛋白调控系统，其特征在于，所述目的蛋白为胞内蛋白和/或膜蛋白；优选地，所述膜蛋白为嵌合抗原受体。4.一种如权利要求1-3中任一项所述的蛋白调控系统的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：构建二氢叶酸还原酶-刚性连接肽-目的蛋白表达载体，并将构建后的表达载体转染到表达宿主中，得到所述蛋白调控系统。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述刚性连接肽为(EAAAK)n或A(EAAAK)nA，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁兴祥，王美玲，郭文中，秦莉，姚永超，陈小平，
申请(专利权)人：广州中科蓝华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44