提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法。传统的在昆虫细胞培养时多采用的是磷酸盐缓冲系统，其培养过程中无需添加CO2，目的蛋白的表达量比较低。本发明专利技术创造性的发现在昆虫细胞培养时，无论是在瞬时转染还是在稳定细胞池的蛋白表达生产过程中，在培养箱中添加CO2或通过转染后将透气盖子换成密封盖以通过昆虫细胞自身呼吸作用增加瓶中CO2浓度的方法都可以提高蛋白的表达量，并且提升效果显著。在昆虫细胞培养过程中在培养箱中添加CO2或将培养瓶盖子换成密封盖简单易行，成本低，是可以广泛使用的并可显著提高昆虫细胞蛋白表达量的方法。

Method for enhancing transient transfection and stable expression of protein expression of insect cells

The invention discloses a method for increasing the transient transfection of insect cells and stabilizing the expression amount of the expressed protein. The traditional phosphate buffer system used in insect cell culture does not need to add CO2 during culture, and the expression of target protein is relatively low. The invention creatively found in insect cell culture, both in transient transfection or in stable cell pool protein expression in the production process, add in the culture box or by CO2 after transfection will change into the sealing cover to cover air respiration through its insect cell concentration of CO2 is increased in the bottle can improve expression protein, and significantly enhance the effect of. In the process of insect cell culture, adding CO2 in the incubator or replacing the cover of the culture bottle into a sealed cap is simple, low cost and can be widely used and can significantly improve the expression of insect cell protein.

【技术实现步骤摘要】
提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法
本专利技术涉及生物工程领域，尤其是涉及一种提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法。
技术介绍
昆虫细胞表达系统已被用于包括组织因子和抗体等在内的许多人类重组蛋白的表达(Kost等，1997)。目前，昆虫表达系统主要用于表达亚单位疫苗，除了兽用疫苗还用于生产部分人类疫苗以及重组病毒(Maranga等，2002；Ryan和walsh等，2012；Yang等，2013；Miller等，2012)。果蝇S2(DrosophilaSchneider2)细胞和草地贪夜蛾Sf9(Spodopterafrugiperda)细胞是常用于异源基因表达的昆虫细胞，可通过构建稳定细胞池的方法进行重组蛋白表达。近年来昆虫细胞已成功用于表达一些具有生物活性的受体蛋白、离子通道蛋白、细胞骨架蛋白、转录因子、激素和凝血因子等(Millar等，1995；Millar等1994；Tota等1995；Towers和Sattelle等2002；Mennella等，2005；Winslow等，1989；Change等，2005；Zmora等，2007；Vatandoos本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法，其特征在于，包括如下步骤：配制转染试剂溶液：将线性聚乙烯亚胺溶于pH 3‑10的无菌水中，配制成浓度为0.1‑10g/ml的转染试剂溶液；配制转染复合物：按照线性聚乙烯亚胺与待转染的含目的DNA的质粒的质量比为1‑20:1的比例将所述转染试剂溶液与待转染的含目的DNA的质粒溶液加入无菌水中，震荡混匀，形成转染复合物；瞬时转染：将所述转染复合物加入已传代培养的果蝇S2细胞或草地贪夜蛾Sf9细胞的细胞悬液中，摇晃培养，得到已转染含目的DNA的质粒的昆虫细胞，将所述昆虫细胞于16‑40℃、120‑300rpm、2％‑10％CO2培养箱中摇晃培养，或...

【技术特征摘要】
1.一种提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法，其特征在于，包括如下步骤：配制转染试剂溶液：将线性聚乙烯亚胺溶于pH3-10的无菌水中，配制成浓度为0.1-10g/ml的转染试剂溶液；配制转染复合物：按照线性聚乙烯亚胺与待转染的含目的DNA的质粒的质量比为1-20:1的比例将所述转染试剂溶液与待转染的含目的DNA的质粒溶液加入无菌水中，震荡混匀，形成转染复合物；瞬时转染：将所述转染复合物加入已传代培养的果蝇S2细胞或草地贪夜蛾Sf9细胞的细胞悬液中，摇晃培养，得到已转染含目的DNA的质粒的昆虫细胞，将所述昆虫细胞于16-40℃、120-300rpm、2％-10％CO2培养箱中摇晃培养，或者于16-40℃、120-300rpm培养箱中以密封盖封住密封培养；稳定细胞池蛋白表达：以所述瞬时转染构建的所述昆虫细胞构建稳定细胞池，以1-8×106个昆虫细胞/ml的密度接种后，于16-40℃、120-300rpm、2％-10％CO2培养箱中摇晃培养，或者于16-40℃、120-300rpm培养箱中以密封盖封住密封培养。2.如权利要求1所述的提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法，其特征在于，所述线性聚乙烯亚胺的分子量范围为2.5-40kD，优选25kD。3.如权利要求1所述的提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法，其特征在于，在所述配制转染试剂溶液过程中，所述无菌水的pH为5.0-7.0，优选pH为6.1。4.如权利要求1所述的提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法，其特征在于，在所述配制转染试剂溶液过程中，配制的转染试剂溶液中线性聚乙烯亚胺的浓度为0.1-2g/ml，优选1g/ml。5.如权利要求1所述的提高昆虫细胞瞬时转染和稳定表达蛋白表达量的方法，其特征在于，在所述配制转染复合物过程中，对于果蝇S2细胞是按照线性聚乙烯亚胺与待转染的含目的DNA的质粒的质量比为2:1的比例配制；对于草地贪夜蛾Sf9细胞是按照线性聚乙烯...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈潇，
申请(专利权)人：广州汉腾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44