检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，涉及体外诊断技术领域。该试剂盒，采用线性免疫分析法，将牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、蛋清/蛋黄、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦共14种常见食物特异性IgG过敏原和质控线及临界值线平行包被在硝酸纤维素膜上，通过一份临床样本和一次检测反应，即可检测人血清中的14种食物过敏原的IgG抗体，克服了当前Elisa方法学试剂盒相关抗体逐一单独检测在操作上的繁琐，大大提高检测效率。

Immunoblotting kit for detection of 14 common food allergen IgG antibodies

The utility model discloses an immunoblotting kit for detecting 14 common food allergen IgG antibodies, which relates to the field of in vitro diagnostic technology. The kit, using linear immunoassay, beef, chicken, fish, corn, crab, egg, milk, mushrooms, pork, rice, shrimp, soybean and tomato and wheat were 14 common food specific IgG and allergen control line and the critical value of parallel lines was coated on the nitrocellulose membrane last, through a clinical sample and a detection reaction, detection of human serum can be in 14 kinds of food allergen IgG antibody, can overcome the current Elisa methodology kit antibodies individually detected in the cumbersome operation, greatly improve the detection efficiency.

【技术实现步骤摘要】
检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒
本技术涉及体外诊断
，尤其涉及一种检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒。
技术介绍
目前，临床实验室检测样本中的14项常见食物过敏原，一般采用酶联免疫法(Elisa)进行检测，该方法是将过敏原包被在96微孔板中，通过临床样本的孵育反应，最后通过酶标仪进行结果判读。这种检测方法由于一次实验只能检测单一指标，通量低，检测成本高，对于扩大过敏原检测项目存在着局限性。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，从而解决现有技术中存在的前述问题。为了实现上述目的，本技术采用的技术方案如下：一种检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，包括：膜条，平行设置在所述膜条上的14条检测线、质控线和临界值线，所述14条检测线依次由：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、蛋清/蛋黄、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦共14种常见食物特异性过敏原包被。优选地，还包括透明的PVC胶片，所述膜条固定在所述PVC胶片上。优选地，所述膜条为硝酸纤维素膜。优选地，还包括样本稀释液、浓缩洗液、酶结合物和底物液，所述样本稀释液为含有山羊血清的Tris缓冲液，所述浓缩洗液为10×的Tris缓冲液，所述酶结合物为碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，所述底物液为NBT/BCIP。本技术的有益效果是：本技术实施例提供的检测14项常见食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，采用线性免疫分析法，将牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、蛋清/蛋黄、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦共14种常见食物特异性IgG过敏原和质控线及临界值线平行包被在硝酸纤维素膜上，通过一份临床样本和一次检测反应，即可检测人血清中的14种食物过敏原的IgG抗体，克服了当前Elisa方法学试剂盒相关抗体逐一单独检测在操作上的繁琐，大大提高检测效率。附图说明图1是本技术提供的免疫印迹试剂盒的膜条的布线结构示意图；图2是本技术提供的免疫印迹试剂盒的膜条的布线截面示意图。图中，各符号的含义如下：1质控线，2临界值线，3-16依次为包被有如下14种常见食物特异性过敏原的检测线：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、蛋清/蛋黄、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦，17PVC胶片，18双面胶，19膜条。具体实施方式为了使本技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图，对本技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本技术，并不用于限定本技术。如图1-2所示，本技术实施例提供了一种检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，包括：膜条19，平行设置在膜条19上的14条检测线3-16、质控线1和临界值线2，14条检测线3-16依次由：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、蛋清/蛋黄、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦共14种常见食物特异性过敏原包被。上述试剂盒中，14种常见食物过敏原组合符合国人饮食习惯，进行14项单独检测更直观准确，为过敏疾病的预防及预后提供全面指导。本实施例提供的试剂盒，还包括透明的PVC胶片17，膜条19固定在PVC胶片17上。实际制作过程中，可以使用双面胶18将膜条19固定在PVC胶片17上。上述试剂盒中，膜条19为硝酸纤维素膜。过敏原的包被可以通过自动化点样仪高精度包被于硝酸纤维素膜，可根据检测需求进行合理排序和组合。本技术实施例提供的免疫印迹试剂盒，还包括样本稀释液、浓缩洗液、酶结合物和底物液，所述样本稀释液为含有山羊血清的Tris缓冲液，所述浓缩洗液为10×的Tris缓冲液，所述酶结合物为碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，所述底物液为NBT/BCIP。上述试剂盒的实验原理为，将包被有14种常见食物过敏原的膜条用样本缓冲液进行封闭处理，封闭膜上的非特异位点，从而阻止非特异性反应的发生。检测时，膜条与稀释的血清样本共同温育使血清中的抗体与膜条上的抗原结合。利用碱性磷酸酶标记羊抗人IgG检测此结合抗体。加入底物后，结合抗体上标记的酶催化底物反应，并在过敏原包被的位置产生可见的条带。根据条带是否显色，可判断受试者的抗体特性，如果明显显色判定为该抗体阳性，如果不显色则判定为阴性。通过以硝酸纤维素膜为载体进行包被，实现14种常见食物过敏原联合检测，大大提高了检测效率。使用上述试剂盒，可以通过一份临床样本和一次检测同时检测14种常见食物过敏原，克服了多种过敏原逐一检测在操作上的繁琐，大大提高操作效率，有益于实现高通量。上述结构的免疫印迹试剂盒膜条的制备方法，包含以下步骤：1)配制过敏原包被液，使用包被缓冲液，将共14种食物特异性过敏原和抗人IgG，人IgG稀释至相对的包被浓度。2)使用高精度自动点样仪将配制好的过敏原包被液点样包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线、临界值线和质控线。3)使用惰性蛋白如牛血清白蛋白、酪蛋白或新生牛血清进行非特异性封闭。4)将封闭好的膜条至于湿度低于30％的条件下干燥。5)通过定制的双面胶将干燥后的膜条粘贴按相关序列固定于PVC衬板上。6)使用斩切机将组装好的条斩切成单人份。本试剂盒的其他组分包括：上述结构的免疫印迹试剂盒，在使用时，先进行以下的预处理：浓缩洗液的稀释：稀释前应使其全部溶解。将浓缩洗液(10×)与蒸馏水或纯化水1:9稀释。例如：1份浓缩洗液(10×)加9份蒸馏水或纯化水。酶结合物的配制：10倍浓缩。吸取所需酶结合物，并用样本缓冲液1:10稀释。其使用方法包括以下步骤：1.将抗原膜条置于孵育槽中，带有文字标记的一面朝上；每槽加入1.5ml样本缓冲液，将膜条在室温下摇摆摇床轻微晃动5分钟，其后弃去孵育槽中液体。2.每槽加入1.5ml稀释的血清样品，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育30分钟。3.弃去孵育槽中液体，每槽加入1.5ml清洗缓冲液，室温下在摇摆摇床上轻微晃动5分钟，弃去孵育槽中液体。再重复洗涤2次。4.弃去孵育槽中液体，每槽加入1.5ml稀释后的酶结合物，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育30分钟。5.重复步骤3。6.弃去孵育槽中液体，每槽加入1.5ml底物液，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育10分钟。7.弃去孵育槽中液体，每槽加入1.5ml蒸馏水或纯化水，室温下在摇摆摇床上轻微晃动1分钟，弃去孵育槽中液体。再重复洗涤2次。.8.膜条干燥后，可将抗原膜条粘贴于结果记录单上，以便保存实验结果。上述结构的免疫印迹试剂盒，其性能鉴定的方法为：位于检测膜条标志下方反应区域依次有质控线、临界值线。如果质控线出现强的颜色反应，临界值线有微弱显色，并且质控线显色强于临界值线，则说明实验结果有效。如果质控线未出现强的颜色反应，则说明实验结果无效。可将结果判读卡的标示条带与膜条上的相应条带对齐，比对检测条带位置。根据抗原条带显色程度，可将结果判读为阴性和阳性。阳性：抗原条带显色较临界值线一致或更深；阴性：抗原条带显色较临界值线浅。通过采用本技术公开的上述技术方案，得到了如下有益的效果：本技术实施例提供的检测14项常见食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，采用线性免疫分析法，将牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、蛋清/蛋黄、蘑菇、牛奶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，其特征在于，包括：膜条，平行设置在所述膜条上的14条检测线、质控线和临界值线，所述14条检测线依次由：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、蛋清/蛋黄、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦共14种常见食物特异性过敏原包被；还包括样本稀释液、浓缩洗液、酶结合物和底物液，所述样本稀释液为含有山羊血清的Tris缓冲液，所述浓缩洗液为10×的Tris缓冲液，所述酶结合物为碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，所述底物液为NBT/BCIP；所述的免疫印迹试剂盒，还包括透明的PVC胶片，使用双面胶将所述膜条固定在所述PVC胶片上；所述膜条为硝酸纤维素膜。

【技术特征摘要】
1.一种检测常见14项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，其特征在于，包括：膜条，平行设置在所述膜条上的14条检测线、质控线和临界值线，所述14条检测线依次由：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、蛋清/蛋黄、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦共14种常见食物特异性过敏原包被；还包括样本稀释液、...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙冬娜，张逸南，吴利娅，李高扬，刘立敏，
申请(专利权)人：斯德润北京医疗诊断用品有限公司，
类型：新型
国别省市：北京,11