阿司匹林在制备预防和治疗EB病毒相关性鼻咽癌转移的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了阿司匹林在制备预防和治疗EB病毒相关性鼻咽癌转移的药物中的应用。本发明专利技术可以定量检测各人群中血清样外泌体样本中LMP1和miR‑203的表达情况，从而预测鼻咽癌患者发生转移的可能性，以及对患者进行治疗的新策略。

Application of aspirin in the preparation of drugs for the prevention and treatment of EB virus related nasopharyngeal carcinoma metastasis

The present invention discloses the application of aspirin in the preparation of drugs for preventing and treating the metastasis of EB virus related nasopharyngeal carcinoma. The invention can express LMP1 and miR 203 serum samples for quantitative detection of the crowd outside the urinary sample, to predict the likelihood of metastasis in patients with nasopharyngeal carcinoma, as well as a new strategy for the treatment of patients.

【技术实现步骤摘要】
阿司匹林在制备预防和治疗EB病毒相关性鼻咽癌转移的药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及阿司匹林在预防和治疗EB病毒相关性鼻咽癌的药物中的应用。
技术介绍
全球90％人类均能被EB病毒(Eptein-Barrvirus,EBV)感染，且长期处于潜伏感染状态。其与与鼻咽癌(NPC))的发生发展密切相关。目前临床治疗上主要以放射、化疗治疗为主。只有在患者处于I、II期时，放疗可获得较好的治疗效果。但实际情况是，鼻咽癌发病部位隐蔽，大部分患者就诊时，病情已经发展到晚期，放化疗效果不理想，而且容易发生转移。转移是导致晚期患者死亡的主要有原因。阿司匹林是一种历史悠久的解热镇痛药，现多用于预防血栓、心脏病等疾病，尚未有其关于转移方面的研究与应用。EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)EB病毒的主要癌蛋白，能够诱导多种信号通路(如，NF-κB、MAPKkinase(ERK，p38和JNK)、JAK/STAT)，引起上皮细胞形态与表型的改变，促进上皮间质转换(EMT)，导致肿瘤细胞侵袭转移。在低分化和未分化鼻咽癌组织中，EB病毒潜伏蛋白1(LMP1)几乎都能被检测到，且越来越多的研究结果表明，EB病毒的作用伴随着鼻咽癌的发生发展。前期研究发现，EBVLMP1与鼻咽癌转移呈正相关。MicroRNAs是一类高度保守的非编码小RNA，主要通过与靶基因的3'末端非翻译区互补配对、从而抑制靶基因的转录和表达，抑制基因的表达，调控机体多种而复杂的生命活动进程。越来越多的证据表明miRNAs表达异常参与肿瘤的发生发展有密切关系。专利技术人前期研究已证明,在EBV相关的鼻咽癌中，LMP1能够通过NF-κB的活化使miR-203低表达或表达缺失，促进肿瘤细胞EMT。外泌体是一类大小为30至150nm的胞外囊泡亚群。绝大多数细胞均能产生外泌体。外泌体包含各种生物大分子，包括DNA，miRNA，mRNA，蛋白质和其他生物活性分子，其通过转移上述分子介导细胞与细胞间的通信，调控受体细胞各项复杂生命活动过程，是微环境中的一种重要介质。研究证明，从肿瘤细胞释放的外泌体能影响肿瘤的形成，生长，转移和耐药。现已观察到EBV阳性肿瘤细胞能够分泌含有LMP1的外泌体。某些蛋白或分子可在外泌体中富集，进入血液，从而比直接检测更容易。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提出阿司匹林(ASP)抑制EBV相关鼻咽癌的转移，为该类型患者提供转移方面的预防和治疗新策略。并结合检测血清外泌体中LMP1和miR-203的表达，辅助诊断患者转移发生的风险性，并及时给予ASP的治疗，有效抑制肿瘤的转移，为鼻咽癌的抗转移治疗提供了新的策略。我们研究表明，在鼻咽癌组织样本中，LMP1与miR-203表达呈负相关。ASP处理肿瘤细胞，抑制NF-κB的活化，促进miR-203表达。并且，ASP通过抑制EBV阳性细胞中LMP1的外泌并增加miR-203的外泌，抑制NPC细胞的EMT和转移。在外泌体中，LMP1和miR-203也存在负性关系。在裸鼠实验中，通过注射具有高转移性的NPC细胞5-8F，并对实验组裸鼠给以ASP治疗，对照组不进行ASP处理。结果显示，与对照组相比，肿瘤细胞5-8F转移到肺组织的概率明显降低。这些研究结果提示，在EBV相关鼻咽癌中，ASP能够作为抑制鼻咽癌患者转移的预防和治疗新药物(ASP能够抑制具有高转移性鼻咽癌细胞系5-8F的转移)，并结合检测外泌体中LMP1和miR-203的表达，为鼻咽癌患者转移的诊断、预防和治疗提供新的方法。ASP在EB病毒相关性鼻咽癌转移的治疗应用中，具有巨大潜力。本专利技术中判定给予ASP治疗的辅助性检测指标与方法，即为检测血清外泌体中LMP1和miR-203的表达。该检测方法流程为：(1)提取鼻咽癌患者血清外泌体47例，正常人血清11例，提取总RNA；(2)以总RNA为模板，逆转录为cDNA；(3)以LMP1和miR-203特异性引物，荧光定量PCR检测LMP1和miR-203的表达，β-actin和U6分别为内参基因。定量ΔCT＝待测基因LMP1与内参基因平均ΔCT值的差值，判断ΔCT是否小于过等与2.46，当ΔCT≤2.46时，提示LMP1高表达，患者转移风险大，考虑给予患者ASP治疗；或者定量ΔCT＝待测基因miR-203与内参基因U6平均ΔCT值的差值，判断ΔCT是否小于或等于3.15，当ΔCT≤3.15时，提示miR-203高表达，患者肿瘤转移风险小，不需要给予患者ASP治疗。上述方法中，荧光定量PCR时，所用的LMP1的特异性引物为：正向：5'-TGAACACCACCACGATGACT-3'(SEQIDNO.1)反向：5'-GTGCGCCTAGGTTTTGAGAG-3'(SEQIDNO.2)所用内参基因β-actin引物序列为：正向：5’-TCACCAACTGGGACGACATG-3’(SEQIDNO.3)反向：5’-GTCACCGGAGTCCATCACGAT-3’(SEQIDNO.4)miR-203和U6特异性引物购买于锐博生物公司。总之，鼻咽癌是一种恶性上皮性肿瘤，具有高度转移性。转移是晚期鼻咽癌治疗失败和患者死亡的主要原因。EB病毒(EBV)与鼻咽癌的发生发展密切相关，是公认的致瘤病毒。在我们的研究中发现，EBV编码的癌蛋白LMP1能够通过活化的NF-κB下调上皮特异性miR-203的表达，促进肿瘤细胞上皮间质转换(EMT)。上皮间质转换是发生转移的前奏。阿司匹林(ASP)能够通过抑制NF-κB的活性，促进miR-203的表达，进而抑制鼻咽癌肿瘤细胞的EMT。而且，ASP抑制EBV阳性细胞中LMP1(EBV编码的潜伏膜蛋白1)的外泌，促进被LMP1抑制的miR-203的上调并被装配到外泌体中，将miR-203传递到临近或远处转移的癌细胞中，从而抑制肿瘤细胞EMT和转移的发生。这就提示，可以通过检测待测患者血清中外泌体中LMP1和miR-203的表达，预测病人发生转移的风险，并以此来判定是否给予鼻咽癌患者ASP的治疗及疗效的评估。检测血液外泌体中LMP1和miR-203的表达，既方便，又不会对患者造成创伤。ASP应用于鼻咽癌转移抑制治疗是该药物的一种新用途，检测血液外泌体中LMP1和miR-203的水平决定用药和疗效评估。本专利技术可以定量检测各人群中血清样外泌体样本中LMP1和miR-203的表达情况，从而预测鼻咽癌患者发生转移的可能性，以及对患者进行治疗的新策略。附图说明图1：肿瘤组织中检测LMP1和miR-203的表达图；在鼻咽癌患者肿瘤组织中，LMP1高表达，miR-203低表达，并且LMP1与miR-203的表达呈负相关；Normal代表正常人鼻咽组织样本，Tumors代表鼻咽癌患者鼻咽部组织样本；图2：ASP抑制EBV阳性肿瘤细胞的EMT；A和B，分别用ASP处理EBV阳性细胞系(C666-1和C2089)，抑制NPC重要信号通路NF-κB的活化(p-p65)，促进miR-203以及EMT的上皮标志分子E-cadherin的表达，抑制间质标志分子N-cadherin，slug，snail和Vimentin的表达；DMSO为阴性对照；图3：ASP处理后裸鼠肺组织中的肿瘤细胞转移；A.对照组发生肺转移的H本文档来自技高网...

【技术保护点】
阿司匹林在制备预防和治疗EB病毒相关性鼻咽癌转移的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.阿司匹林在制备预防和治疗EB病毒相关性鼻咽癌转移的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢建红，左埒莲，辛舒雨，李桂源，乐文星，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43