一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法技术

本发明专利技术公开了一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法，包括以下步骤：一、分别称取维生素B1、维生素B2标准品，加入盐酸溶液振荡，超声，待全部溶解后，用盐酸溶液定容，即得储备液A；二、分别称取维生素B6、维生素B12标准品，先用NaOH溶液溶解后，再加盐酸溶液定容，超声，待全部溶解后，即得储备液B；三、分别吸取储备液A和储备液B配成混标溶液，进样，以峰面积对质量浓度绘制标准曲线；四、称取样品，用0.1％甲酸水溶解，超声，加入丙酸锌和铁氰化钾溶液混匀，用0.1％甲酸定容，混匀，滤纸过滤，取滤液用滤膜处理，待上机；五、使用超高效液相色谱测定样品中的水溶性维生素。本发明专利技术具有良好的准确度、精密度。

【技术实现步骤摘要】
一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法
本专利技术涉及B族维生素的定量检测领域，具体涉及一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法。
技术介绍
B族维生素也叫乙族维生素，也叫维他命B、维生素B族或维生素B复合群，主要包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、烟酸、泛酸、叶酸等。B族维生素是维持人体正常机能与代谢活动不可或缺的水溶性维生素，它们推动体内代谢，把糖、脂肪、蛋白质等转化成热量。如果缺少维生素B，则细胞功能马上降低，引起代谢障碍，这时人体会出现怠滞和食欲不振。B族维生素广泛存在于米糠、麸皮、酵母、动物的肝脏、粗粮蔬菜等食物中，但由于食用方法不对，几乎摄取不到。而人体却无法自行制造合成维生素B，所以必须额外补充。B族维生素的测定方法包括荧光法、微生物法、分光光度法、自动测定法、高压液相色谱法和高效毛细管电泳法等。这些方法多数是针对某个单一维生素的测定，近年来国内外学者对多种B族维生素的同时测定进行了大量研究，出现了许多分析方法，其中以高效液相色谱法和高效毛细管电泳法为代表的色谱分析法较为突出。目前，水溶性维生素种类多、结构复杂、分析测定困难。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法，该方法测定水溶性成分效果较好。本专利技术是通过下述技术方案来解决上述技术问题的：一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法，包括以下步骤：一、分别称取相同质量的维生素B1、维生素B2标准品于25mL棕色容量瓶中，加入盐酸溶液并充分振荡，于超声波仪中超声一段时间，待全部溶解后，用0.01mol/L盐酸溶液定容，即得储备液A；二、分别称取相同质量的维生素B6、维生素B12标准品于25mL棕色容量瓶中，先用NaOH溶液溶解后，再加0.01mol/L盐酸溶液定容，于超声波仪中超声一段时间，待全部溶解后，即得储备液B；三、分别吸取一定量的储备液A和储备液B配成不同系列的浓度，于离心管中配成0.05g/mL～2g/mL浓度的混标溶液，进样，以峰面积对质量浓度绘制标准曲线；四、准确称取样品后置于锥形瓶中，用0.1％甲酸水溶解，于超声波仪中超声提取一段时间后，加入丙酸锌和铁氰化钾溶液混匀，冷却至室温后转移至容量瓶中用0.1％甲酸定容，混匀，滤纸过滤，取滤液用滤膜处理，待上机；五、使用超高效液相色谱测定样品中的水溶性维生素。优选的，步骤一中储备液A具体通过以下步骤制得：分别准确称取5mg维生素B1、维生素B2标准品于25mL棕色容量瓶中，加入15mL浓度为0.01mol/L盐酸溶液并充分振荡，超声10min，待全部溶解后，用0.01mol/L盐酸溶液定容，即得浓度为0.2mg/mL的储备液A。优选的，步骤二中储备液B具体通过以下步骤制得：分别准确称取3.75mg维生素B6、维生素B12标准品于25mL棕色容量瓶中，先用1.5mL浓度为2mol/L的NaOH溶液溶解后，再加0.01mol/L盐酸溶液定容，超声10min，即得浓度为0.15mg/mL得储备液B。优选的，步骤三中进样量为0.8-1.2μL。优选的，步骤四中称取样品质量为5-10g。优选的，准确称取样品后经过以下步骤处理：用35-40mL0.1％甲酸水溶解，于超声波仪中超声提取90min，然后，加入丙酸锌和铁氰化钾溶液混匀，冷却至室温后转移至50mL容量瓶中用0.1％甲酸定容，混匀，滤纸过滤，取滤液滤膜用0.22mm水系滤膜处理。优选的，步骤五中超高效液相色谱分析条件为：流动相A：乙腈；流动相B：0.1％甲酸；柱温20℃；紫外检测器，波长275nm；进样体积5L；流速0.2-0.3mL/min，梯度洗脱，运行时间10min。本专利技术具有如下有益效果：本专利技术采用超高效液相色谱(UPLC)可快速完成对4种水溶性维生素B的测定，具有良好的准确度、精密度。测定结果与国标法测定数据比较，结果均在允许范围内，可对较宽浓度范围内的小麦多种水溶性维生素进行同步分析，有助于提高小麦检测的分析效率。本专利技术的其它特征和优点将在随后的具体实施例部分予以详细说明。附图说明图1为本专利技术实施例一种维生素混标的超高效液相色谱图；图2为本专利技术实施例一中小麦样品的超高效液相色谱图。具体实施例下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。以下实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例一本实施例提供了一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法，包括以下步骤：一、维生素标准储备液的配制分别准确称取5mg维生素B1、维生素B2标准品于25mL棕色容量瓶中，加入15mL浓度为0.01mol/L盐酸溶液并充分振荡，超声10min，待全部溶解后，用0.01mol/L盐酸溶液定容，即得浓度为0.2mg/mL的储备液A。分别准确称取3.75mg维生素B6及维生素B12标准品于25mL棕色容量瓶中，先用1.5mL浓度为2mol/L的NaOH溶液溶解后，再加0.01mol/L盐酸溶液定容，超声10min，即得浓度为0.15mg/mL的储备液B，低温避光保存。二、超高效液相色谱(UPLC)分析条件流动相A：乙腈；流动相B：0.1％甲酸；柱温20℃；紫外检测器，波长275nm；进样体积5L；流速0.2mL/min，梯度洗脱，运行时间10min。三、工作曲线的绘制分别吸取一定量的储备液A和储备液B配成不同系列的浓度，于2mL离心管中，配成0.05g/mL浓度的混标溶液。按照上述条件进样，进样量为1.2μL，以峰面积对质量浓度绘制标准曲线。得到4种维生素的线性方程并以3倍信噪比计算相应的检出限。以标准溶液浓度为横坐标c，峰面积为纵坐标y，得到回归方程。4种水溶性维生素均具有良好的线性，相关系数R2>0.99，满足检测需要。方法的线性回归方程、相关系数及检出限，结果见表1。在本试验方法所确定的实验条件下，取一系列标准溶液进行超高效液相色谱测定，以峰面积y对浓度c(ng/mL)做图，找出线性关系。并确定方法最低检测限。表1四种维生素的标准曲线四、样品预处理方法准确称取5g小麦(精确至0.01g)于150mL锥形瓶，用35mL0.1％甲酸水溶解，超声提取90min后，加入丙酸锌和铁氰化钾溶液混匀，冷却至室温后转移至50mL容量瓶中用0.1％甲酸定容，混匀，滤纸过滤，取滤液用0.22mm水系滤膜处理，样品谱图见图1。从图1中可以看出乙腈-0.1％甲酸为流动相分离效果较好，各维生素B的出峰顺序为：维生素B1：0.520min、维生素B6:0.990min、维生素B12:5.572min、维生素B2:6.019min。五、实际样品检测分别用所建立的超高效液相色谱(UPLC)法测定小麦样品中的水溶性维生素，得到的实际测定数据与国标法实测值比较，图2中的结果表明相对误差在1.5％～2.1％，均在允许范围内，说明此法测得的小麦样品的数据准确可靠，适用于小麦及谷物中水溶性维生素的同时测定。小麦中维生素B1、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：一、分别称取相同质量的维生素B1、维生素B2标准品于25mL棕色容量瓶中，加入盐酸溶液并充分振荡，于超声波仪中超声一段时间，待全部溶解后，用0.01mol/L盐酸溶液定容，即得储备液A；二、分别称取相同质量的维生素B6、维生素B12标准品于25mL棕色容量瓶中，先用NaOH溶液溶解后，再加0.01mol/L盐酸溶液定容，于超声波仪中超声一段时间，待全部溶解后，即得储备液B；三、分别吸取一定量的储备液A和储备液B配成不同系列的浓度，于离心管中配成0.05g/mL～2g/mL浓度的混标溶液，进样，以峰面积对质量浓度绘制标准曲线；四、准确称取样品后置于锥形瓶中，用0.1％甲酸水溶解，于超声波仪中超声提取一段时间后，加入丙酸锌和铁氰化钾溶液混匀，冷却至室温后转移至容量瓶中用0.1％甲酸定容，混匀，滤纸过滤，取滤液用滤膜处理，待上机；五、使用超高效液相色谱测定样品中的水溶性维生素。

【技术特征摘要】
1.一种超高效液相色谱测定B族维生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：一、分别称取相同质量的维生素B1、维生素B2标准品于25mL棕色容量瓶中，加入盐酸溶液并充分振荡，于超声波仪中超声一段时间，待全部溶解后，用0.01mol/L盐酸溶液定容，即得储备液A；二、分别称取相同质量的维生素B6、维生素B12标准品于25mL棕色容量瓶中，先用NaOH溶液溶解后，再加0.01mol/L盐酸溶液定容，于超声波仪中超声一段时间，待全部溶解后，即得储备液B；三、分别吸取一定量的储备液A和储备液B配成不同系列的浓度，于离心管中配成0.05g/mL～2g/mL浓度的混标溶液，进样，以峰面积对质量浓度绘制标准曲线；四、准确称取样品后置于锥形瓶中，用0.1％甲酸水溶解，于超声波仪中超声提取一段时间后，加入丙酸锌和铁氰化钾溶液混匀，冷却至室温后转移至容量瓶中用0.1％甲酸定容，混匀，滤纸过滤，取滤液用滤膜处理，待上机；五、使用超高效液相色谱测定样品中的水溶性维生素。2.根据权利要求1所述的超高效液相色谱测定B族维生素的方法，其特征在于，步骤一中储备液A具体通过以下步骤制得：分别准确称取5mg维生素B1、维生素B2标准品于25mL棕色容量瓶中，加入15mL浓度为0.01mol/L盐酸溶液并充分振荡，超声10min，待全部溶解后，用0.01mol/L盐酸溶液定容，即得储备液A。3.根据权利要求2所述的超高效液相色谱测定B族维生素的方法，其特征在于，所述储备液A的浓度为0.2mg/mL。4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：董秋月，
申请(专利权)人：杭州更蓝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33