一种富集BRCA1和BRCA2基因目标区域的引物、方法、试剂盒及其应用技术

技术编号：16417445 阅读：47 留言：0更新日期：2017-10-21 10:03

本发明专利技术公开了一种富集BRCA基因目标区域的引物、方法、试剂盒及其应用，涉及生物技术领域。所述引物具有如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.52所示的序列，是将扩增区段包含BRCA1和BRCA2基因所有外显子和外显子侧翼的内含子区域的一套26对引物优化组合得到的5组引物对；本发明专利技术通过这5个引物组将PCR反应数降低到了5个；在对待测样品进行扩增时，利用5组引物对中的每组引物对进行多重PCR扩增所得到的5组的扩增产物中，每组扩增产物的扩增片段之间长度有明显区别，不但使得扩增产物质量易于监控，而且还实现待测样品中的BRCA1和BRCA2基因目标区域的100％富集；将其用于基因序列突变的检测，效率高、准确性好、成本低廉、方法简单。

Primers, methods, kits and applications for enriching target regions of BRCA1 and BRCA2 genes

The invention discloses a primer, a method, a kit and its application for enriching the target area of BRCA gene, and relates to the field of biotechnology. The primer sequences with SEQ ID as NO.1 to SEQ ID NO.52 shown, is the section containing BRCA1 and BRCA2 gene amplification of all exons and exon intron regions flanking a set of 26 of the 5 sets of primers optimized primer combination is obtained; the invention through the 5 the primer set PCR reaction number is reduced to 5; in the amplified samples tested, for each primer pairs were amplified by multiplex PCR obtained 5 groups of PCR products using 5 sets of primers, each PCR product amplified fragment length have the obvious difference, not only makes the amplified material quantity is easy to monitor, but also realize the measured 100% BRCA1 and BRCA2 gene target region in the sample enrichment; for the detection of gene mutation, high efficiency, good accuracy, low cost, simple method.

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【技术实现步骤摘要】
一种富集BRCA1和BRCA2基因目标区域的引物、方法、试剂盒及其应用
本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种利用多重PCR富集BRCA1和BRCA2基因区域的引物、方法、试剂盒及其应用。
技术介绍
BRCA1和BRCA2是重要的抑癌基因，参与染色体损伤修复过程。BRCA1和BRCA2的突变可能造成基因功能的降低或缺失，进而增加细胞癌变的风险。现有的数据显示，这两个基因的胚系突变是造成遗传性乳腺及卵巢癌的最重要因素，突变携带者一生中罹患乳腺癌的几率可高达87％，卵巢癌的几率可高达44％。因此，对高危人群进行BRCA1/2基因突变检测，对于癌症的预防，发现和治疗有着重要的指导意义。BRCA1和BRCA2已发现的突变大部分是单个碱基的突变或少量碱基的缺失和插入。这些突变可以造成基因产物氨基酸序列的改变、翻译的提前终止、或信使RNA加工的异常，进而影响蛋白的功能。为了检测这些突变，常规方法是PCR扩增得到感兴趣的基因片段后，以Sanger法进行序列测定。全面扫描两个基因所有编码外显子通常需要进行80个以上的PCR反应，扩增片段通常采用正反双向测序以保证准确性，工作量较大，成本较高。越来越多的实验室开始采用二代测序技术来检测BRCA1和BRCA2的突变。二代测序技术由于其高通量的特性，可以覆盖更大的基因组区域，并且在一次测序中可以完成多个样本的突变检测。基因组目的区域的富集是这一技术的关键。大型实验室多采用杂交捕获技术或微滴PCR、微流体PCR等技术。这些技术各有其优点，但在成本和仪器要求上均有较高要求。例如，申请号201610334650.9公开的用于扩增人...
一种富集BRCA1和BRCA2基因目标区域的引物、方法、试剂盒及其应用

【技术保护点】
一种富集BRCA1和BRCA2基因目标区域的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括：从其扩增区段包含BRCA1和BRCA2基因所有外显子和外显子侧翼的内含子区域的多对引物中得到的五组引物对；其中，所述五组引物对是根据所述多对引物对BRCA1和BRCA2基因扩增得到的扩增片段的大小进行分组得到的，以便将PCR反应数降低到5个；其中，在对待测样品中的BRCA1和BRCA2基因进行扩增时，利用所述五组引物对中的每组引物对分别对待测样品中的BRCA1和BRCA2基因进行多重PCR处理，得到5组的扩增产物，实现待测样品中的BRCA1和BRCA2基因目标区域的100％富集；其中，每组扩增产物的扩增片段之间长度有明显区别，其中，所述引物组合具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.52所示的序列。

【技术特征摘要】
2016.12.29 CN 20161124158701.一种富集BRCA1和BRCA2基因目标区域的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括：从其扩增区段包含BRCA1和BRCA2基因所有外显子和外显子侧翼的内含子区域的多对引物中得到的五组引物对；其中，所述五组引物对是根据所述多对引物对BRCA1和BRCA2基因扩增得到的扩增片段的大小进行分组得到的，以便将PCR反应数降低到5个；其中，在对待测样品中的BRCA1和BRCA2基因进行扩增时，利用所述五组引物对中的每组引物对分别对待测样品中的BRCA1和BRCA2基因进行多重PCR处理，得到5组的扩增产物，实现待测样品中的BRCA1和BRCA2基因目标区域的100％富集；其中，每组扩增产物的扩增片段之间长度有明显区别，其中，所述引物组合具有如SEQIDNO.1、SEQIDNO.52所示的序列。2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述五组引物对包括：如SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.17、SEQIDNO.18、SEQIDNO.23、SEQIDNO.24、SEQIDNO.33、SEQIDNO.34、SEQIDNO.43、SEQIDNO.44所示的第一引物组，其中，所述SEQIDNO.13和SEQIDNO.14、SEQIDNO.17和SEQIDNO.18、SEQIDNO.23和SEQIDNO.24、SEQIDNO.33和SEQIDNO.34、SEQIDNO.43和SEQIDNO.44为五对互为上下游引物；如SEQIDNO.7、SEQIDNO.8、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.21、SEQIDNO.22、SEQIDNO.27、SEQIDNO.28、SEQIDNO.37、SEQIDNO.38所示的第二引物组，其中，所述SEQIDNO.7和SEQIDNO.8、SEQIDNO.11和SEQIDNO.12、SEQIDNO.21和SEQIDNO.22、SEQIDNO.27和SEQIDNO.28、SEQIDNO.37和SEQIDNO.38为五对上下游引物；如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.31、SEQIDNO.32、SEQIDNO.35、SEQIDNO.36、SEQIDNO.39、SEQIDNO.40、SEQIDNO.41、SEQIDNO.42、SEQIDNO.49、SEQIDNO.50所示的第三引物组，其中，所述SEQIDNO.1和SEQIDNO.2、SEQIDNO.31和SEQIDNO.32、SEQIDNO.35和SEQIDNO.36、SEQIDNO.39和SEQIDNO.40、SEQIDNO.41和SEQIDNO.42、SEQIDNO.49和SEQIDNO.50为六对互为上下游引物；如SEQIDNO.5、SEQIDNO.6、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16、SEQIDNO.19、SEQIDNO.20、SEQIDNO.25...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建云，汪彪，
申请(专利权)人：北京明谛生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11

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