一种利用链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基制造技术

本发明专利技术涉及一种利用链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基，包括种子培养基和发酵培养基，所述种子培养基是由燕麦粉、甜菜糖蜜、蚕蛹粉、菌体蛋白、麸皮水解液、醋酸铵和轻质碳酸钙组成，所述发酵培养基是由丙三醇、燕麦粉、甜菜糖蜜、蚕蛹粉、菌体蛋白、麸皮水解液、鱼蛋白胨、醋酸、轻质碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸亚铁和美国陶氏DOWFAX 20A64抑泡剂组成。利用本发明专利技术中提供的培养基配方，能够提高奈马菌素发酵单位，缩短发酵周期，降低发酵成本，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现奈马菌素稳定、高效的生产。

In a medium by Streptomyces fermentation bacteria naima

The present invention relates to Streptomyces fermentation medium of naima bacteria, including seed medium and fermentation medium, the seed culture medium is composed of oat flour, sugar beet molasses, silkworm chrysalis powder, wheat bran, protein hydrolysate, ammonium acetate and calcium carbonate, the fermentation medium is from glycerol, oatmeal, beet molasses, silkworm chrysalis powder, wheat bran, protein hydrolysate, fish peptone, acetic acid, calcium carbonate, potassium dihydrogen phosphate, ferrous sulfate, Magnesium Sulfate and Dow DOWFAX 20A64 defoaming agent. Using the medium provided by the invention can improve fermentation unit, shorten the fermentation period, naima bacteria, reduce fermentation costs, and maximize the reduction of raw materials is not influenced by the environment, guarantee the adequate supply of nemadectin achieve stable and efficient production.

【技术实现步骤摘要】
一种利用链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基
本专利技术属于发酵
，特别是涉及一种利用链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基。
技术介绍
奈马菌素是链霉素发酵产生的次级代谢产物，其用途是化学合成莫西菌素的主要初始原料。莫西菌素属于阿维菌素类药物。20世纪80年代中期，莫西菌素开始作为兽用驱虫药使用。在国外，同伊维菌素(Ivermectin，IVM)一样，MXD是一种目前广泛用于兽医临床的广谱、高效、新型大环内酯类驱虫抗生素。目前，国内奈马菌素的发酵生产采用二级发酵模式，该方式存在的主要问题有以下几点：1国内针对奈马菌素发酵生产工艺报道的文献资料较少。2国内奈马菌素发酵水平较低，其发酵单位一般在3000-4000u/ml。国内企业申报了奈马菌素发酵生产工艺专利（专利名称：一种链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基和培养方法；专利号：CN201410433214.8），该专利中详细阐述了奈马菌素培养基配方和生产工艺，但其存在的问题是发酵技术水平较低，生产成本较高，产品市场竞争力弱。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现奈马菌素稳定、高效生产的利用链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基。为实现上述目的所采取的技术方案为：一种利用链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中所述种子培养基组成为：燕麦粉8～12g/L、甜菜糖蜜7～11ml/L、蚕蛹粉12～16g/L、菌体蛋白9～13g/L、麸皮水解液8～12ml/L、醋酸铵0.3～0.7g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；所述发酵培养基组成为：丙三醇3～7ml/L、燕麦粉10～14g/L、甜菜糖蜜11～15ml/L、蚕蛹粉14～18g/L、菌体蛋白11～15g/L、麸皮水解液12～16ml/L、鱼蛋白胨1～5g/L、醋酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、磷酸二氢钾0.2～0.6g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.01～0.05g/L、美国陶氏DOWFAX20A64抑泡剂0.02～0.06ml/L。本专利技术的技术优势体现在：本专利技术明确了种子培养、发酵培养的配方及原材料的配伍比例，其中种子培养基中的碳源和碳源不仅保证了发酵培养基中菌种的数量，有利于提高其产素能力，而且避免了从摇瓶培养基直接转到发酵培养基因环境变化太大，相关合成生物酶难以适应周围发酵环境，导致发酵时间延长，而且会出现各种不利发酵情况。采用本专利技术的培养基配方发酵生产奈马菌素，最终使得发酵单位达到5500u/ml以上，生产周期控制在220h左右，同国内技术相比，发酵单位提高了20%以上，生产周期减少了20h以上，同时降低了能耗和生产成本，提高了产品市场竞争力。本专利技术适用于规模化发酵生产奈马菌素，能够满足年产100吨奈马菌素的生产需求。具体实施方法下面用实例予以说明本专利技术，应该理解的是，实例是用于说明本专利技术而不是对本专利技术的限制。本专利技术的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。下述实施例的菌种选用肉桂地链霉菌：生产使用的菌种来源为母瓶发酵液。母瓶发酵液质量要求为：pH6～7；菌体浓度20～30%；镜检无杂菌；发酵单位500～2000u/ml。奈马菌素发酵生产工艺步骤为：1）种子培养：将已经培养好的链霉菌母瓶发酵液按照0.1～0.3L/m3的接种量接入种子培养基中进行种子培养，至菌体浓度30～35%、pH值6～7、培养时间48-50h时移种，移种比例控制在10-11%。2）发酵培养：将培养好的种子液移入已灭菌的发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度35～40%、化学效价＞5500u/mL、pH6～8、培养时间220h时终止发酵。3）种子培养条件为：罐压0.03～0.05MPa；罐温28～30℃；空气流量：40～60m3/h；搅拌转速60～80r/min。4）所述发酵培养条件为：a培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在6～7。b温度：28～30℃。c搅拌转速：搅拌转速60～100r/min。d压力控制：罐压0.05～0.06MPa。epH控制：发酵过程中pH控制在6～8。f空气流量：100～400m3/h；5）在发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补水、补硫酸铵、补糖和pH控制，其中a补水工艺控制：当菌体浓度高于40%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在35～40%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度。b发酵过程pH控制工艺：发酵前60h，pH不进行控制。61～发酵结束，若pH＜6.0，加入10～20%的氢氧化钠，调节pH至6～8；若pH＞8，加入10%的硫酸溶液，调节pH至6～8。c补入葡萄糖糖：发酵培养开始-200h，总糖含量＜8mg/100ml时，补入已灭菌的葡萄糖溶液，使总糖的含量控制在10～12mg/100ml.发酵201h至发酵结束：总糖含量＜2mg/100ml时，补入已灭菌的葡萄糖溶液，使总糖的含量控制在3～4mg/100ml。d补硫酸铵奈马菌素发酵培养过程中，分别在60h、150h和200h补入20%的硫酸铵溶液，其用量控制在发酵液体积的0.1～0.3%。实施例1种子培养基：种子液有效体积为1m3。燕麦粉8kg、甜菜糖蜜7L、蚕蛹粉12kg、菌体蛋白9kg、麸皮水解液8L、醋酸铵0.3kg、轻质碳酸钙1kg。发酵培养基：发酵液有效体积为10m3。丙三醇30L、燕麦粉100kg、甜菜糖蜜110L、蚕蛹粉140kg、菌体蛋白110kg、麸皮水解液120L、鱼蛋白胨10kg、醋酸铵5kg、轻质碳酸钙10kg、磷酸二氢钾2kg、硫酸镁0.3kg、硫酸亚铁0.1kg、美国陶氏DOWFAX20A64抑泡剂0.2L。采用以上发酵生产工艺步骤发酵生产奈马菌素，发酵工艺结束，其化学效价为5607u/ml，发酵周期为219h。实施例2种子培养基：种子液有效体积为1m3。燕麦粉9kg、甜菜糖蜜8L、蚕蛹粉13kg、菌体蛋白10kg、麸皮水解液9L、醋酸铵0.4kg、轻质碳酸钙2kg。发酵培养基：发酵液有效体积为10m3。丙三醇40L、燕麦粉110kg、甜菜糖蜜120L、蚕蛹粉150kg、菌体蛋白120kg、麸皮水解液130L、鱼蛋白胨11kg、醋酸铵6kg、轻质碳酸钙20kg、磷酸二氢钾3kg、硫酸镁0.4kg、硫酸亚铁0.2kg、美国陶氏DOWFAX20A64抑泡剂0.3L。采用以上发酵生产工艺步骤发酵生产奈马菌素，发酵工艺结束，其化学效价为5693u/ml，发酵周期为219h。实施例3种子培养基：种子液有效体积为1m3。燕麦粉10kg、甜菜糖蜜9L、蚕蛹粉14kg、菌体蛋白11kg、麸皮水解液10L、醋酸铵0.5kg、轻质碳酸钙3kg。发酵培养基：发酵液有效体积为10m3。丙三醇50L、燕麦粉120kg、甜菜糖蜜130L、蚕蛹粉160kg、菌体蛋白130kg、麸皮水解液140L、鱼蛋白胨12kg、醋酸铵7kg、轻质碳酸钙30kg、磷酸二氢钾4kg、硫酸镁0.5kg、硫酸亚铁0.3kg、美国陶氏DOWFAX20A64抑泡剂0.4L。采用以上发酵生产工艺步骤发酵生产奈马菌素，发酵工艺结束，其化学效价为5762u/ml，发酵周期为220。实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中所述种子培养基组成为：燕麦粉8～12g/L、甜菜糖蜜7～11ml/L、蚕蛹粉12～16g/L、菌体蛋白9～13g/L、麸皮水解液8～12ml/L、醋酸铵0.3～0.7g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；所述发酵培养基组成为：丙三醇3～7ml/L、燕麦粉10～14g/L、甜菜糖蜜11～15ml/L、蚕蛹粉14～18g/L、菌体蛋白11～15g/L、麸皮水解液12～16ml/L、鱼蛋白胨1～5g/L、醋酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、磷酸二氢钾0.2～0.6g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.01～0.05g/L、美国陶氏DOWFAX 20A64抑泡剂0.02～0.06ml/L。

【技术特征摘要】
1.一种利用链霉菌发酵生产奈马菌素的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中所述种子培养基组成为：燕麦粉8～12g/L、甜菜糖蜜7～11ml/L、蚕蛹粉12～16g/L、菌体蛋白9～13g/L、麸皮水解液8～12ml/L、醋酸铵0.3～0.7g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；所述发酵培养基组成为：丙三醇3～7ml/L、燕麦粉10～14g/...

【专利技术属性】
技术研发人员：任勇，徐淑芬，
申请(专利权)人：宁夏泰瑞制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：宁夏,64