一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂，包括含干粉免疫粒子的液体和溶剂，所述含干粉免疫粒的子液体主要由氢氧化铝水溶液、人参皂苷、胆固醇、维生素C、二乙胺基乙基葡聚糖、碘化钾、以及聚乙二醇按合适比例配伍组成。与现有技术相比，本发明专利技术制备得到的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂，有效的抑制支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌潜伏感染的建立与重新激活，能够缩短抗体产生的窗口期，提高猪萎缩性鼻炎疫苗的免疫效果，免疫持续期延长，有效地避免了猪萎缩性鼻炎的潜伏感染，为猪萎缩性鼻炎病的预防和根除提供了保障，能够广泛的应用于猪场进行猪萎缩性鼻炎的防治，提高养猪场的经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂及其制备方法
本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂及其制备方法。
技术介绍
猪萎缩性鼻炎主要是由支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀性巴氏杆菌所引起的一种慢性的且具有传染性的呼吸道疾病。世界卫生组织将其规定为B类疾病，患病的猪只出现打喷嚏、流鼻血、颜面变形、鼻部歪斜和生长迟滞等不良反应，导致猪的饲料转化率降低，生产性能低下，给集约化养猪业造成巨大的经济损失。同时，由于病原感染猪只后，损害呼吸道的正常结构和功能，使猪体抵抗力降低，极易感染其他病原，引起呼吸系统综合征，增加猪的死淘率。本病常发生于2～5月龄的猪，现在几乎遍及世界养猪业发达的地区，我国许多地区亦有本病发生。具体地说，猪萎缩性鼻炎是猪只在受到环境刺激或者其他病原体侵染时引起的支气管败血波氏杆菌借助鞭毛吸附到鼻粘膜，破坏纤毛和鼻粘膜的上皮细胞，波氏杆菌释放的皮肤坏死毒素透过鼻甲骨，破坏成骨细胞，干扰钙吸收和骨生成；多杀性巴氏杆菌寄居在已被波氏杆菌破坏的鼻黏膜上释放皮肤坏死毒素，破骨细胞活动加强，导致骨骼分解。一般情况下巴氏杆菌很难在健康猪的鼻黏膜上增殖，只有在受到支气管败血性波氏杆菌或其他因子侵袭、黏膜受到损害时才有可能造成在猪场中传播，因此阻止波氏杆菌吸附于鼻黏膜是首要解决的问题。为避免萎缩性鼻炎在猪群中的传播，养猪场通常会给猪只注射猪萎缩性鼻炎疫苗，然而单独使用疫苗的免疫效果不佳，往往需要配合使用能够增强疫苗免疫应激，激发免疫应答的佐剂来增强疫苗的免疫效果，一种能加强猪萎缩性鼻炎疫苗抗原优先定值于鼻黏膜的免疫增强剂非常紧缺。佐剂本身并不提供免疫，它只有在与免疫抗原组成一种制剂时，才能够改善由疫苗诱导产生的免疫应答的广度和效力。目前市场上应用的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗佐剂包括氢氧化铝胶剂、类脂佐剂和蜂胶佐剂；氢氧化铝胶佐剂免疫原性好，副作用小，但其不能诱导细胞免疫；类脂佐剂和蜂胶佐剂免疫原性好，可诱导体液免疫和细胞免疫，免疫持续时间长，但原材料价格昂贵，成本太高。因此近年来，各国科研工作者应用不同原料和采用不同方法研制了一系列新型佐剂，但因为效果差或者毒性大，没有一种得到满意效果。因此，亟需研究一种能够增强猪萎缩性鼻炎疫苗免疫刺激，激发免疫应答，实现有效防治猪萎缩性鼻炎的免疫增强剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种诱导强烈的Th1、Th2反应，同时诱导产生细胞毒性T淋巴细胞和B淋巴细胞，具有增强细胞免疫和体液免疫功能使抗原优先定植于鼻黏膜的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂。本专利技术的目的是这样实现的，所述猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂包括含干粉免疫粒子的液体和溶剂，所述含干粉免疫粒子的液体主要由氢氧化铝水溶液、人参皂苷、胆固醇、维生素C、二乙胺基乙基葡聚糖、碘化钾、以及聚乙二醇按合适比例配伍组成。优选的，所述含干粉免疫粒子液体中所述含干粉免疫粒子的液体中氢氧化铝的含量为75～85wt％，人参皂苷的含量为0.1～2wt％，胆固醇的含量为0.1～2wt％，二乙胺基乙基葡聚糖的含量为0.1～1wt％。优选的，所述含干粉免疫粒子的液体中维生素C及碘化钾的含量符合以下条件：维生素C及碘化钾总摩尔数/氢氧化铝摩尔数≥1，所述氢氧化铝与聚乙二醇的质量比为1：0.1～1。优选的，所述溶剂为生理盐水或PBS缓冲液。本专利技术还提供了一种制备所述猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂的方法，包括以下步骤：a、向氢氧化铝水溶液中缓慢加入人参皂苷、胆固醇，维生素C，二乙胺基乙基葡聚糖和碘化钾，继续搅拌3～5min后加入聚乙二醇，再继续搅拌10～20min后得到金黄色的含干粉免疫粒子的液体，将含干粉免疫粒子的液体封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存；b、免疫增强剂的制备：取合适计量的含干粉免疫粒子的液体置于装有溶剂的反应容器中，将反应容器中含干粉免疫粒子的液体的浓度控制为15wt％，开启搅拌装置搅拌20～40min，将反应容器中的温度控制为2～8℃，静置10～20h，过滤除菌后得到免疫增强剂。优选的，所述溶剂为生理盐水或PBS缓冲液。与现有技术相比，本专利技术制备得到的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂，有效的抑制支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌潜伏感染的建立与重新激活，能够缩短抗体产生的窗口期，提高猪萎缩性鼻炎疫苗的免疫效果，免疫持续期延长，有效的避免了猪萎缩性鼻炎的潜伏感染，为猪萎缩性鼻炎病的预防和根除提供了保障，能够广泛的应用于猪场进行猪萎缩性鼻炎的防治，提高养猪场的经济效益。附图说明图1为首次免疫42天后采血检测得到的平均PMT滴度示意图；图2为首次免疫42天后采血检测得到的ELISA平均抗体水平示意图；图3为免疫后仔猪转阳率示意图；图4为免疫后仔猪抗体水平示意图；具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的说明，但不得以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变更或改进，均属于本专利技术的保护范围。同时本专利技术所用试验材料，如无特别说明，均为市售产品。猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂的制备实施例1a、含干粉免疫粒子的液体制备：取30ml氢氧化铝浓度为100ug/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入4ug的人参皂苷，4ug的胆固醇，4ug的二乙胺基乙基葡聚糖，继续搅拌5min后加入聚乙二醇，所述含干粉免疫粒子的液体中维生素C及碘化钾总摩尔数/氢氧化铝摩尔数＝4，所述氢氧化铝与聚乙二醇的质量比为1:1，再继续搅拌20min后得到金黄色的含干粉免疫粒子的液体，利用原子显微镜观察，得到的干粉免疫粒子的直径为50nm，将含干粉免疫粒子的液体封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存，保质期为2年；b、免疫增强剂的制备：取合适计量的含干粉免疫粒子的液体置于装有PBS缓冲液的反应容器中，将反应容器中含干粉免疫粒子的液体的浓度控制为15wt％，开启搅拌装置搅拌20min，搅拌装置的转速以最大不产生气泡为宜，将反应容器中的温度控制为2℃，静置20h过夜，过滤除菌后得到免疫增强剂，将得到的免疫增强剂保存在0℃的环境中，控制PH为6.5。实施例2a、含干粉免疫粒子的液体制备：取30ml氢氧化铝浓度为100ug/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入80ug的人参皂苷，80ug的胆固醇，40ug的二乙胺基乙基葡聚糖，继续搅拌3min后加入聚乙二醇，所述含干粉免疫粒子的液体中维生素C及碘化钾总摩尔数/氢氧化铝摩尔数＝1，所述氢氧化铝与聚乙二醇的质量比为1：0.1，再继续搅拌10min后得到金黄色的含干粉免疫粒子的液体，利用原子显微镜观察，得到的干粉免疫粒子的直径为120nm，将含干粉免疫粒子的液体封装于棕色收集瓶内，充入液氮做无菌保存，保质期为2年；b、免疫增强剂的制备：取合适计量的含干粉免疫粒子的液体置于装有生理盐水的反应容器中，将反应容器中含干粉免疫粒子的液体的浓度控制为15wt％，开启搅拌装置搅拌40min，搅拌装置的转速以最大不产生气泡为宜，将反应容器中的温度控制为8℃，静置10h，过滤除菌后得到免疫增强剂，将得到的免疫增强剂保存在4℃的环境中，控制PH为7.5。实施例3a、含干粉免疫粒子的液体制备：取30ml氢氧化铝浓度为100ug/ml的水溶液，缓慢搅拌下加入40ug的人参皂苷，40ug的胆固醇20ug的二乙胺基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂，其特征在于：包括含干粉免疫粒子的液体和溶剂，所述含干粉免疫粒子的液体主要由氢氧化铝水溶液、人参皂苷、胆固醇、维生素C、二乙胺基乙基葡聚糖、碘化钾、以及聚乙二醇按合适比例配伍组成。

【技术特征摘要】
1.一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂，其特征在于：包括含干粉免疫粒子的液体和溶剂，所述含干粉免疫粒子的液体主要由氢氧化铝水溶液、人参皂苷、胆固醇、维生素C、二乙胺基乙基葡聚糖、碘化钾、以及聚乙二醇按合适比例配伍组成。2.根据权利要求1所述的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂，其特征在于：所述含干粉免疫粒子的液体中氢氧化铝的含量为75～85wt％，人参皂苷的含量为0.1～2wt％，胆固醇的含量为1～2wt％，二乙胺基乙基葡聚糖的含量为0.1～1wt％。3.根据权利要求2所述的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂，其特征在于：所述含干粉免疫粒子的液体中维生素C及碘化钾的含量符合以下条件：维生素C及碘化钾总摩尔数/氢氧化铝摩尔数≥1，所述氢氧化铝与聚乙二醇的质量比为1：0.1～1。4.根据权利要求1所述的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗用免疫增强剂，其特征在于：所述溶剂为生理盐水或PBS缓冲液。5.一种制备如权利要求1～4任一所述的猪萎...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晶晶，赖志，吴碧清，高俊锋，韩相敏，张秉金，沈明志，张瑜，
申请(专利权)人：上海创宏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31