The invention discloses a ELISA reagent kit for detecting quinolones and a detection method thereof. The reagent kit was prepared by adding anionic surfactant into the coating solution, and the detection method was used to extract quinolones residues in the sample with weak acid buffer solution. The sample detection method consists of two steps: sample pretreatment and sample detection. The ELISA method is good precision instrument, simple operation method, a biosensor, chemiluminescence enzyme immunoassay and other immune analysis method of low cost, stable result, technology is more mature, the improvement in precision, further ensuring the consistency of different staff, different levels of Technology Laboratory, pretreatment method simple, not involving organic reagents, more safety and environmental protection, accurate and reliable, able to meet the market needs for the popularization and application of detection.
【技术实现步骤摘要】
喹诺酮类药物检测ELISA试剂盒研制及检测方法
本专利技术属于食品安全快速检测
，具体涉及喹诺酮类药物检测ELISA试剂盒研制及检测方法。
技术介绍
1、术语解释：ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)酶联免疫吸附分析方法。2、现有技术喹诺酮类药物是人工合成抗菌剂，根据其结构及抗菌谱的不同经历了四代喹诺酮类药物，目前使用的主要为第三代、第四代喹诺酮，其抗菌谱广，抗菌活性强，兽医临床主要用于敏感菌所致的呼吸道、消化道、尿道感染，同时可提高动物日增重和饲料转化率。随着喹诺酮类药物应用增加，也出现了不少滥用的情况，药物使用不当会引起耐药菌的产生以及食品安全问题。为了保障动物源性食品的安全，欧盟、美国及我国等很多国家都对喹诺酮类药物在动物源性食品中的残留制定了最大残留限量(MRL，MaximumResidueLimit)。我国农业部第235号公告规定恩诺沙星动物性食品肌肉中的最高残留限量为100μg/kg，沙拉沙星在肌肉中的最高残留限量为10μg/kg。目前喹诺酮类药物残留检测方法常用的为仪器检测方法和免疫检测方法，...
【技术保护点】
一种喹诺酮类药物检测ELISA试剂盒研制方法，其特征在于：所述方法在包被液中加入阴离子表面活性剂，用弱酸性缓冲液提取样本中的喹诺酮类药物残留。
【技术特征摘要】
1.一种喹诺酮类药物检测ELISA试剂盒研制方法，其特征在于：所述方法在包被液中加入阴离子表面活性剂，用弱酸性缓冲液提取样本中的喹诺酮类药物残留。2.如权利要求1所述的一种喹诺酮类药物检测ELISA试剂盒研制方法，其特征在于：所述阴离子表面活性剂为十二烷基磺酸钠。3.如权利要求1所述的一种喹诺酮类药物检测ELISA试剂盒研制方法，其特征在于：所述弱酸性缓冲液为邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液。4.如权利要求1、2、3所述的一种喹诺酮类药物检测ELISA试剂盒研制方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)酶标板的制备：1.1)配制1#包被液：pH值为9.6，0.05mol/L的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液；1.2)配制2#包被液：称取十二烷基磺酸钠1g加入到100mL1#包被液中，溶解，用1#包被液进行倍比稀释2×105倍至所含十二烷基磺酸钠浓度为50pg/mL，将此溶液作为恩诺沙星-BSA包被液；1.3)用2#包被液将恩诺沙星-BSA稀释至工作浓度2mg/L，混匀，并静置15分钟；1.4)取标记好的酶标板，用8孔道排枪点板，100μL/孔，盖上盖板膜；1.5)置于4℃冰箱，过夜包被16小时；1.6)从冰箱取出酶标板并抛掉板内液体，洗板1次，抛掉板内液体，拍干，加入封闭液200μL/孔，放入37℃恒温培养箱内封闭2小时；1.7)从37℃恒温培养箱取出酶标板，抛掉板内液体，拍干，置于37℃鼓风干燥箱中封闭2小时以上，取出酶标板放入带有干燥剂的铝箔袋中，抽真空保存，备用；2)试剂盒溶液的配制：2.1)基础溶液的配制抗体稀释液：pH为7.0，0.05M磷酸盐缓冲液，含有氯化钠0.9％，含有0.5‰proclin-300防腐剂；底物显色溶液：A液配方为每1L去离子水中加入过氧化脲1.4g，柠檬酸10.2g，十二水合磷酸氢二钠36.0g，吐温-2050μL，调至pH＝5；B液配方为每1L去离子水中加入四甲基联苯胺650mg，10.2g柠檬酸，调至pH＝3.0；封闭液：pH值为9.2，0.02mol/L的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，含5％BSA、0.5％吐温-20、0.5‰proclin-300防腐剂；浓缩洗涤液：pH值为7.4，0.01mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，含0.5％吐温-20、0.5‰proclin-300防腐剂；终止液：以常规方法配制浓度为2mol/L的硫酸溶液；标准品缓冲溶液：以常规方法配制1.0mmol/L，pH＝7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液，含氯化钠0.9％；2.2)按照棋盘法测定抗原抗体效价、酶标二抗效价及抗体灵敏度，从而选择标准曲线各点，其中：包被原工作浓度为2mg/L，稀释液为2#包被液；抗体工作效价为1:12000，稀释液为抗体稀释液；酶标二抗工作效价为1:400，稀释液为抗体稀释液；标准曲线各点浓度...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚世平，刘光中，姚洪涛，周轶，牛兰兰，李心乐，李兆青，周士友，
申请(专利权)人：北京倍肯恒业科技发展股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。