一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法技术

本发明专利技术公开一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法，将青皮南瓜洗净后加入食盐，再粉碎得到粉碎液；将粉碎液经固液分离，所得分离液用板框过滤得到澄清液；在所得澄清液中加入所得吸附颗粒，搅拌后，经固液分离得到清液，再经浓缩、灭菌、干燥，即得干燥的抗坏血酸氧化酶。本发明专利技术能有效去除叶绿素，提高抗坏血酸氧化酶产品的纯度。生产过程中产物易与水分离，便于按需要的活性获得浓缩液，且灭菌效果好，产品合格率高。本发明专利技术工艺条件温和，方法简便，生产成本低，过程易于控制，对设备要求低，能耗低。本发明专利技术所得抗坏血酸氧化酶产品收率达80％以上，纯度达99％以上。

A method for extraction and purification of ascorbic acid oxidase from pumpkin

The invention discloses a method for extracting and purifying pumpkin ascorbic acid oxidase, will wash the Pumpkin Peel with salt, then get crushed crushing liquid; grinding liquid through solid-liquid separation, the separation was clarified in the filtrated liquid; the clarified liquid particles join the adsorption, after mixing, get the supernatant by solid-liquid separation, then after concentration, sterilization, drying, drying to obtain the ascorbic acid oxidase. The method can effectively remove the chlorophyll and improve the purity of the ascorbic acid oxidase product. In the production process, the product is easy to separate from the water, and the concentrated liquid is easy to obtain according to the required activity, and the sterilization effect is good, and the qualified rate of the product is high. The invention has the advantages of mild technological condition, simple method, low production cost, easy process control, low equipment requirement and low energy consumption. The yield of the ascorbic acid oxidase product is above 80%, and the purity is above 99%.

【技术实现步骤摘要】
一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法
本专利技术涉及一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法。
技术介绍
抗坏血酸氧化酶(ASO)是以分子氧为底物的氧化酶类，它隶属于蓝色氧化酶类，酶分子活性部位含有多个金属铜离子，在催化还原性有机底物单电子氧化的同时，为氧分子(O2)提供四个电子，将其直接还原成H2O。国际酶学委员会将其命名为L-抗坏血酸:O2氧化还原酶，编号为：EC1.10.3.3。ASO对还原性底物要求较高，仅作用于L-抗坏血酸和其它有在羰基邻近含烯二醇基团的内酯环结构的化合物。ASO广泛存在于自然界，已从南瓜、黄瓜、柑桔等多种植物和微生物中得以纯化，许多研究集中在酶的分离纯化、细胞定位、分子结构、理化性质、催化机制和酶学特征，已阐明其三维结构、糖链结构和铜结合位点，已从南瓜和黄瓜中克隆出该酶的cDNA，并和其它含铜化酶的一级结构比较了同源性。目前，通过南瓜提取纯化得到ASO的方法中还存在产品纯度不高，叶绿素难以去除等问题。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法，以更优化地去除叶绿素。本专利技术通过下列技术方案实现：一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法，其特征在于经过下列各步骤：(1)将青皮南瓜洗净后削皮，以瓜皮为原料，加入瓜皮质量1～3％的食盐，再按固液质量比为1：2加水混合后粉碎，得到粉碎液；(2)将步骤(1)所得粉碎液经固液分离，所得分离液用醋酸调节pH值至5.0，再用板框过滤得到澄清液；(3)按水：乙醇：纳米级硫酸铜：氨水的体积比为40～60：2～10：25～45：2～10，将氨水、乙醇、水和纳米级硫酸铜混合后，在室温下搅拌10～16小时，再加入硝酸溶液调节pH值为4～6，并继续搅拌70～120分钟，经离心清洗后，即得到表面改性的微球；将所得表面改性的微球超声分散到0.01mol/L的硝酸溶液中，...

【技术特征摘要】
1.一种南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化方法，其特征在于经过下列各步骤：(1)将青皮南瓜洗净后削皮，以瓜皮为原料，加入瓜皮质量1～3％的食盐，再按固液质量比为1：2加水混合后粉碎，得到粉碎液；(2)将步骤(1)所得粉碎液经固液分离，所得分离液用醋酸调节pH值至5.0，再用板框过滤得到澄清液；(3)按水：乙醇：纳米级硫酸铜：氨水的体积比为40～60：2～10：25～45：2～10，将氨水、乙醇、水和纳米级硫酸铜混合后，在室温下搅拌10～16小时，再加入硝酸溶液调节pH值为4～6，并继续搅拌70～120分钟，经离心清洗后，即得到表面改性的微球；将所得表面改性的微球超声分散到0.01mol/L的硝酸溶液中，在搅拌情况下，按微球质量的0.05～1％加入聚乙二醇-4000，然后按微球质量的2～50倍加入柠檬酸，搅拌30～9...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏东庆，
申请(专利权)人：广西南宁正东食品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广西,45