一种细菌中细胞色素P450酶的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种细菌中细胞色素P450酶的制备方法及应用，属于生物技术领域。该细菌中细胞色素P450酶的制备方法主要包括以下步骤：a.冷冻‑破碎处理：将菌液恒温离心获得菌体，菌体在‑15℃～‑20℃的温度下冷冻4‑5h，然后在冰水浴下破碎处理，得到提取液；b.浓缩透析：将上述提取液浓缩，经透析12‑24h得到细胞色素P450酶粗品；c.纯化：将细胞色素P450酶粗品经纯化后制得细胞色素P450酶成品。该制备方法提取率高，且制得的细胞色素P450酶纯度高、活性好，对磺胺嘧啶具有高效的降解效果，可以用于降解磺胺类抗生素。

Preparation method and application of cytochrome P450 enzyme in bacteria

The invention relates to a preparation method and application of cytochrome P450 enzyme in bacteria, belonging to the field of biotechnology. The cytochrome P450 enzyme in bacteria preparation method includes the following steps: A. frozen crushing processing: bacteria liquid temperature centrifugation bacteria, bacteria in 15 ~ temperature of 20 DEG C for 4 frozen 5h, then broken in ice bath and get extraction liquid; B. concentrated dialysis: the extract is concentrated, cytochrome P450 enzyme crude obtained by dialysis 12 24h; C.: the purified cytochrome P450 enzyme crude purified cytochrome P450 enzyme product prepared. The preparation method has the advantages of high extraction rate, high purity and good activity of the cytochrome P450 enzyme, high degradation effect on sulfadiazine and degradation of sulfonamide antibiotics.

【技术实现步骤摘要】
一种细菌中细胞色素P450酶的制备方法及应用
本专利技术涉及一种酶的制备方法及应用，尤其涉及一种细菌中细胞色素P450酶的制备方法及应用，属于生物

技术介绍
磺胺类抗生素具有疗效良好、使用方便、性质稳定、价格低廉等优点，在水产养殖的疾病控制中起着不可替代的作用。但是，同样由于其广泛使用，造成磺胺类抗生素对海水养殖生态环境造成严重破坏。磺胺类抗生素的有效去除成为亟待解决的难题。目前，国内外关于利用生物降解抗生素的研究报道较少。张树清等发现高温堆肥对鸡粪中四环素类抗生素具有降解效果，且外源添加有益降解菌剂(芽孢杆菌)有助于抗生素药物残留的去除。Teruya等从海水鱼养殖场的淤泥筛选出能降解氨苄西林、强力霉素、氧四环素(土霉素)、甲砜氯霉素的菌株，经外形、分类学和16SrDNA分析鉴定，这些菌株为Flavobacterium-CytopHaga-Bacteroidesgroup和proteobacterialsubdivisions。但少有关于利用生物降解磺胺类抗生素的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种纯度高、活性好的细菌中细胞色素P本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细菌中细胞色素P450酶的制备方法，其特征在于，所述制备方法主要包括以下步骤：a.冷冻‑破碎处理：将菌液恒温离心获得菌体，菌体在‑15℃～‑20℃的温度下冷冻4‑5h，然后在冰水浴下破碎处理，得到提取液；b.浓缩透析：将上述提取液浓缩，经透析12‑24h得到细胞色素P450酶粗品；c.纯化：将细胞色素P450酶粗品经纯化后制得细胞色素P450酶成品。

【技术特征摘要】
1.一种细菌中细胞色素P450酶的制备方法，其特征在于，所述制备方法主要包括以下步骤：a.冷冻-破碎处理：将菌液恒温离心获得菌体，菌体在-15℃～-20℃的温度下冷冻4-5h，然后在冰水浴下破碎处理，得到提取液；b.浓缩透析：将上述提取液浓缩，经透析12-24h得到细胞色素P450酶粗品；c.纯化：将细胞色素P450酶粗品经纯化后制得细胞色素P450酶成品。2.根据权利要求1所述的一种细菌中细胞色素P450酶的制备方法，其特征在于，步骤a中所述菌液的制备方法为：将细菌接种于细菌培养液中，在温度为20-30℃、盐度为20-35‰、pH值为7.0-8.5的环境下培养7-16天，得到菌液。3.根据权利要求2所述的一种细菌中细胞色素P450酶的制备方法，其特征在于，所述细菌培养液的组成成分为：磺胺嘧啶：1-5mg/L，乙酸钠：1-3g/L，硝酸钠：0.1-0.2g/L，氯化铵：0.1-0.2g/L，磷酸氢二钾：0.05-0....

【专利技术属性】
技术研发人员：帅京妤，陈庆国，陶玲，赵媛媛，符运拓，何佳宁，王亚超，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33