一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽H362及其确定、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽H362及其确定、制备方法和应用，抗原表位肽的氨基酸序列为：H362:

【技术实现步骤摘要】
一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽H362及其确定、制备方法和应用
本专利技术属于生物信息学和免疫学
，具体涉及一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽H362及其确定、制备方法和应用。
技术介绍
小反刍兽疫病毒(PPRV)属于麻疹病毒属(Morbillivirus)，是引起山羊和绵羊等小反刍动物急性传染病的病原，该病特点是高发病率和高死亡率，被世界动物卫生组织(OIE)列为法定报告动物传染病，我国将其列为I类动物疫病。最初的报道小反刍兽疫病毒仅感染山羊和绵羊，但近几年病毒种间传播的病例被不断报道，目前该病主要分布于非洲和亚洲，正威胁欧洲。目前，该病的主要预防手段是弱毒疫苗免疫，但是该疫苗存在热稳定性和毒力反强等问题，并且不利于小反刍兽疫的全球消灭计划。HN是镶嵌在PPRV囊膜上的糖蛋白，构成病毒粒子表面的纤突。HN蛋白能够与淋巴细胞上的SLAM受体相互作用介导病毒入侵，因此HN蛋白的决定宿主嗜性。另外，因受体SLAM是主要部分与淋巴细胞等免疫细胞上，可能是小反刍兽疫病毒导致机体免疫抑制的主要原因。小反刍兽疫病毒能引起机体强烈的细胞免疫和体液免疫应答，而HN蛋白则是主要的保护性抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽，其特征在于：所述抗原表位肽的氨基酸序列为H362:

【技术特征摘要】
1.一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽，其特征在于：所述抗原表位肽的氨基酸序列为H362:362EANWVVPSTDVRDL375。2.根据权利要求1所述一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽H362在小反刍兽疫病毒表位疫苗抗原和诊断试剂抗原制备中的应用。3.根据权利要求1所述一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位的确定、制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：计算模拟：步骤一，用分子模拟软件构建虚拟HN蛋白头部3D结构：利用DiscoveryStudioV4.5对这两个目标蛋白——野毒株PPRVHN和疫苗株PPRVHN蛋白进行同源模建；其中PPRVHw，GenBank登录号为FJ905304；PPRVHv，GenBank登录号：X74443；步骤二，搜索模板：搜索PDB数据库(www.pdb.org)，寻找通过实验解析出的同源蛋白的结构，选择序列一致性在30％以上，并且比对序列较长的蛋白结构作为模板结构，进行后续的计算；步骤三，调整序列比对：选取模板蛋白之后，从PDB数据库中获得蛋白的空间坐标，将得到的模板蛋白序列与目标蛋白进行比对；步骤四，建模：将比对结果提交服务器，根据模板蛋白的空间坐标和序列的相似性推测结构，从而计算得到目标蛋白结构，即每次模建生成至少5个不同的目标蛋白结构，要求PDFTotalEnergy较低的同时选择DOPEScore最低的模型进行后续计算；步骤五，优化：采用CHARMm力场，先进行SteepestDecent优化5000步，再进行ConjugateGradient优化2000步；步骤六，评估结构：采用拉氏构象图分析方法评估蛋白结构的合理性，若位于不许可区的非甘氨酸/脯氨酸所占比例不超过5％，则说明模拟的蛋白结构是合理的，可以进行后续的计算分析；基于免疫信息学的预测：步骤一，PPRV-HN蛋白B细胞抗原表位预测：将PPRVHN蛋白的氨基酸序列用IEDB、ImmunomedicineGroup和BepiPred免疫信息学分析软件进行分析，综合分析预测其B细胞抗原表位；步骤二，抗原表位的合成：将软件预测的抗原表位氨基酸序列送GeneScript公司用多肽合成仪合成，合成后用高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography，HPLC)分析多肽合成的纯度及氨基酸的正确性；单克隆抗体的制备：步骤一，免疫动物：具有反应原性目的抗原rPPRV-HN-F免疫6-8周龄雌性Balb/c小鼠，颈背部皮下四点注射，免疫蛋白样品量为50μg/只，免疫体积200μL/只；首次免疫用等体积弗氏完全佐剂乳化，二次免疫和三次免疫用等体积弗氏不完全佐剂佐剂乳化；每隔14天免疫一次，三次免疫14天后小鼠断尾采血检测血清中的抗体，待抗体效价高1：10000后方可进行四免，四免不用佐剂，腹腔注射；步骤二，细胞融合：小鼠抗体效价高于1:10000，第四次免疫小鼠，三天后制备小鼠脾淋巴细胞；小鼠麻醉后，去眼球采取小鼠外周血，用于分离血清，无菌摘取小鼠脾脏并研磨；将SP2/0细胞与小鼠脾脏细胞混合约1:5-1:10的比例混匀，800rpm离心4分钟弃上清，将细胞再次混匀，离心管放入40℃的去离子水中，在1分钟内均匀加入1mL聚乙二醇细胞融合剂，在5秒内加入1mL1640细胞培养液，并且再加入15mL1640细胞培养液，90秒由慢至快，终止融合反应；室温孵育10分钟，800rmp离心4分钟弃上清；用含有...

【专利技术属性】
技术研发人员：窦永喜，梁忠祥，朱学亮，蒙学莲，张志东，才学鹏，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62