一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法技术

一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，属于沥青制备技术领域，包括铜绿假单胞菌接种于斜面培养基、接种于种子培养基、等离子体诱变、接种于平板培养基、接种于发酵培养基、乙酸萃取、制备乳化沥青。鼠李糖脂具有较强的表面活性和乳化能力，能被生物完全降解，对环境友好。采用本发明专利技术制备的等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青，乳化效果好、稳定性好，具有良好的降滤失性和抑制性。采用等离子体作为诱变剂，对铜绿假单胞菌菌株进行诱变处理，获得鼠李糖脂的产量更高。

Preparation method of plasma induced rhamnolipid emulsified asphalt

A preparation method of plasma mutagenesis of rhamnolipid emulsified asphalt, which belongs to the technical field of asphalt preparation, including Pseudomonas aeruginosa inoculated slant medium, seed medium inoculated, plasma mutagenesis, inoculated on the agar medium, inoculated in fermentation medium, acetic acid extraction and preparation of emulsified asphalt. Rhamnolipid has strong surface activity and emulsifying capacity, can be degraded completely by organisms, and is friendly to environment. The plasma emulsified rhamnolipid asphalt prepared by the invention has good emulsification effect, good stability, good filtration loss resistance and inhibition. The plasma was used as mutagen to mutate the Pseudomonas aeruginosa strain, and the yield of rhamnolipid was higher.

【技术实现步骤摘要】
一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法
本专利技术属于沥青制备
，具体涉及一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法。
技术介绍
乳化沥青，就是将黏稠的沥青加热至流动态，再经机械力的作用形成微滴分散在有乳化剂一稳定剂的水中而形成的均匀、稳定的乳状液。乳化沥青是一种热力学不稳定体系。其稳定性是由外界所添加的乳化剂、乳液稳定剂等所产生的各种作用而引起的，目前的乳化沥青存在着稳定性不足的问题。鼠李糖脂是一种糖脂类生物表面活性剂，具有较强的表面活性和乳化能力，能被生物完全降解，对环境友好，在石油开采、生物修复、农业生产、食品医药等领域具有潜在的应用价值。但不前关于鼠李糖脂作为乳化剂应用于乳化沥青的研究却很少。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种乳化效果好、稳定性好的等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法。本专利技术采用以下技术方案：一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，包括以下步骤：步骤一：铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上，置于培养箱中，培养温度37℃，培养24h；步骤二：将斜面培养基上的菌落接到种子培养基，37℃、摇床转速200r·min-1，培养24h；步骤三：利用接种针将种子培养基上的菌落轻刮进装有50L生理盐水的容器中，置于摇床中震荡30min后，用塞有无菌脱脂棉的漏斗过滤，吸取10mL滤液于无菌培养皿中，采用常压室温等离子体诱变处理2min，然后利用生理盐水稀释至8％(v/v)，将稀释液均匀涂布于平板培养基上，37℃下，平板培养4d；步骤四：挑取平板培养基上的菌落置于发酵培养基中，并于37℃、250rpm的摇床中培养4天后，得发酵液；步骤五：取发酵液，在25℃、10000rpm的条件下离心处理3min，用移液枪吸取上清液到容器中，再加入5倍体积的乙酸萃取，用旋涡振荡器混匀，静置24h后，将上层有机相抽提到容器中，并将其放入通风厨中待乙醚挥发完全，得鼠李糖脂；步骤六：称取2g沥青、2ml鼠李糖脂加入容器中，并用滴管将100ml水缓慢滴加置容器中，并用搅拌机以600r/min的速度不停搅拌，混合均匀。优选的，步骤六中所述的滴加水的速度控制在10mL/min。优选的，步骤一中所述的斜面培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，包含：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、琼脂20g/L。优选的，步骤四中所述的发酵培养基包含：K2HPO44g/L、KH2PO44g/L、KCL1g/L、NaNO32.5g/L、NaCL1g/L、CaCl2·2H2O0.1g/L，MgSO40.2g/L，酵母粉1g/L，甘油30v/v。优选的，步骤三中所述的平板培养基包含：葡萄糖20g/L、硝酸铵2.5g/L、酵母膏0.05g/L、磷酸二氢钾10g/L、磷酸氢二钠4g/L、琼脂20g/L。优选的，步骤二中所述的种子培养基包含：NaClg/L，胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L。本专利技术的有益效果在于：1)鼠李糖脂具有较强的表面活性和乳化能力，能被生物完全降解，对环境友好。2)采用本专利技术制备的等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青，乳化效果好、稳定性好，具有良好的降滤失性和抑制性。3)采用等离子体作为诱变剂，对铜绿假单胞菌菌株进行诱变处理，获得鼠李糖脂的产量更高。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。实施例1一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，包括以下步骤：步骤一：铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上，置于培养箱中，培养温度37℃，培养24h；步骤二：将斜面培养基上的菌落接到种子培养基，37℃、摇床转速200r·min-1，培养24h；步骤三：利用接种针将种子培养基上的菌落轻刮进装有50L生理盐水的容器中，置于摇床中震荡30min后，用塞有无菌脱脂棉的漏斗过滤，吸取10mL滤液于无菌培养皿中，采用常压室温等离子体诱变处理2min，然后利用生理盐水稀释至8％(v/v)，将稀释液均匀涂布于平板培养基上，37℃下，平板培养4d；步骤四：挑取平板培养基上的菌落置于发酵培养基中，并于37℃、250rpm的摇床中培养4天后，得发酵液；步骤五：取发酵液，在25℃、10000rpm的条件下离心处理3min，用移液枪吸取上清液到容器中，再加入5倍体积的乙酸萃取，用旋涡振荡器混匀，静置24h后，将上层有机相抽提到容器中，并将其放入通风厨中待乙醚挥发完全，得鼠李糖脂；步骤六：称取2g沥青、2ml鼠李糖脂加入容器中，并用滴管将100ml水缓慢滴加置容器中，并用搅拌机以600r/min的速度不停搅拌，混合均匀。步骤六中所述的滴加水的速度控制在10mL/min。步骤一中所述的斜面培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，包含：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、琼脂20g/L。步骤四中所述的发酵培养基包含：K2HPO44g/L、KH2PO44g/L、KCL1g/L、NaNO32.5g/L、NaCL1g/L、CaCl2·2H2O0.1g/L，MgSO40.2g/L，酵母粉1g/L，甘油30v/v。步骤三中所述的平板培养基包含：葡萄糖20g/L、硝酸铵2.5g/L、酵母膏0.05g/L、磷酸二氢钾10g/L、磷酸氢二钠4g/L、琼脂20g/L。步骤二中所述的种子培养基包含：NaClg/L，胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L。将本专利技术实施例1制得的等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青和市面上的其他阴离子乳化沥青的储存稳定性对比结果见下表1，存储时间为5天。表1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上，置于培养箱中，培养温度37℃，培养24h；步骤二：将斜面培养基上的菌落接到种子培养基，37℃、摇床转速200r·min

【技术特征摘要】
1.一种等离子体诱变鼠李糖脂乳化沥青的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：铜绿假单胞菌接种于斜面培养基上，置于培养箱中，培养温度37℃，培养24h；步骤二：将斜面培养基上的菌落接到种子培养基，37℃、摇床转速200r·min-1，培养24h；步骤三：利用接种针将种子培养基上的菌落轻刮进装有50L生理盐水的容器中，置于摇床中震荡30min后，用塞有无菌脱脂棉的漏斗过滤，吸取10mL滤液于无菌培养皿中，采用常压室温等离子体诱变处理2min，然后利用生理盐水稀释至8％(v/v)，将稀释液均匀涂布于平板培养基上，37℃下，平板培养4d；步骤四：挑取平板培养基上的菌落置于发酵培养基中，并于37℃、250rpm的摇床中培养4天后，得发酵液；步骤五：取发酵液，在25℃、10000rpm的条件下离心处理3min，用移液枪吸取上清液到容器中，再加入5倍体积的乙酸萃取，用旋涡振荡器混匀，静置24h后，将上层有机相抽提到容器中，并将其放入通风厨中待乙醚挥发完全，得鼠李糖脂；步骤六：称取2g沥青、2ml鼠李糖脂加入容器中，并用滴管将100ml水缓慢滴加置容器中，并用搅拌机以600r/min的速度不停搅拌，混合均匀。2....

【专利技术属性】
技术研发人员：章云，张贝尼，
申请(专利权)人：安徽省中日农业环保科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34