一组肌酸激酶同工酶核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一组肌酸激酶同工酶核酸适配体及其应用，属于生物技术领域。所述核酸适配体的核苷酸序列选自核苷酸序列表中SEQ IDNo.1～SEQ ID No.10，所述核酸适配体与肌酸激酶同工酶的结合特异性高、亲和力高。所述核酸适配体可用于对肌酸激酶同工酶进行检测、分离、纯化以及固定化，应用于生物感应器的制备、目标物质的分析检测，尤其适用于制备肌酸激酶同工酶快速检测试剂盒中的检测试纸。采用所述核酸适配体对肌酸激酶同工酶进行检测具有抗体不具备的一些优势，如体外筛选、合成、易于修饰和稳定性高等特点。

【技术实现步骤摘要】
一组肌酸激酶同工酶核酸适配体及其应用
本专利技术涉及一组肌酸激酶同工酶核酸适配体及其应用，具体地说，涉及一种利用分子生物学技术中的SELEX技术，即系统进化指数富集技术，制备一组与肌酸激酶同工酶具有高特异性和高亲和力的核酸适配体，并将其应用。属于生物

技术介绍
肌酸激酶同工酶(CreatineKinase-MB)是一种临床上用于诊断急性心肌梗死的生物标志物。肌酸激酶同工酶在急性心肌梗死发生的第4～6小时入血，在第24小时达到峰值，在48～72小时后恢复到正常水平。发病早期的快速诊断将有利于制定较优治疗方案，起到较好治疗效果。目前，快速检测多采用胶体金免疫层析试纸条。胶体金免疫层析试纸条就是以胶体金为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理，在层析过程中完成这一反应，从而达到检测的目的。胶体金免疫层析法是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，通过把样品滴加到胶体金免疫层析的试纸条的样品垫上后，样品经过毛细作用前移，首先经过结合垫上的胶体金-抗体结合物，与其充分接触并发生相应的反应，通过继续的向前前移到达抗原固定位置，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组肌酸激酶同工酶核酸适配体，其特征在于：所述核酸适配体的核苷酸序列选自核苷酸序列表中SEQ ID No.1～SEQ ID No.10。

【技术特征摘要】
1.一组肌酸激酶同工酶核酸适配体，其特征在于：所述核酸适配体的核苷酸序列选自核苷酸序列表中SEQIDNo.1～SEQIDNo.10。2.根据权利要求1所述的一组肌酸激酶同工酶核酸适配体，其特征在于：所述核酸适配体的核苷酸序列选自核苷酸序列表中SEQIDNo.6～SEQIDNo.10。3.根据权利要求1所述的一组肌酸激酶同工酶核酸适配体，其特征在于：在核苷酸序列表中SEQIDNo.1～SEQIDNo.10所示的核苷酸序列中，每条所述核苷酸序列的5’一端或3’一端修饰有巯基或生物素，得到一组修饰有巯基或生物素的肌酸激酶同工酶核酸适配体。4.一种如权利要求1～3中任一项所述的一组肌酸激酶同工酶核酸适配体的应用，其特征在于：将所述的核酸适配体用于对肌酸激酶同工酶进行检测、分离、纯化以及固定化，应用于生物感应器的制备、目标物质的分析检测，以及制备用于临床诊断的试剂和疾病治疗的药物。5.根据权利要求4所述的一组肌酸激酶同工酶核酸适配体的应用，其特征在于：所述核酸适配体在制备肌酸激酶同工酶检测试剂盒中的应用。6.一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒，所述检测试剂盒包括检测试纸，所述检测试纸包括底板(5)，粘合在底板(5)上且依次搭接的样品垫(1)、结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸水垫(4)；所述硝酸纤维素膜(3)上靠近结合垫(2)的一侧设有检测线(6)，硝酸纤维素膜(3)上靠近吸水垫(4)的一侧设有质控线(7)；其特征在于：所述的结合垫(2)上包被有5’一端或3’一端由胶体金标记，且5’一端或3’一端连接有非适配体核苷酸序列的A核酸适配体；检测线(6)上包被有与链霉亲和素结合的B核酸适配体，质控线(7)上包被有与链霉亲和素结合的互补核苷酸序列，所述互补核苷酸序列为与所述非适配体核苷酸序列互补的核苷酸序列；A核酸适配体和B核酸适配体的核苷酸序列不同，且分别选自如权利要求1～3中任一项中所述核苷酸序列表中的SEQIDNo.1～SEQIDNo.5，或分别选自如权利要求1～3中任一项中所述核苷酸序列表中的SEQIDNo.6～SEQIDNo.10，且应当排除A核酸适配体为所述核苷酸序列表中的SEQIDNo.2所示的核苷酸序列时，B核酸适配体为所述核苷酸序列表中的SEQIDNo.5所示的核苷酸序列的情况，以及A核酸适配体为所述核苷酸序列表中的SEQIDNo.7所示的核苷酸序列时，B核酸适配体为所述核苷酸序列表中的SEQIDNo.10所示的核苷酸序列的情况。7.一种如权利要求6所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：检测试纸的制备方法步骤如下：(1)将A核酸适配体的5’一端或3’一端用胶体金标记，且5’一端或3’一端连接上一段非适配体核苷酸序列；(2)将样品垫(1)、结合垫(2)放入含有BSA和吐温的磷酸盐缓冲液中浸泡30min以上，烘干；(3)将胶体金标记的A核酸适配体溶液分散在步骤(2)处理过的结合垫(2)上；(4)将与链霉亲和素结合的B核酸适配体和互补核苷酸序列固定在硝酸纤维素膜(3)上作为检测线(6)和质控线(7)，烘干；(5)将样品垫(1)、结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸水垫(4)依次搭接并粘合于底板(5)上，制备得到所述检测试纸；A核酸适配体的5’一端或3’一端修饰巯基后，再用胶体金标记；B核酸适配体的5’一端或3’一端修饰有生物素，互补核酸序列的5’一端或3’一端修饰有生物素。8.根据权利要求7所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：胶体金标记的A核酸适配体制备方法如下：(1)将5’一端或3’一端修饰有巯基的A核酸适配体加入TE缓冲液配成溶液1，取溶液1加入TCEP中，反应1h～2h，得到溶液2，TCEP与所述修饰有巯基的A核酸适配体的摩尔比为5:1～50:1；(2)将胶体金在8000r/min～12000r/min下离心10min～30min，弃上清，加入超纯水混合，然后与溶液2混合，最后震荡1min，4℃至室温过夜，得到溶液3；所述胶体金、超纯水与溶液2的体积比为500:50:0.2～500:50:20；(3)将N...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕雪飞，冯薇，邓玉林，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：北京,11