人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断试纸制造技术

本实用新型专利技术涉及一种人肌红蛋白／肌酸激酶同工酶／心肌钙蛋白Ｉ诊断试纸，为通过快速免疫层析法，定性地检测临床标本（全血／血清／血浆）中人肌红蛋白、肌酸激酶同工酶和心肌钙蛋白Ｉ的诊断试纸。本实用新型专利技术是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、颜色颗粒固定垫、样品吸液层、ＭＡＸ线组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条人肌红蛋白单抗试验线、一条肌酸激酶同工酶单抗试验线、一条心肌钙蛋白Ｉ单抗试验线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板与颜色颗粒固定垫相互交叠连接，在颜色颗粒固定垫上压有样品吸液层。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断试纸
本专利技术涉及一种人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断试纸，属于免疫层析快速 检测领域。技术背景肌红蛋白是存在于肌肉组织中的一种亚铁血红素蛋白，它在肌肉细胞间传输氧气。由于 分子量较小，当肌肉细胞损伤后，肌红蛋白迅速释放到血液中，24小时后，开始在血液中升 高。肌红蛋白灵敏度很高但不够特异，所以肌红蛋白作为心肌梗死早期标志物之一，具有很 高的阴性排除价值。肌酸激酶同工酶是存在于心肌组织中的一种二聚体酶，参与肌肉组织的新成代谢。当心 肌损伤后，肌酸激酶同工酶释放到血液中，3-8小时后，开始在血液中升高。肌酸激酶同工酶是最重要的心肌梗死标志物之~"o肌钙蛋白由肌钙蛋^1、 T、 C三亚基构成，它们和原肌球蛋白一起通过调节C^+对横纹 肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用。当心肌损伤后，心肌肌钙蛋白 复合物释放到血液中，4-6小时后，开始在血液中升高，升高的肌钙蛋白I能在血液中保持 很长时间(6-10天)，这样就提供了较长的检测期。并且心肌肌钙蛋白I具有高度的心肌特异 性和灵敏度，所以心肌肌钙蛋白I己成为目前最理想的心肌梗死标志物。常用的测定方法有放射性免疫法(RIAs)、高压液相色谱分析法、生化分析仪、蛋白分析 仪及各种诊断试剂盒。这些方法需要特殊防护设备、严苛的条件、价格昂贵的仪器和训练有 素的人员，而且操作费时、样本存储困难，不易于推广应用。
技术实现思路
本专利技术克服了现有技术中存在的一些问题，提供了一种利用快速免疫层析法，定性地检 测临床标本(全血/血清/血浆)中人肌红蛋白、肌酸激酶同工酶和心肌钙蛋白I的诊断试纸， 是对急性心肌梗塞检测的一种辅助手段，仅用于体外诊断。为解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断试纸是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、 颜色颗粒固定垫、样品吸液层、MAX线组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有 一条人肌红蛋白单抗试验线、 一条肌酸激酶同工酶单抗试验线、 一条心肌^蛋白I单抗试验 线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层， 硝酸纤维素膜两端分别与吸水板与颜色颗粒固定垫相互交叠连接，在颜色颗粒固定垫上压有 样品吸液层。其中颜色颗粒可以是一种金属胶体颗粒，可包括胶体金颗粒、银颗粒、铁颗粒、磁性颗 粒等， 一种标记颗粒，可包括染料颗粒、乳胶颗粒、荧光顿粒等，当釆用磁性颗粒时可实现 半定量或全定量检测。样品吸液层由三层材料叠加组成，第一层为一定规格无纺布层、第二层为玻璃纤维层、 第三层为一定规格无纺布层，上述物质均需经过表面活性剂缓冲液浸泡处理，干燥后备用。检测时，把试纸的取样端放入检测样本中(液面不得超过MAX线)由于毛细管作用检测 样品将沿着试纸条向吸水层端移动，样品中肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、心肌钙蛋白I抗原 可与各自相应标记探针发生特异结合后继续移动与包被在硝酸纤维素膜上的抗体结合，从而 被抗肌红蛋白、抗肌酸激酶同工酶、抗心肌钙蛋白I单克隆抗体识别，即发生双抗夹心的特 异结合。检测过程中，当上行液面即滞留于此区域的标记探针将显示相应的红色，出现两条 或以上红线为阳性，仅出现一条红线表示为阴性结果。于采用上述技术方案，本专利技术所提供的人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断 试纸具有这样的有益效果即特异性强，灵敏度高，易储存，无须专门技术人员操作，不需要仪器设备，而且结果易读。附图说明图1为人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断试纸的主视结构图。图2为人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断试纸的俯视结构图。 图3为人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断试纸的阳性结果图。 图4为人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白I诊断试纸的阴性结果图。 图中1、吸水板，2、硝酸纤维素膜，3、羊抗鼠多克隆抗体控制线，4、试验线，5、颜 色颗粒固定垫，6、样品吸液层，7、底板，8、 MAX线。具体实施例1 合成免疫原口( 1)用^fi学合成方法合成两种不同结合位点的肌红蛋白合成免疫原；(2) 用化学合成方法合成两种不同结合位点的肌酸激酶同工酶合成免疫原；(3) 用化学合成方法合成两种不同结合位点的心肌钙蛋白I合成免疫原。2. 单克隆抗体的制备(1) 将制备的两种不同结合位点的肌红蛋白合成免疫原免疫BALB/c小鼠。细胞融合建 立瘤株进行筛选，取瘤细胞注射于BALB/c小鼠腹腔，使其产生腹水。提取小鼠腹水 纯化筛选，获得与肌红蛋白分子不同位点结合的两种肌红蛋白单克隆抗体I 、肌红 蛋白单克隆抗体II;(2) 将制备的两种不同结合位点的肌酸激酶同工酶合成免疫原分别免疫BALB/c小鼠。 用SP20细胞融合建立瘤株进行筛选，取瘤细胞注射于BALB/c小鼠腹腔，使其产生 腹水。提取小鼠腹水纯化筛选，获得与肌酸激酶同工酶分子不同位点结合的两种肌 酸激酶同工酶单克隆抗体I 、肌酸激酶同工酶单克隆抗体II;(3) 将制备的两种不同结合位点的心肌钙蛋白I合成免疫原分别免疫BALB/c小鼠。用 SP20细胞融合建立瘤株进行筛选，取瘤细胞注射于BALB/c小鼠腹腔，使其产生腹水。 提取小鼠腹水纯化筛选，获得与心肌钙蛋白I分子不同位点结合的两种心肌钙蛋白I 单克隆抗体I、心肌钙蛋白I单克隆抗体II;3. 颜色颗粒与单克隆抗体的结合把肌红蛋白单克隆抗体II、肌酸激酶同工酶单克隆抗体II、心肌钙蛋白i单克隆抗体n标记的颜色颗粒分别吸附到纤维材料上，干燥后备用。4. 制膜机制膜肌红蛋白单克隆抗体I 、肌酸激酶同工酶单克隆抗体I 、心肌钙蛋白I单克隆抗体I包被试验线，控制线由羊抗鼠多克隆抗体包被。5. 试纸条组合按公知技术组合。6. 使用方法采集全血(静脉血或指尖血)、血清或血浆。如使用全血标本，请立即使用。不 应将标本在室温条件下长时间放置。如使用血清/血浆标本进行检测，应尽快分离出血清或血桨，避免溶血。已经溶血的标本不能使用。静脉血标本在2-8'C条件下可以保存两天，不能冷 冻。血清或血浆标本在2-8'C条件下可以保存两天。如长期保存需冷冻(-2(TC)。避免反复 冻融。收集样本在干净的样杯中，将试纸吸液层端插入样本中，待测样本界面勿超过诊断试纸 上的"MAX"线，10-15分钟内观察结果。显色区为两条或以上红色线，则检测结果为阳 性；仅出现一条控制线时为阴性；控制线未出现色带，表明试纸过期或操作不当，请另取 试纸重新检测。权利要求1. 一种人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/肌钙蛋白I诊断试纸，其特征在于它是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纤维素膜(2)、颜色颗粒固定垫(5)、样品吸液层(6)、MAX线(8)组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条人肌红蛋白单抗试验线(4)、一条肌酸激酶同工酶单抗试验线(4)、一条肌钙蛋白I单抗试验线(4)和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线(3)，在底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板与颜色颗粒固定垫相互交叠连接，在颜色颗粒固定垫上压有样品吸液层。2. 根据权利要求l所述的人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/肌钙蛋白I诊断试纸，其特征在于颜色颗粒是一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人肌红蛋白／肌酸激酶同工酶／肌钙蛋白Ｉ诊断试纸，其特征在于它是由底板（７）、吸水板（１）、硝酸纤维素膜（２）、颜色颗粒固定垫（５）、样品吸液层（６）、ＭＡＸ线（８）组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条人肌红蛋白单抗试验线（４）、一条肌酸激酶同工酶单抗试验线（４）、一条肌钙蛋白Ｉ单抗试验线（４）和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线（３），在底板一端端头为吸水板，另一端端头为样品吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板与颜色颗粒固定垫相互交叠连接，在颜色颗粒固定垫上压有样品吸液层。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：万志静，万志强，
申请(专利权)人：万华普曼生物工程有限公司，
类型：实用新型
国别省市：11[中国|北京]