紫草素在制备治疗肺癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及紫草素在制备治疗肺癌药物中的应用，其中所述的紫草素的化学结构式如下式(Ⅰ)所示。本发明专利技术所述应用中的紫草素可有效激活癌细胞内P53通路，诱导癌细胞衰老，发挥治疗肺癌的功效。

Application of shikonin in preparing medicine for treating lung cancer

The invention relates to the application of shikonin in the preparation of a medicament for treating lung cancer, wherein the chemical structure formula of the shikonin is shown in the following formula (I). The shikonin in the invention can effectively activate the P53 pathway in the cancer cells, induce the senescence of the cancer cells, and play the efficacy of treating the lung cancer.

【技术实现步骤摘要】
紫草素在制备治疗肺癌药物中的应用
：本专利技术涉及含有机有效成分的医药配制品，具体涉及来紫草科紫草属植物的酮类化合物的抗肿瘤药物制剂。
技术介绍
：肿瘤特别是恶性肿瘤是严重威胁人类生命健康的重大疾病之一，其对人类杀伤力仅次心脑血管病，位于全球第二，是目前世界各国仍然面临的重大疾病难题。据资料统计，我国癌症发病率在不到20年的时间里上升了69％，死亡率上升了29.4％；另有资料表示，自2010年后，癌症已成为我国死亡的主要原因和主要的公共健康问题。因此，寻找有效的癌症治疗药物，进一步完善临床治疗肿瘤体系，已成为当前迫切需要研究的问题。我国作为中草药大国，从中草药中提取分离获得有效抗肿瘤成分具有得天独厚的优势，相比于化学合成抗癌药物，从动植物中提取获得的天然抗肿瘤化合物往往具有高效、低毒、稳定、种类多等特点。紫草属紫草科多年生草本植物。紫草最早记载于《神农本草经》，为防治麻疹的中药。作为传统中药材，紫草使用历史悠久，它具有消炎、解热和收敛功效，药用其根，已应用于临床，疗效确切。近年来，基于中药现代药理学发展研究，发现紫草具有抗肿瘤活性，能够抑制多种肿瘤细胞的生长。紫草素是从紫草中提取的酮类化合物，其化学名称为5,8-二羟基-2-[(1R)-1-羟基-4-甲基戊-3-烯基]萘-1,4-二酮，分子量为288.31；紫草素是紫红色带有金属光泽的针状晶体，微溶于水，易溶于二甲基亚砜、乙醇、乙醚等有机溶剂。紫草素具有抗炎、抗菌、抗病毒等方面的生物活性。但目前尚未见紫草素可诱导癌细胞衰老发挥抗肿瘤作用的报道。
技术实现思路
：本专利技术要解决的技术问题是提供紫草素的新用途，即在制药中的新用途。上述紫草素的新用途是，紫草素在制备治疗肺癌药物中的应用，其中所述的紫草素的化学结构式如下式(Ⅰ)所示，上述应用中，所述的药物由紫草素和医学上可接受的辅料组成。上述应用中，所述的药物为片剂、颗粒剂或喷雾剂。本专利技术所述应用中的紫草素可有效激活癌细胞内P53通路，诱导癌细胞衰老，发挥治疗肺癌的功效。附图说明：图1为肺癌细胞活力与紫草素的浓度关系曲线。图2为紫草素上调肺癌细胞内p53蛋白表达水平的电泳图。图3为不同浓度的紫草素诱导肺癌细胞衰老的显微照片。图4为紫草素抑制移植瘤生长的效果图，其中，左图为裸鼠体重变化曲线，右图为不同给药方式移植瘤大小变化曲线。图5为紫草素上调移植瘤中p53蛋白表达水平的显微照片。图6为紫草素诱导移植瘤细胞衰老的显微照片。具体实施方式：实验例1：紫草素对肺癌细胞活力的抑制效果细胞生长状态较好时，以2000个/孔接种于96孔板中，过夜培养，待细胞贴壁状态较好时，弃去原来的培养基，接着按照设计的药物浓度：紫草素浓度0,1,2,4,6,8μM进行换液给药作用于A549细胞72h后终止培养，吸走培养基，加入100μl0.5mg/ml的MTT溶液，37℃培养4～6小时，弃MTT溶液，最后加入150μl的DMSO震荡混匀，置于酶标仪中，于490nm测定波长处检测吸光度值。结果如图1所示，紫草素可明显抑制肺癌细胞A549的生长。实验例2：紫草素上调肺癌细胞内p53蛋白表达水平取对数生长期A549细胞，以6×104个/孔接种于6孔培养板中，过夜培养，待细胞贴壁状态较好时，弃去培养基，加入含不同浓度紫草素(0、1、2μM)的新鲜培养基继续培养72h后，消化、收集细胞、离心、PBS洗涤2次，洗掉上清，然后加入适量RIPA和1％的蛋白酶抑制剂PMSF，裂解细胞45min后，收集上清液并测定蛋白含量，使用Westernblotting的方法检测p53蛋白的表达情况。结果如图2所示，紫草素作用于A549细胞后可明显上调细胞内p53蛋白表达水平。实验例3：紫草素诱导肺癌细胞衰老取对数生长期A549细胞，以6×104个/孔接种于6孔板中，过夜培养，待细胞贴壁状态较好时，加入含不同浓度紫草素(0、1、2μM)的新鲜培养基继续培养72h后，弃去旧的培养基，用PBS洗涤两遍每孔加入1XFixativesolution固定液固定10min后弃去，然后再用PBS洗涤两次，接着加入β-半乳糖苷酶染色液，孵育过夜，在荧光倒置显微镜下检测细胞衰老程度，蓝色细胞越多，细胞蓝色程度越深，细胞衰老程度越严重。结果如图3所示，紫草素作用后，细胞衰老程度呈现剂量依赖性增加。实验例4：紫草素抑制移植瘤的生长建立人A549移植瘤模型：选用4到6周龄的雌性裸鼠，将A549细胞制成悬液，然后按照细胞数2X106/只接种到裸鼠右侧腋下窝。每周称量2～3次体重，用游标卡尺测量肿瘤体积大小，按照以下公式计算肿瘤体积：TumorVolume(TV)＝1/2X(LXW2)，其中L是肿瘤纵轴的长度，W是肿瘤横轴的长度，并绘制裸鼠肿瘤生长曲线。当肿瘤的平均体积达到约100mm3时，将小鼠随机分成4组，每组10只。按照以下方案给药：空白对照组(玉米油)；紫草素剂量给药组(5、10mg/kg)；阳性对照组(Afatinib，5mg/kg)，每天固定时间口服灌胃给药1次，持续给药30天，期间每3天称量小鼠体重1次，监测肿瘤重量与大小。给药结束后，处死小鼠，取肿瘤组织并保存。结果如图4所示，紫草素能抑制A549移植瘤的生长，具有体内抗肿瘤活性。实验例5：紫草素上调移植瘤中p53蛋白表达水平取上述实验例4中获得的肿瘤组织，用4％多聚甲醛固定后用石蜡包埋，然后切成厚度为3-4μm厚的切片，这些切片经过脱蜡、复水、灭活内源酶以及透膜和微波修复等一系列过程处理后，用5％的BSA封闭液室温封闭20min，然后用来按比例稀释的p53一抗，于4℃孵育过夜，次日用PBS洗涤5minX3次后，室温孵育相应的二抗1h，然后用DBA显色剂显色，苏木精染色，染色后用中性树脂封片，将染好色的切片放置显微镜下观测拍照。结果如图5所示，紫草素能显著升高移植瘤组织中的p53蛋白水平，并且呈现剂量依赖性。实验例6：紫草素诱导移植瘤细胞衰老取上述实验例4中获得的新鲜肿瘤组织，剪切成3-4mm厚的小块，小块用包埋剂包埋，于冰冻切片机中切成5μm厚度的切片并沾附到载玻片上，用β-半乳糖苷酶衰老染色试剂盒中固定液充分覆盖切片组织，室温固定组织15min。PBS洗涤组织3次，每次5分钟。吸除PBS，加入适当量的染色工作液(覆盖组织)。37℃孵育过夜，然后在荧光倒置显微镜下观察拍照。结果如图6所示，紫草素能抑制体内肿瘤细胞衰老，并且细胞衰老程度呈现剂量依赖性增加。实验例7：药物制剂的制备例例1(片剂)取紫草素30g，加入淀粉30g、糊精10g、蔗糖8g和适量的65％乙醇混合均匀以后，制粒，干燥得到颗粒，过筛整粒后加入微粉硅胶0.5g混合均匀，压制成普通片剂。例2(颗粒剂)取紫草素30g，加入糖粉20g、糊精16g、乳糖14g、甘露醇1.5g、木糖醇1.4g和适量的65％乙醇制软材，过筛网，60℃干燥得到颗粒，过筛整粒后，采用包装设备将其包装成颗粒剂，制备成颗粒剂。例3(喷雾剂)取紫草素30mg，加入冰片0.2mg，混合均匀，加入7.5ml乙醇中搅拌溶解，加入已溶解对羟基苯甲酸乙酯的体积比为4:1的1,2-丙二醇和聚乙二醇600混和液1ml，充分搅拌，加入已溶解亚硫酸氢钠的纯化水至10ml，摇匀过滤，在室温下灌入容器内，再将阀门装上并轧紧本文档来自技高网...

【技术保护点】
紫草素在制备治疗肺癌药物中的应用，其中所述的紫草素的化学结构式如下式(Ⅰ)所示，

【技术特征摘要】
1.紫草素在制备治疗肺癌药物中的应用，其中所述的紫草素的化学结构式如下式(Ⅰ)所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘中秋，卢琳琳，郑宏明，姬利延，冯潜，王莹，戚笑笑，吴鹏，朱丽君，
申请(专利权)人：广州中医药大学，
类型：发明
国别省市：广东,44