白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体为白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法，白色念珠菌菌体加入到戊二醛固定液固定，采用无菌去离子水清冼，不同浓度梯度的叔丁醇脱水，菌液滴入到纯叔丁醇中在4℃冰箱冷冻，干燥后的样品用离子溅射喷金后，调整并设置参数即可进行扫描电镜来观察菌体生物膜的形态结构。本发明专利技术提供的白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法，减少白色念珠菌的分泌物干扰样品的成像质量；尽量消除磷酸盐颗粒将部分样品覆盖并遮蔽的现象；降低样品出现微小的形变和避免生物膜小部分脱落；避免菌体生物膜表面龟裂或不同程度皱缩凹陷甚至是断裂，同时消除对菌体表面损伤。

Rapid preparation of sample for Candida albicans field emission scanning electron microscope

The invention belongs to the field of biotechnology, specific for Candida albicans and rapid method for field emission scanning electron microscope sample preparation methods of Candida albicans was added to glutaraldehyde fixation, using sterile deionized water washing, dehydration of tert butyl alcohol of different concentration gradient, liquid drops into the pure TERT butanol at 4 DEG C in the freezer, after drying the sample by ion sputtering after spraying the structure adjustment and parameter settings of scanning electron microscope to observe bacterial biofilm. The invention provides a fast method for Candida albicans field emission scanning electron microscope sample preparation method, reduce the imaging quality of secretions samples of Candida albicans interference; try to eliminate phosphate particles of some samples covering and shielding phenomenon; reduce the samples of tiny deformation and avoid the small part of the biofilm shedding; avoid bacterial biofilm or surface cracking different degrees of shrinkage depression or even fracture, and the elimination of bacterial surface damage.

【技术实现步骤摘要】
白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法
本专利技术属于生物
，具体为白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法。
技术介绍
白色念珠菌(Candidaalbicans)的生物被膜也称生物膜。在自然界中，绝大多数的细菌存在于生物被膜中。已有研究表明，部分白色念珠菌的生物被膜的存在与其致病的严重程度相关，因此探究白色念珠菌的生物膜结构也逐渐成为科研工作者们所关注的一个重点。扫描电镜已成为一种研究微观世界的有力工具，很多重大发现和研究成果都是通过观察获得的。然而，在实际进行仪器观察操作时，由于扫描电镜是高精密仪器，结构复杂，且影响其成像的因素较多。想要获得高分辨率、立体感强、层次、细节分明，保持样品原始形貌的高质量扫描电镜图像，样品的快速制备起着至关重要的作用，同时扫描电镜的使用和参数的设置也直接影响到图像质量。表面结构由于受多种因素的影响，反差降低，此外，脱水过程、镀膜操作等样品处理的影响，图像质量下降，必须选择合适而且快速的样品制备方法与电镜观察参数才能观察到清晰的菌体外周微细结构。白色念珠菌扫描电镜样品的传统制备方法，将念珠菌菌悬液以8000rpm离心3～5mi本文档来自技高网...

【技术保护点】
白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法，包括以下过程：将冷藏存于4℃冰箱中固体斜面上的白色念珠菌菌株挑出后，在超净工作台里接种于固体马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，划线并培养于30℃的恒温培养箱中培养12h后，挑取培养皿上单菌落至液体普通肉汤培养基里于30℃的空气浴振荡器中以200rpm培养12～24h，得到白色念珠菌菌悬液；其特征在于，将白色念珠菌菌悬液以8000rpm离心3～5min后，弃掉上清液，获得白色念珠菌菌体进行以下操作：(1)将白色念珠菌菌体加入到2.5％戊二醛固定液中于4℃冰箱单固定4h；(2)采用无菌去离子水清冼2～3次；(3)不同浓度梯度的叔丁醇脱水，叔丁醇质量浓度依次...

【技术特征摘要】
1.白色念珠菌场发射扫描电子显微镜样品的快速制备方法，包括以下过程：将冷藏存于4℃冰箱中固体斜面上的白色念珠菌菌株挑出后，在超净工作台里接种于固体马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，划线并培养于30℃的恒温培养箱中培养12h后，挑取培养皿上单菌落至液体普通肉汤培养基里于30℃的空气浴振荡器中以200rpm培养12～24h，得到白色念珠菌菌悬液；其特征在于，将白色念珠菌菌悬液以8000rpm离心3～5min后，弃掉上清液，获得白色念珠菌菌体进行以下操作：(1)将白色念珠菌菌体加入到2.5％戊二醛固定液中于4℃冰箱单固定4h；(2)采用无菌去离子水清冼2～3次；(3)不同浓度梯度的叔丁醇脱水，叔丁醇质量浓度依次为30％、50％、70％、85％、95％，各1次，5min/次，然后用100％叔丁醇脱水2...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋明珠，茆灿泉，李建，苏杨，黄婵，黎浩峰，周希，陈渝姣，蒲琪，彭正伟，雷子叶，
申请(专利权)人：成都大学，
类型：发明
国别省市：四川,51