一种耐酸性玉米赤霉烯酮解毒酶及其编码基因与应用制造技术

本发明专利技术涉及酶工程领域，具体公开了一种耐酸性玉米赤霉烯酮解毒酶及其编码基因与应用。本发明专利技术通过对玉米赤霉烯酮解毒酶的氨基酸序列进行优化，改变了解毒酶的8个氨基酸残基(与zlhy‑6解毒酶有8个氨基酸差异)，使重组表达玉米赤霉烯酮解毒酶最适反应pH由8.5降低到6.5，与猪、鸡肠道pH非常吻合，当pH低至5.0时，解毒酶酶活仍保留40％以上，大大提高该玉米赤霉烯酮解毒酶作为饲料添加剂在实际应用中的解毒效率。本发明专利技术还通过对玉米赤霉烯酮解毒酶基因进行密码子优化，并将该基因在重组酵母基因组中的拷贝数增加到4，大大提高了玉米赤霉烯酮解毒酶的表达量。

【技术实现步骤摘要】
一种耐酸性玉米赤霉烯酮解毒酶及其编码基因与应用
本专利技术涉及酶工程领域，具体地说，涉及一种耐酸性玉米赤霉烯酮解毒酶及其编码基因与应用。
技术介绍
玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)，又称F-2毒素，为2,4-二羟基苯甲酸内酯类化合物，主要是由禾谷镰刀菌次级代谢产生的一种真菌毒素。ZEN具有雌激素活性，对生殖系统有毒害作用，摄入过量ZEN导致动物外阴和乳腺肿大甚至阴道及直肠脱垂；影响哺乳动物乳房发育，导致哺乳推迟、假孕，甚至不孕或导致流产，胎儿畸形和死胎。ZEN可以引发肿瘤，不仅通过增加细胞色素CYP1A1酶活性来刺激人类乳腺癌MCF-7细胞的生长，同时也是食管癌发病率增加的病因之一。ZEN对人和动物肾脏、肝脏和血液也具有明显的毒害作用。ZEN的脱毒方法可以分为物理、化学和生物三大类，其中物理法有高压加热、辐照和吸附剂吸附等，化学法有臭氧、双氧水和碳酸钠处理等，生物法有微生物降解、微生物吸附和酶降解等。但传统的物理和化学脱毒方法会破坏营养物质、引入化学物质造成二次污染等问题，其应用受到一定的局限。生物降解法具有反应条件温和、专一性高、无残留、环境友好等优点，具有广阔的应用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐酸性玉米赤霉烯酮解毒酶，其特征在于，是如下(1)或(2)的蛋白质：(1)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(2)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且在pH为5.0～6.5时仍然具有降解玉米赤霉烯酮活性的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.一种耐酸性玉米赤霉烯酮解毒酶，其特征在于，是如下(1)或(2)的蛋白质：(1)由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(2)由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且在pH为5.0～6.5时仍然具有降解玉米赤霉烯酮活性的由SEQIDNO.1衍生的蛋白质。2.编码权利要求1所述的耐酸性玉米赤霉烯酮解毒酶的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其含有如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。4.含有权利要求2或3所述基因的载体。5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体的构建方法包括如下步骤：(1)用限制性内切酶EcoRI对SEQIDNO.3所示的核苷酸序列α-zde-6和质粒pAO815进行酶切反应；(2)将酶切后的质粒pAO815去磷酸化；(3)将酶切回收得到的基因片段和去磷酸化的质粒pAO815进行酶连接反应，得到重组表达载体。6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于，所述载体的构建方法还包括如下步骤：(4)将重组表达载体转化大肠杆菌TOP10，经氨苄青霉素抗性筛选，挑取菌落培养，分别进行PCR鉴定和重组表达载体的酶切鉴定，获得含有玉米赤霉烯酮解毒酶基因序列的重组表达载体pAO815-α-zde-3；(5)单拷贝表达框的扩增：以重组表达载体pAO815-α-zde-3为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，邢福国，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11