拮抗性CTLA‑4适体及其于增进免疫活性的应用制造技术

本发明专利技术提供结合CTLA‑4并拮抗CTLA‑4的适体及其增进免疫活性与治疗癌症和HIV感染的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】拮抗性CTLA-4适体及其于增进免疫活性的应用相关申请案本申请案依据35U.S.C.§119(e)请求于2014年7月31日提申的美国临时申请案第62/031,406号的优先权，其全部内容以引用的方式并入本文。
本专利技术提供结合CTLA-4并拮抗CTLA-4的适体及其增进免疫活性与治疗癌症和HIV感染的用途。
技术介绍
癌症是导致人类死亡与极大金融损失的最重要疾病。依据2004年的WHO报告，在全世界有超过740万人因为这个疾病而丧生且罹病者仍逐年增加(Abou-Alfa,G.K.,etal.(2006),JClinOncol24,4293-4300)。癌症的主要治疗是外科手术、化学疗法以及放射线疗法。但是，这些传统疗法会造成严重副作用而且也会杀死正常细胞。因此，开发了标靶疗法且经证实能有效治疗数种类型的癌症(VanCutsem,E.,etal.(2009),NEnglJMed360,1408-1417，Klein,S.andLevitzkiA.(2007),AdvCancerRes97,295-319)。但是，几乎没有肿瘤特异性标记而且只有少数标靶疗法成功应用于临床上(Jain,R.K.,etal.(2009),NatReyClinOncol6,327-3384，Gazdar,A.F.(2009),Oncogene28Suppl1,S24-31)。此外，许多研究已显示，基因体不稳定促使对标靶疗法的抗性(Dassie,J.P.,etal.(2009),NatBiotechnol27,839-849，Sica,A.,Schioppa,T.,Mantovani,A.,andAllavena,P.(2006),EurJCancer42,717–727)。最近，报导已指出肿瘤周遭微环境与肿瘤进展(尤其是免疫侵袭)有强烈相关性(Pollard,J.W.(2004),NatRevCancer4,71-78，deVisser,K.E.,andCoussens,L.M.(2006),ContribMicrobiol13,118-137，Stewart,T.J.,and25Abrams,S.I.(2008),Oncogene27,5894-5903，Joyce,J.A.,andPollard,J.W.(2009),NatRevCancer9,239-252)。数种细胞类型已被提出在肿瘤微环境中扮演关键角色并且参与肿瘤进展，包括肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、调节性T细胞(Treg)、天然杀手(NK)细胞以及CD8+T细胞(Solinas,G.,Germano,G.,Mantovani,A.,andAllavena,P.(2009),JLeukocBiol86,1065-1073，Zou,W.(2006),NatRevImmunol6,295-307，Whiteside,T.L.(2006),CancerTreatRes130,103-124，Coffelt,S.B.Hughes,R.,andLewis,C.E.(2009),BiochimBiophysActa1796,11-18)。NK以及CD8+T细胞是通过细胞媒介的细胞毒性来消灭异常肿瘤细胞的两种主要有效细胞类型。Treg细胞代表整个CD4+T细胞的一小部分(5-6％)(Wang,R.F.,Peng,G.,andWang,H.Y.(2006),SeminImmunol18,136-142)，而且在肿瘤微环境中是另一种主要调节性细胞类型。在正常环境下，Treg细胞保护宿主免于自身反应性T细胞，因而预防自体免疫疾病形成(Corthay,A.(2009),ScandJImmunol70,326-336)。但是，在肿瘤微环境中，Treg可分泌诸如IL-10与TGF-β的细胞激素来抑制肿瘤靶定内生性(NK细胞)与顺应性(CD8+T细胞)免疫反应的功能(Bingle,L.,Brown,N.J.,andLewis,C.E.(2002),JPathol196,254-265)以及保护肿瘤细胞免于免疫清除(Andrew,G.etal.(2006),JImmunol177,896-904)。可在肿瘤微环境中下调免疫系统的一种蛋白质受体是细胞毒性T淋巴球抗原4(CTLA-4)，也已知是分化群152(CD152)。CTLA-4是在T细胞表面上被发现到，而T细胞会针对抗原发动细胞免疫攻击。T细胞可以通过刺激T细胞上的CD28受体而被活化，其亦可通过刺激CTLA4受体而被抑制。虽然抗体通常使用于靶定疾病蛋白质，但它们有自己的限制性，包括生产成本高、稳定性低，且在许多情况下对它们能够靶定的表位有所限制。适体拥有许多使其适用于治疗应用的优点，诸如分子量较低而容许更容易穿透过组织、化学合成成本低、修饰方法已建立以及高稳定性。因此，开发出对某个目标蛋白质具有高亲和力的适宜适体有极大利益。
技术实现思路
本
技术实现思路
至少一部分是基于意外发现，靶定CTLA-4(CA21)的核苷酸适体在同系小鼠模型中成功地压制肺肿瘤细胞生长达超过70％。因此，本
技术实现思路
的一个态样是特征为一种结合至CTLA-4的核酸适体。该适体包含与(i)GATGGTGAAAATGGGCCTAGGGTGGACGGT(SEQIDNO:1)、(ii)GATGACTGGATGCAAAAATGCTGTGGGGTA(SEQIDNO:6)、(iii)GTCCACACTCAGAAAACAGAATAGGGGGTA(SEQIDNO:7)，或(iv)CGATCGAAAATGTCCAGGGAGTTGTCTGTA(SEQIDNO:8)至少85％(例如90％或95％)一致的核酸序列。此一抗CTLA-4适体可以低于20nM的解离常数(Kd)结合至CTLA-4。在一个实例中，该抗-CTLA4适体包含GATGGTGAAAATGGGCCTAGGGTGGACGGT(SEQIDNO:1)、GATGACTGGATGCAAAAATGCTGTGGGGTA(SEQIDNO:6)、GTCCACACTCAGAAAACAGAATAGGGGGTA(SEQIDNO:7)，或CGATCGAAAATGTCCAGGGAGTTGTCTGTA(SEQIDNO:8)的核酸序列。此一抗-CTLA4适体可为具有TCCCTACGGCGCTAACGATGGTGAAAATGGGCCTAGGGTGGACGGTGCCACCGTGCTACAAC(SEQIDNO:2)、TCCCTACGGCGCTAACGATGACTGGATGCAAAAATGCTGTGGGGTAGCCACCGTGCTACAAC(SEQIDNO:3)、TCCCTACGGCGCTAACGTCCACACTCAGAAAACAGAATAGGGGGTAGCCACCGTGCTACAAC(SEQIDNO:4)，或TCCCTACGGCGCTAACCGATCGAAAATGTCCAGGGAGTTGTCTGTAGCCACCGTGCTACAAC(SEQIDNO:5)的核酸。本文所述任一种抗-CTLA-4适体可与聚乙二醇(PEG)接合，聚乙二醇可具有范围自30kDa至50kDa的分子量，例如40kDa。在一些实例中，PEG接合至该适体的3’端。在另一个态样中，本
技术实现思路
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【技术保护点】
一种核酸适体，包含与选自下列组成的群组的核苷酸序列至少85％一致的核酸序列：(i)GATGGTGAAAATGGGCCTAGGGTGGACGGT(SEQ ID NO:1)；(ii)GATGACTGGATGCAAAAATGCTGTGGGGTA(SEQ ID NO:6)；(iii)GTCCACACTCAGAAAACAGAATAGGGGGTA(SEQ ID NO:7)；以及(iv)CGATCGAAAATGTCCAGGGAGTTGTCTGTA(SEQ ID NO:8)；其中适体结合CTLA‑4。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.31 US 62/031,4061.一种核酸适体，包含与选自下列组成的群组的核苷酸序列至少85％一致的核酸序列：(i)GATGGTGAAAATGGGCCTAGGGTGGACGGT(SEQIDNO:1)；(ii)GATGACTGGATGCAAAAATGCTGTGGGGTA(SEQIDNO:6)；(iii)GTCCACACTCAGAAAACAGAATAGGGGGTA(SEQIDNO:7)；以及(iv)CGATCGAAAATGTCCAGGGAGTTGTCTGTA(SEQIDNO:8)；其中适体结合CTLA-4。2.如权利要求1所述的核酸适体，其中适体包含与选自下列组成之群组的核苷酸序列至少90％一致的核酸序列：(i)GATGGTGAAAATGGGCCTAGGGTGGACGGT(SEQIDNO:1)；(ii)GATGACTGGATGCAAAAATGCTGTGGGGTA(SEQIDNO:6)；(iii)GTCCACACTCAGAAAACAGAATAGGGGGTA(SEQIDNO:7)；以及(iv)CGATCGAAAATGTCCAGGGAGTTGTCTGTA(SEQIDNO:8)。3.如权利要求2所述的核酸适体，其中适体包含与选自下列组成之群组的核苷酸序列至少95％一致的核酸序列：(i)GATGGTGAAAATGGGCCTAGGGTGGACGGT(SEQIDNO:1)；(ii)GATGACTGGATGCAAAAATGCTGTGGGGTA(SEQIDNO:6)；(iii)GTCCACACTCAGAAAACAGAATAGGGGGTA(SEQIDNO:7)；以及(iv)CGATCGAAAATGTCCAGGGAGTTGTCTGTA(SEQIDNO:8)。4.如权利要求3所述的核酸适体，其中适体包含选自下列组成之群组的核酸序列：(i)GATGGTGAAAATGGGCCTAGGGTGGACGGT(SEQIDNO:1)；(ii)GATGACTGGATGCAAAAATGCTGTGGGGTA(SEQIDNO:6)；(iii)GTCCACACTCAGAAAACAGAATAGGGGGTA(SEQIDNO:7)；以及(iv)CGATCGAAAATGTCCAGGGAGTTGTCTGTA(SEQIDNO:8)。5.如权利要求4所述的核酸适体，其中适体由选自下列组...

【专利技术属性】
技术研发人员：白果能，杨泮池，张翼中，黄舶沧，叶劭德，
申请(专利权)人：中央研究院，台湾大学，台北医学大学，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71