经修饰的双链RNA试剂制造技术

本发明专利技术的一个方面涉及能够抑制靶基因表达的双链RNA(dsRNA)试剂。该dsRNA试剂的有义链包括至少一个热不稳定性核苷酸，和至少一个出现在与该反义链的种子区(位置2‑8)的相对位点处的所述热不稳定性核苷酸；并且该dsRNA试剂的反义链包括至少两个为该核苷酸提供小于或等于2’‑OMe修饰的空间体积的空间体积的经修饰的核苷酸，其中所述经修饰的核苷酸被11个核苷酸长度分开。本发明专利技术的其他方面涉及包括这些适于治疗性用途的dsRNA试剂的药物组合物，以及通过给予这些dsRNA试剂来抑制靶基因表达的方法，例如用于治疗各种疾病病症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的双链RNA试剂本申请要求于2014年12月18日提交的美国临时申请号62/093,919、于2014年11月24日提交的美国临时申请号62/083,744，以及于2014年8月20日提交的美国临时申请号62/039,507的优先权权益，将所有的这些申请通过引用以其全部内容结合在此。专利
本专利技术涉及具有有利于抑制靶基因表达的特定基序的RNAi双链体试剂，以及适于治疗性用途的RNAi组合物。另外，本专利技术提供了通过给予这些RNAi双链体试剂来抑制靶基因表达的方法，例如用于治疗各种疾病。背景RNA干扰或“RNAi”是最初由费尔(Fire)和同事创造的术语，用来描述观察到双链RNAi(dsRNA)可以阻断基因表达(费尔等人(1998)自然(Nature)391,806-811；艾巴施(Elbashir)等人(2001)基因与发育(GenesDev.)15,188-200)。短dsRNA在许多有机体(包括脊椎动物)中指导基因特异性的转录后沉默，并且已经为研究基因功能提供了一个新的工具。RNAi由RNA诱导沉默复合体(RISC)介导，RISC是一种破坏与沉默触发物同源的信使RN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够抑制靶基因表达的双链RNA(dsRNA)试剂，包括有义链和反义链，每条链具有14至40核苷酸，其中该dsRNA试剂由式(I)表示：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.20 US 62/039,507;2014.11.24 US 62/083,744;1.一种能够抑制靶基因表达的双链RNA(dsRNA)试剂，包括有义链和反义链，每条链具有14至40核苷酸，其中该dsRNA试剂由式(I)表示：其中：B1、B2、B3、B1'、B2'、B3’、和B4'各自独立地表示含有一种修饰的核苷酸，该修饰选自下组，该组由以下各项组成：2'-O烷基、2'-经取代的烷氧基、2'-经取代的烷基、2'-卤代、ENA、和BNA/LNA；C1是一种位于与该反义链的种子区(位置2-8)相对的位点处的热不稳定性核苷酸；T1、T1’、T2’、和T3’各自独立地表示包括一种修饰的核苷酸，该修饰为该核苷酸提供小于或等于2’-OMe修饰的空间体积的空间体积；每个n1、n3、和q1的长度独立地是4至15个核苷酸；每个n5、q3、和q7的长度独立地是1-6个核苷酸；每个q2和q6的长度独立地是1-3个核苷酸；q5的长度独立地是0-10个核苷酸；并且每个n2、n4、和q4的长度独立地是0-3个核苷酸。2.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中n4、q2、和q6各自是1。3.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中n2、n4、q2、q4、和q6各自是1。4.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T1’和T3’被11个核苷酸长度分开。5.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中C1位于与该反义链的5’-端的位置5-8相对的位点处。6.如权利要求5所述的dsRNA试剂，其中当该有义链的长度是19-22个核苷酸，并且n4是1时，C1位于该有义链的5’-端的位置14-17处。7.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T1’位于从该反义链的5’端的位置14处，并且q2是1。8.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T3’位于从该反义链的5’端的位置2处，并且q6是1。9.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T1位于该有义链的裂解位点处。10.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中当该有义链的长度是19-22个核苷酸，并且n2是1时，T1位于从该有义链的5’端的位置11处。11.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T2’位于从该反义链的5’端的位置6-10处，并且q4是1。12.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中B1、B2、B3、B1’、B2’、B3’、和B4’各自含有2’-OMe修饰。13.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中C1具有选自下组的热不稳定性修饰，该组由以下各项组成与在该反义链中相对的核苷酸的错配；选自下组的脱碱基修饰，该组由以下各项组成：以及选自下组的糖修饰，该组由以下各项组成：其中B是经修饰的或未经修饰的核碱基，R1和R2独立地是H、卤素、OR3、或烷基；并且R3是H、烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或糖。14.如权利要求13所述的dsRNA试剂，其中该热不稳定性修饰是一种选自下组的错配，该组由以下各项组成：G:G、G:A、G:U、G:T、A:A、A:C、C:C、C:U、C:T、U:U、T:T、和U:T；并且任选地，在该错配对中至少一个核碱基是2’-脱氧核碱基。15.如权利要求13所述的dsRNA试剂，其中该热不稳定性修饰是GNA或16.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T1、T1’、T2’和T3’各自独立地选自DNA、RNA、LNA、2’-F、和2’-F-5’-甲基。17.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T1是DNA。18.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T1’是DNA、RNA或LNA。19.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T2’是DNA或RNA。20.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中T3’是DNA或RNA。21.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中每个有义链和反义链独立地由以下各项进行修饰：无环核苷酸、LNA、HNA、CeNA、2’-甲氧基乙基、2’-O-甲基、2’-O-烯丙基、2’-C-烯丙基、2’-脱氧、2’-氟、2’-O-N-甲基乙酰胺基(2’-O-NMA)、2’-O-二甲基氨基乙氧基乙基(2’-O-DMAEOE)、2’-O-氨基丙基(2’-O-AP)、或2’-ara-F。22.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中每个有义链和反义链含有至少两个不同的修饰。23.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中该dsRNA试剂不含有任何2’-F修饰。24.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中该有义链和/或反义链包括一个或多个硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联的嵌段。25.如权利要求24所述的dsRNA试剂，其中该有义链包括两个硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联的一个嵌段。26.如权利要求24所述的dsRNA试剂，其中该反义链包括被16-18个磷酸酯核苷酸间键联分开的两个硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联的两个嵌段。27.如权利要求1所述的dsRNA试剂，每个有义链和反义链具有15-30个核苷酸。28.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中该有义链具有19-22个核苷酸，并且该反义链具有19-25个核苷酸。29.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中该有义链具有21个核苷酸，并且该反义链具有23个核苷酸。30.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中该dsRNA试剂具有1-10个核苷酸长度的3’和/或5’突出端。31.如权利要求1所述的dsRNA试剂，其中该dsRNA试剂具有在该反义链的3’-端处的一个3’突出端，以及在该反义链的5’-端处的一个平端。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·迈尔，D·福斯特，S·米尔斯泰恩，S·库奇曼奇，V·贾达夫，K·拉杰夫，M·玛诺哈兰，R·帕马，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US