治疗脂质贮积病的方法和组合物技术

使用包含PKC活化剂例如苔藓抑素、苔藓抑素的类似物和多不饱和脂肪酸的组合物来治疗患有脂质贮积病患者。相应的，本公开提供了通过施用PKC活化剂治疗脂质贮积病，例如尼曼皮克病的患者的方法。在某些实施方式中，本公开还提供了包括向患有尼曼皮克C型病的患者施用有效量苔藓抑素1的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗脂质贮积病的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求享有在2014年4月18日提交的美国临时专利申请号61/981,473和在2014年5月1日提交的美国临时专利申请号61/987,360的优先权，其中的内容以引用的方式明确地并入本申请。
技术介绍
本专利技术引用的所有参考文献均以引用的方式明确地并入本专利技术。脂质贮积病(或脂质沉积)是一组遗传性代谢疾病，其中有害量的脂质在身体的一些细胞和组织中积累。通常患有这些疾病的人要么不能产生足够的代谢脂质所需的一种酶，要么它们不能产生正常工作的酶。随着时间的推移，这种过度贮积的脂肪可以引起细胞和组织永久性的损伤。许多脂质贮积疾病缺乏足够的治疗方法。这些疾病包括例如尼曼-皮克(Niemann-Pick)病A型，B型和C型，戈谢(Gaucher)病II型，法布里(Fabry)病(注意可用酶替代物)，神经节苷脂沉积病(gangliosidoses)包括泰-萨克斯(Tay-Sachs)病，山多夫氏(Sandhoff)病，克拉伯(Krabbe)病，异染性脑白质营养不良(Metachromaticleukodystrophy)，和胆固醇酯沉积病(沃尔曼氏)Wolman’s病。尼曼-皮克病是一种遗传性常染色体隐性脂质贮积病，其特征在于鞘磷脂在细胞，例如巨噬细胞和神经元的溶酶体中的过量积累，其损害正常的细胞功能。尼曼-皮克A型源自酸性鞘磷脂酶的缺乏，并且是一种快速进行性神经退行性疾病。它通常导致在两至三岁内导致死亡。尼曼-皮克B型是一种更温和的形式，导致肝脏和脾脏的肿大，以及呼吸窘迫伴随着成年期初期的死亡。与酸性鞘磷脂酶(ASM)缺乏相关的这两种形式的尼曼-皮克病，在本文中统称为尼曼-皮克病或ASM缺乏(ASMD)。其他类型的尼曼-皮克病，例如C型，不涉及ASM基因中的突变，并且不直接归因于ASM的作用。引起A和B亚型的明显的临床异质性的生物化学和分子缺陷的性质仍然是未知的。虽然具有两种亚型的患者具有残留的ASM活性(约为正常的1-10％)，但是生化分析不能明确地区分这两种表型。此外，B型NPD的临床过程是高度可变的，并且目前不可能将疾病的严重性与残留ASM的活性水平相关联。尼曼-皮克C型是NPC1和NPC2基因突变的结果。在尼曼-皮克C型中，主要突变基因NPC1的蛋白质产物不是酶，但似乎在内涵体核内质-溶酶体系统中担任转运蛋白，其移动大的不溶水性分子通过细胞。由NPC2基因编码的蛋白质已经表现为存在于溶酶体腔中的一种小的胆固醇结合蛋白。这种转运系统的破坏导致胆固醇和糖脂在溶酶体中的积累。尼曼-皮克病以及其他脂质贮积疾病，是一种对治疗方法仍然存在巨大需求的疾病。目前在美国没有针对尼曼-皮克病的经FDA批准的治疗；并且对于该疾病的治疗受限于大多数患有A型的人死于18个月龄，而B型或C型的患者常常活过其青少期。
技术实现思路
蛋白激酶C(PKC)家族的酶负责大量细胞过程，经由信号转导级联通过酶的能力来调控蛋白质。该激酶家族的成员在结构和功能上相似，并且被归类为常规型(α，βI，βII和γ)，新型(δ，ε，η和θ)和非典型亚型(ζ和λ)。这些亚型涉及多种疾病和病理状况。本公开是部分基于PKC的之前并未认识到的在脂质贮积病如尼曼-皮克C型(NPC1)病中的作用。我们观察到，与野生型(WT)细胞相比，中间丝，波形蛋白在NPC1细胞中被低磷酸化，并且这种低磷酸化是由活性降低引起[5]。波形蛋白参与多种细胞过程，包括囊泡跨膜转运[6，7]，信号转导[8，9]和细胞迁移[10]。与NPC1细胞相似，缺乏波形蛋白的细胞不能将LDL衍生的胆固醇从它们的溶酶体转运到内质网用于酯化[11]。NPC1细胞中减少的波形蛋白的磷酸化缩减了可溶性波形蛋白池，可能破坏波形蛋白循环，这种波形蛋白循环正是转运发生所必需的[12，13]。波形蛋白已显示可以被几种蛋白质磷酸化，包括PKCs[14]，特别是α[15]，ε[10]和βII[16，17]亚型。因此，本公开提供了通过施用PKC活化剂来治疗罹患脂质贮积病例如尼曼-皮克病的受试人的方法。根据某些实施方式，本公开提供了包括向患有脂质贮积病的受试者施用药物有效量的PKC活化剂的方法。根据某些实施方式，本公开提供了包括给予患有尼曼-皮克C型疾病的受试者药物有效量的苔藓抑素1的方法。在阅读以下实施方式的描述之后，本公开的特征和优点对于本领域技术人员将是显而易见的。附图说明本专利或申请文件包含至少一幅彩色附图。带有彩色附图的该专利或带有彩色附图的专利申请公开文本的副本可在向官方请求并支付必要的费用后提供。本公开的一些具体实施方式可以在一定程度上通过参考以下的具体实施方式和附图说明来理解。图1A和1B显示了瞬时PKC表达对人NPC1细胞中的波形蛋白增溶影响的蛋白质印迹。蛋白质印迹分析代表了用PKCε、β或α转染的人NPC13123(A)和人nullNPClo(B)细胞中可溶性和不溶性波形蛋白的水平，表明相对于未转染的细胞(-)而言，三种亚型在增加可溶性波形蛋白和Rab9水平的同时减少了不溶性波形蛋白。溶解的波形蛋白的水平近似于在表达Rab9(Rab9)的细胞中观察到的水平。所示的印迹代表了至少3次的独立实验。图2显示了从NPC1细胞裂解物的不溶性波形蛋白成分中释放的Rab9的蛋白质印迹。将来自NPC1细胞裂解物的不溶性波形蛋白成分与多种PKC亚型一起孵育。所测试的所有亚型可以在一定程度上影响Rab9从不溶性波形蛋白成分的释放，其中PKCα是最有效的，PKCγ是最无效的。所示的印迹代表了至少3次的独立实验。图3显示了PKC和脂肪酸对M12NPC1CHO细胞中胆固醇酯化的影响的图。M12细胞用50μg/ml脂肪酸处理2天，然后用指定的PKC亚型转染。转染后，通过酯化测定评价胆固醇转运。游离脂肪酸和PKCs都减轻了NPC1细胞的胆固醇转运缺陷并且它们的效果似乎是加和的。图4显示了瞬时PKC表达对NPC1表型的影响的图像。M12细胞用PKC亚型或Rab9转染48小时，然后通过菲律宾(Filipin)染色分析胆固醇贮积。与周围的未转染的细胞相比，转染阳性的细胞对GFP染色呈阳性(左图)，并显示减少的菲律宾染色(轮廓中的细胞，右图)，证实PKC在从NPC1内体中调动存储的胆固醇的作用。标尺，20μm。图5显示了脂肪酸对波形蛋白增溶和NPC1表型的影响。(A)人NPC13123细胞用50μg/ml的亚油酸或油酸处理24小时，然后通过蛋白质印迹分析可溶性波形蛋白的水平。通过菲律宾染色分析NPC1CHO(B)或人3123(C)细胞中的胆固醇贮积。每个样品荧光强度被量化为至少150个细胞。条形图表示的平均值±SEM来自3个独立实验。*和***表示已处理的和未处理的细胞之间统计学中的显著差异，通过Student’st-test测定后分别为P<0.05和P<0.0001。图6显示了PKC活化对NPC1表型的影响。NPC1CHO细胞(B至F)用100μMDCP-LA(C)，10μMDHA(D)或100μM二氮嗪(E)来处理，并且胆固醇贮积通过Filipin荧光性来定量。WTCHO细胞示于(A)中。每个样品荧光强度被量化为至少150个细胞。条形图表示的平均值±SEM来自3个独立实验。*，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗尼曼‑皮克C型病的药物有效量的苔藓抑素1。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.18 US 61/981,473;2014.05.01 US 61/987,3601.一种用于治疗尼曼-皮克C型病的药物有效量的苔藓抑素1。2.一种用于治疗尼曼-皮克C型病或脂质贮积病的药物有效量的苔藓抑素1-20、苔藓抑素的类...

【专利技术属性】
技术研发人员：扬尼斯·A·约安努，劳伦斯·阿尔特斯蒂尔，大卫·R·克罗克福德，萨萨帕纳·贡萨穆特，
申请(专利权)人：亲神经剂生物科学有限公司，西奈山伊坎医学院，
类型：发明
国别省市：美国,US