细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法技术

本发明专利技术提供细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白，所述细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。本发明专利技术还提供了一种可溶性表达方法，实现了TSP6重组蛋白的高效可溶性表达：表达的重组蛋白质大部分为可溶性蛋白，占大肠杆菌可溶性总蛋白70%；然后用HisPur Cobalt（Clontech）亲和层析纯化重组细粒棘球绦虫TSP6，得到TSP6纯化蛋白。在使用洗脱缓冲液（300mM/L咪唑，20mM/L Tris，500mM/L NaCl，pH8.0）时可得到一种高纯度的细粒棘球绦虫TSP6。将该纯化蛋白作为包被抗原，可制备得到一种用于检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法。
技术介绍
跨膜蛋白6（TSP6）是细粒棘球绦虫成虫cDNA文库中的一个抗原基因。TSP6是一种重要的细粒棘球绦虫抗原，可能参与了细粒棘球绦虫信号传导途径，对于细胞的生长、分化具有重要的生理意义。TSP6同膜联蛋白家族(Annexinfamily)成员可能是同源基因，属于Annexin家族。研究该抗原的生理功能，不仅可以了解其对于细粒棘球蚴的寄生、生长、发育等生命活动中的重要意义，还可以为治疗和预防包虫病提供新的药物靶点和候选疫苗。基于以上研究背景，本专利技术构建了编码细粒棘球绦虫TSP6基因的原核表达质粒，转化入大肠杆菌表达系统，诱导其可溶性表达，并进行蛋白纯化，得到了该蛋白，为其今后的免疫原性、生化特性分析以及功能研究奠定了基础。
技术实现思路
本专利技术通过基因工程技术，提供了一种细粒棘球绦虫TSP6的原核表达载体pET30a-TSP6，利用该载体转化大肠杆菌（BL21-DE3）实现了TSP6的高水平可溶性表达，并提供了一种亲和本文档来自技高网...

【技术保护点】
细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白，其特征在于：所述细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。

【技术特征摘要】
1.细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白，其特征在于：所述细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白的氨基酸序列为序列表SEQIDNo.2。2.根据权利要求1所述的细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白，其特征在于：所述细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白编码的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.1中第31位-696位碱基。3.权利要求1或2所述的细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白的可溶性表达，其特征在于：步骤如下：（1）目的基因TSP6的扩增；（2）构建TSP6表达质粒：将步骤（1）制备的目的基因TSP6酶切并纯化后，构建入pET-30a相应的多克隆酶切位点，构建质粒pET30a-TSP6；（3）将步骤（2）制备的质粒pET30a-TSP6转化入E.ColiBL21(DE3)感受态细胞中，将E.ColiBL21(DE3)-pET30a-TSP6进行扩大培养，然后加入0.1mmol/L的IPTG于20℃，诱导振荡培养6小时；离心收集细菌，超声，收集上清液。4.根据权利要求3所述的可溶性表达，其特征在于：步骤（3）中所述扩大培养是将E.ColiBL21(DE3)-pET30a-TSP6先接种至LB固体培养基上，37℃孵育过夜；然后挑取培养基上单克隆至LB液体培养基中，于37℃，200r/min振荡培养2小时，使OD值至0.6；最后取菌液接种至LB液体培养基中，于37℃，200r/min振荡培养，使OD值至0.6。5.权利要求1或2所述的细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白的纯化方法，其特征在于：是使用HisTALONTMGravityColumns预装柱纯化细粒棘球绦虫TSP6重组蛋白，然后使用洗脱缓冲液进行洗脱；所述洗脱缓冲液的配方为：300mM/L咪唑，20mM/LTris，500mM/LNaCl，pH8.0。6.根据权利要求5所述的纯化方法，其特征在于：步骤如下：（1）加入20mMMES缓冲液于HisTALONTMGravityColumns预装柱中冲洗介质；（2）加入超纯...

【专利技术属性】
技术研发人员：景涛，辛奇，吕薇，袁苗苗，李焕平，高海军，宋晓霞，孙旭东，鲁俊，那斌，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62