一种少动鞘氨醇单胞菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术从福建省南平市顺昌县的黄龙蜜桔叶片中分离并筛选得到能够高产胞外多糖的菌株，该菌株为少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT‑10272(Sphingomonas paucimobilis)，并揭露了利用该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT‑10272制备胞外多糖的方法。本发明专利技术的优点在于：提供一种新的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT‑10272(Sphingomonas paucimobilis)，且利用该菌株制备获得胞外多糖的产量较高，从而增加了胞外多糖生产菌株的来源；且采用本发明专利技术少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT‑10272(Sphingomonas paucimobilis)制备胞外多糖的过程简单、易于操作。

【技术实现步骤摘要】
一种少动鞘氨醇单胞菌菌株及其应用
本专利技术涉及一种微生物及其应用，具体涉及一种少动鞘氨醇单胞菌菌株及其应用。
技术介绍
多糖是以单糖为基本组成单位，按一定方式重复排列而成的聚合物。用于食品加工的多糖俗称为胶质，即胞外多糖。胞外多糖可来源于动物、植物、微生物，海藻类胞外多糖主要包括琼脂和卡拉胶以及海藻酸及其衍生物。植物类胞外多糖包括阿拉伯胶、纤维素胶及其衍生物、魔芋粉等。微生物胞外多糖主要包括黄原胶、结冷胶、卡拉胶等，具有粘着性、稳定性、乳化性和凝胶性等特点，在食品、医药领域等方面都有着广泛的应用，尤其是近些年来，随着分子生物学技术的引入，多糖在抗凝血、延缓衰老、抗癌防癌、疾病免疫等方面的功能也逐渐被揭示出来。按其用途，胞外多糖又可被分类为增稠剂和胶凝剂，可作为食品添加剂、凝结剂、保鲜剂等。已报道的可产胞外多糖的微生物菌属有鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、农杆菌属(Agrobacterium)、黄单胞菌属(Xanthomonas)等。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种少动鞘氨醇单胞菌菌株，该菌株为少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272(Sphingomonaspaucimobilis)，于2016年01月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNO.11997，并揭露了利用该菌株制备胞外多糖。本专利技术是通过以下技术方案解决上述技术问题的：本申请人从福建省南平市顺昌县的黄龙蜜桔叶片中分离并筛选得到能够高产胞外多糖的菌株，通过对该菌株进行生理生化特性测定和脂肪酸Sherlock-MIDI系统分析，最终鉴定其为少动鞘氨醇单胞菌的一个菌株。进一步地，利用该菌株制备胞外多糖，其制备方法的具体步骤为：(1)权利要求1中所述的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272的活化：用接种环将权利要求1中所述的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272划线于NA平板上，并于恒温培养箱中培养48h，且培养温度为30℃；(2)制备种子液：将步骤(1)所获得的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272的单菌落接种于种子培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养16h，温度30℃，转速170rpm·min-1；(3)制备发酵液：按体积百分比为2％的接种量将步骤(2)所获得的种子液转入已消毒灭菌的发酵培养基中发酵培养72h，温度30℃，转速190rpm·min-1，即得发酵液；(4)胞外多糖的提取：将步骤(3)所得的发酵液进行离心分离(室温下，转速6000rpm·min-1离心10min)，收集上清液，向上清液中加入冰乙醇，且冰乙醇与上清液的体积比为3：1，之后于4℃下静置过夜沉降胞外多糖；接着将静置后的溶液进行离心分离(室温下，转速6000rpm·min-1离心10min)，收集沉淀物；采用无水乙醇洗涤沉淀物3遍，然后氮气吹干，最后粉碎即得所述胞外多糖产品。进一步地，所述NA平板的组分为：牛肉膏3g·L-1、蛋白胨5g·L-1、葡萄糖10g·L-1、酵母膏1g·L-1、琼脂粉17g·L-1、pH7.2。进一步地，所述种子培养基的组分为：蔗糖20g·L-1、蛋白胨5g·L-1、酵母膏5g·L-1、pH7.0。进一步地，所述发酵培养基的组分为：葡萄糖30g·L-1、蛋白胨3g·L-1、酵母膏2g·L-1、KH2PO41g·L-1、MgSO40.1g·L-1、微量元素盐溶液1mL·L-1、pH7.0；其中，微量元素盐溶液的组分为：MnCl2·4H2O1.8g·L-1、FeSO4·7H2O2.4g·L-1、H3BO30.283g·L-1、CuCl20.0027g·L-1、CoCl2·6H2O0.0074g·L-1。本专利技术的有益效果在于：提供一种新的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272(Sphingomonaspaucimobilis)，并利用该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272制备胞外多糖，且制备获得胞外多糖的产量较高，即该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272能够高产胞外多糖，从而增加了胞外多糖生产菌株的来源；且采用本专利技术少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272(Sphingomonaspaucimobilis)制备胞外多糖的过程简单、易于操作。【附图说明】下面参照附图结合实施例对本技术作进一步的描述。图1是本专利技术中菌株FJAT-10272的脂肪酸图谱。【具体实施方式】本专利技术一种少动鞘氨醇单胞菌菌株即少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272(Sphingomonaspaucimobilis)是从福建省南平市顺昌县的黄龙蜜桔叶片中分离并筛选得到能够高产胞外多糖的菌株，并揭露了利用该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272制备胞外多糖的方法。为了能够清楚的阐述本专利技术，本申请人给出了如下几个具体实施例。实施例1、该菌株FJAT-10272的分离：(1)分别称取福建省南平市顺昌县的黄龙病蜜桔叶片5g，并将叶片用自来水冲洗干净，吸干叶片表面的水，之后在75％酒精里浸泡30s，接着用10％次氯酸钠浸泡5min，再用无菌水漂洗叶片3次；(2)为了检验表面灭菌的效果，用灭过菌的镊子夹着经步骤(1)处理后的叶片，并使叶片表面与NA平板接触2min，然后把NA平板放在30℃下培养2d，若发现NA平板上没有菌落出现，证明该叶片表面灭菌彻底，能够作为后续操作使用，否则舍弃不能使用。(3)取经步骤(2)检验后灭菌彻底的叶片，在无菌操作下，将叶片剪碎至研钵里并加入45mL无菌水，充分研磨匀浆制成10-1样品原液，静置30min；之后依次将样品原液进行梯度稀释，选用稀释度为10-2，10-3的稀释液；(4)取200μL步骤(3)选用的稀释液并分别加到NA平板上，涂布至平板干燥，试验重复3次；将涂布后的NA平板置于28℃的恒温培养箱培养，培养24h后观察NA平板上长出的菌落的形态，挑取表面致密、颜色为金黄色的单菌落，；并将所挑取的单菌落接种于种子液培养基中，30℃下培养16h后得种子液；将所得种子液接入发酵培养基中进行发酵培养中，发酵培养72h，温度30℃；发酵所得发酵液进行离心分离(室温下，转速6000rpm·min-1离心10min)，收集上清液，向上清液中加入冰乙醇，且冰乙醇与上清液的体积比为3：1，之后于4℃下静置过夜沉降胞外多糖；接着将静置后的溶液进行离心分离(室温下，转速6000rpm·min-1离心10min)，收集沉淀物；采用无水乙醇洗涤沉淀物3遍，然后氮气吹干，最后粉碎即得胞外多糖产品，称干重；比较不同菌株的胞外多糖产品产量，筛选出胞外多糖产品产量最高的菌株，并将该菌株命名为菌株FJAT-10272。实施例2、该菌株FJAT-10272的鉴定(1)生理生化特性鉴定：将筛选获得的菌株FJAT-10272进行生理生化特性的测定，得到该菌株的主要形态学特征如下：菌落较小、圆形、黄色、表面光滑且湿润、微隆、边缘整齐、不透明、具有迁移性。(2)Sherlock-MIDI系统鉴定：采用美国MIDI公司生产的微生物自动鉴定系统(SherlockMicrobialIdentificationSystem)对菌株FJAT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种少动鞘氨醇单胞菌菌株，其特征在于：所述菌株为少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT‑10272(Sphingomonas paucimobilis)，于2016年01月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.11997。

【技术特征摘要】
1.一种少动鞘氨醇单胞菌菌株，其特征在于：所述菌株为少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272(Sphingomonaspaucimobilis)，于2016年01月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.11997。2.一种胞外多糖的制备方法，其特征在于：该制备方法具体包括如下步骤：(1)权利要求1中所述的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272的活化：用接种环将权利要求1中所述的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272划线于NA平板上，并于恒温培养箱中培养48h，且培养温度为30℃；(2)制备种子液：将步骤(1)所获得的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-10272的单菌落接种于种子培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养16h，温度30℃，转速170rpm·min-1；(3)制备发酵液：按体积百分比为2％的接种量将步骤(2)所获得的种子液转入已消毒灭菌的发酵培养基中发酵培养72h，温度30℃，转速190rpm·min-1，即得发酵液；(4)胞外多糖的提取：将步骤(3)所得的发酵液进行离心分离，收集上清液，向上清液中加入冰乙醇，且冰乙醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱育菁，郑梅霞，刘波，陈峥，潘志针，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35