山奈酚在制备抗肺癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及山奈酚在制备抗肺癌药物中的应用。本发明专利技术所述应用中的山奈酚与SET7/9甲基转移酶具有较好的亲和力，在体外对肺癌细胞有很强的生长抑制作用。

Kaempferol in the preparation of anti cancer drugs in the application

The present invention relates to the application of kaempferol in preparing anti lung cancer drug. The application of the invention of kaempferol and SET7/9 methyltransferase has good affinity in vitro on lung cancer cells have a strong inhibitory effect on the growth of.

【技术实现步骤摘要】
山奈酚在制备抗肺癌药物中的应用
：本专利技术涉及含有杂环化合物的医药配制品，具体涉及来自姜科植物的黄酮醇类化合物的抗瘤药物制剂。
技术介绍
：肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症，是威胁人类生命和健康最大的恶性肿瘤之一，并在相当长的一段时间内将仍然是导致人类因癌症死亡的首要疾病。全球肺癌的发病率和死亡率仍然居高不下，并呈继续增长的趋势，尤其在中国等经济发展中国家。在我国，随着工业化速度加快、环境污染加重、人口老龄化加剧，肺癌的癌症负担日益加重，迫切需要开发更有效的治疗方法和药物。目前，肺癌的控制已成为全世界广泛关注的问题，手术、放疗和化疗是常见的西医治疗方法，目前中药治疗也日益受到重视。山奈酚(Kaempferol)主要来源于姜科植物山柰(KaempferiagalangalL)的根茎，广泛存在于各种水果、蔬菜及饮料中。山奈酚属于黄酮醇类化合物，其化学名称为3,5,7-Trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one，分子量为286.23，微溶于水，溶于热乙醇，乙醚和碱，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等多种功效。但是，目前尚未见山奈酚具有抗肺癌作用的报道。
技术实现思路
：本专利技术要解决的技术问题是提供山奈酚的新用途，即在制药中的新应用。上述在制药中的新应用即为，山奈酚在制备抗肺癌药物中的应用。上述应用中，所述的药物由吴茱萸碱和医学上可接受的辅料组成。上述应用中，所述的药物为片剂或注射剂。本专利技术所述应用中的山奈酚与SET7/9甲基转移酶具有较好的亲和力，在体外对肺癌细胞有很强的生长抑制作用。附图说明：图1为肺癌细胞活力与山奈酚浓度关系的曲线图。图2为不同浓度的山奈酚与SET7/9分子对接的效果图。图3为山奈酚与SET7/9进行热转移实验的原理示意图，其中，A图中左边为蛋白质免疫印迹电泳图，右边为统计曲线图；B图中左边为蛋白质免疫印迹电泳图，右边为统计曲线图。图4为不同浓度的山奈酚与SET7/9共定位情况的显微照片。具体实施方式：实验例1：山奈酚对体外肺癌细胞的抑制作用取对数生长的肿瘤细胞，以3000/孔接种于96孔培养板中，培养过夜，细胞生长状态良好后，弃去原有的培养基，然后按照设计的山奈酚浓度作用于A549细胞5天后停止培养；然后加入0.5mg/ml的MTT溶液，处理4小时后，弃上清，最后加入150μLDMSO震荡混匀，置于酶标仪中年测定其吸光度值(测定波长为570nm)。结果如图1所示，山奈酚可明显抑制肺癌细胞A549的生长。实验例2：分子对接技术分析山奈酚与SET7/9结合能力情况为了评估山奈酚与SET7/9作用亲和力。蛋白-配体的结合能量是由Autodock4.2版进行对接。山奈酚配体的3D结构(PUBCHEMCID:5280863)是通过OpenBabelGUI软件转换为pdbqt格式。对于对接研究，蛋白靶标(NCBIproteinID:XP_016864150.1)的3D晶体结构被分配于蛋白序列比对。预期的蛋白配体复合物被最优化以及根据经验打分函数ScreenScore排名，从而评估配体-受体复合物的结合自由能以及Ki值。结果如图2所示，山奈酚-SET7/9对接成功，山奈酚与SET7/9有很好的结合能力，亲和性很好。实验例3：细胞热转移实验分析山奈酚与SET7/9结合能力情况不同浓度山奈酚处理A549细胞后，收集细胞，PBS清洗细胞，加入一定体积含蛋白酶抑制剂PMSF的PBS。用液氮反复冻融细胞团块，然后置于离心机中4℃，20000g离心20分钟，取上清，分成两份，一份用山奈酚处理，一份用作DMSO对照。室温30分钟孵育，每份取出6个10μL溶液，在ABI常规PCR仪按照温度梯度44℃、46℃、48℃、50℃、52℃、54℃加热6分钟，然后在室温下平衡3分钟。之后置于离心机中4℃，20000g离心20分钟，取上清。其中上清中包含剩下的可溶蛋白，加入上样缓冲液，用westernblot检测分析。另一个以浓度梯度作曲线，以DMSO，50，100，200，400，600，800μM山奈酚与A549细胞裂解液于上同样的孵育过程以及处理方法。结果如图3所示，山奈酚组灰度值下降比DMSO组缓慢，具有统计学差异，说明山奈酚与SET7/9有很好的结合能力。实验例4：激光共聚焦显微技术分析山奈酚与SET7/9结合能力情况取对数生长的肿瘤细胞，种于共聚焦小皿中，于CO2培养箱中孵育6小时。用PBS清洗细胞1-2次，加预冷甲醇，固定细胞30分钟。弃去甲醇，用PBS清洗细胞3次，加0.5％Triton-100处理细胞30分钟。弃去0.5％Triton-100，用PBS清洗细胞3次，加2％BSA封闭1小时。弃去封闭液，用PBS清洗细胞3次，加一抗于4℃过夜。回收一抗，用PBS清洗细胞3次，加二抗，于室温孵育1小时。回收二抗，用PBS清洗细胞3次，于488nm激发光，发射光515–535nm，直接捕获图像。用徕卡TCSSP8共聚焦显微镜进行图像的捕获和分析。所有样本的所有图像在相同的参数下采集。结果如图4所示，随着山奈酚的浓度上升，与SET7/9结合能力逐渐增强。实验例5：药物制剂的制备例例1(片剂)取山奈酚10g和β-环糊精10g加入研钵，研磨搅拌20min，等量递加法加入处方量的羧甲基淀粉钠与淀粉，混合均匀，加入质量分数为10％的淀粉浆适量制软材，2200μm筛制粒，60℃干燥，控制干颗粒水的质量分数在1％～2％，停止干燥，2200μm筛整粒，加入干颗粒的滑石粉质量分数为1％为润滑剂，混合均匀，调节压片机，压制片重为200mg环糊精山奈酚片剂，每片含山奈酚50mg。例2(亚微乳注射剂)称取山奈酚30mg加入5g注射用大豆油中，加热搅拌使溶解制得油相；将2g磷脂经高速剪切分散于20ml注射用水中，加1.2g甘油制得水相。将油相和水相预热至60℃，将油相加入水相中，高速剪切得初乳。高压均质，一定压力下均质数次，调节pH至6.5，补加注射用水至100ml，以0.22μm微孔滤膜挤出过滤，灌装熔封，100℃流通蒸汽灭菌30min，即得。本文档来自技高网...

【技术保护点】
山奈酚在制备抗肺癌药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.山奈酚在制备抗肺癌药物中的应用。2.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘中秋，卢琳琳，何书贵，姬利延，冯潜，王莹，戚笑笑，吴鹏，朱丽君，
申请(专利权)人：广州中医药大学，
类型：发明
国别省市：广东,44