一种多甲氧基黄酮在制备治疗黑色素瘤的药物上的应用制造技术

本发明专利技术涉及多甲氧基黄酮治疗黑色素瘤。该发明专利技术的有效成分包括陈皮素、川陈皮素、甜橙素、5‑羟基‑3,6,7,3',4'‑五多甲氧基黄酮、5‑羟基‑3,6,7,8,3',4'‑六甲氧基黄酮、5‑羟基‑6,7,4'‑三多甲氧基黄酮中的一种或多种。本发明专利技术所述的多甲氧基黄酮作用48小时后，人黑色素瘤细胞系A2058和A375细胞的存活率分别为42％和26％；和对照组相比，本发明专利技术所述的多甲氧基黄酮对接种人黑色素瘤细胞系A375细胞的C57bl/6小鼠体内肿瘤生长的抑制作用提高了2.75倍。

【技术实现步骤摘要】
一种多甲氧基黄酮在制备治疗黑色素瘤的药物上的应用
本专利技术涉及一种多甲氧基黄酮在制备治疗黑色素瘤的药物上的应用。
技术介绍
黑色素瘤是皮肤、粘膜和眼脉络膜等部位的黑色素细胞发生癌变后形成的一种恶性肿瘤，是皮肤肿瘤中恶性程度最高，容易发生远处转移的肿瘤。黑色素瘤的原发部位多为足底、足趾、手指末端和甲下等。对于欧美等白种人，形成黑色素瘤的主要因素是当皮肤受到紫外线照射后，导致的DNA突变所形成的。而对于亚洲和非洲地区的肢端黑色素瘤，其病因目前尚不明确。对于黑色素瘤的治疗效果，与黑色素瘤所处时期有关，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期Ⅳ期黑色素瘤患者的5年生存率分别为94％、44％、38％、4.6％。早期的黑色素瘤患者，在活检确诊后，一般通过原发灶扩大切除手术进行治疗，中后期患者，在手术切除后，还需要进行放化疗治疗。由于我国患者黑色素瘤的溃疡比例高，影响到手术切除的难度。所以，开发新的黑色素瘤治疗方案，提高黑色素瘤的治疗效果，显得十分迫切。多甲氧基黄酮是一类连接了4个或4个以上甲氧基的黄酮类化合物，在植物中广泛存在，尤其以芸香科柑橘属植物中含量最为丰富；通过超临界反复硅胶柱色谱法、CO2超临界萃取法、超声波辅助法、离子交换法、高速逆流色谱法等方法提取分离。由于多甲氧基黄酮类化合物具有抑制癌症细胞生长、抗发炎、抗氧化、预防心脑血管疾病、抑制病原菌生长等生物活性，受到广泛的关注。
技术实现思路
一种适用于黑色素瘤治疗的药物。该药物为多甲氧基黄酮在制备治疗黑色素瘤的药物上的应用。本专利技术所述的多甲氧基黄酮的使用浓度为0.1μmol/L-1000μmol/L，使用时按需要浓度，溶解于质量浓度为2％的DMSO中。本专利技术所述的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮(英文名为：5-hydroxy-3,6,7,8,3′,4′-hexamethoxyflavone)对人黑色素瘤细胞系A2058和A375细胞生长抑制作用的使用方法为：在每升DMEM培养基中加入100μl含31.25-500μmol5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的2％DMSO溶液；分别培养24小时和48小时后，收集细胞，测定各处理人黑色素瘤细胞系A2058和A375细胞的吸光值，计算半致死率。本专利技术所述的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮对接种人黑色素瘤细胞系A375细胞7天后的C57bl/6小鼠体内肿瘤生长抑制作用的使用方法为：将C57bl/6小鼠分为2组，每组8只。按2天灌喂一次的时间间隔，DMSO对照组灌喂0.4ml质量浓度为2％的DMSO溶液、5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮处理组灌喂0.4ml含0.5μmol5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的DMSO溶液，实验小鼠在接种人黑色素瘤细胞系A375细胞28天后处死，检测肿瘤生长情况。本专利技术具有的有益效果：本专利技术所述的多甲氧基黄酮在植物中广泛存在，可以通过多种方法分离提取，也能够从分离提取的试剂公司直接购买，原料来源广泛。采用多甲氧基黄酮治疗黑色素瘤，能够抑制人黑色素瘤细胞的生长，本专利技术所述的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮对接种人黑色素瘤细胞系A375的C57bl/6小鼠体内肿瘤生长的抑制作用提高了2.75倍。本专利技术可指导新的黑色素瘤治疗方法的开发，为未来对5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的开发和应用提供了新的方向和策略。附图说明图1为5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮抑制人黑色素瘤细胞系A2058和A375细胞生长的影响。图2为5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮抑制人黑色素瘤细胞系A375细胞凋亡的影响。图3为5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮抑制人黑色素瘤细胞系A375细胞诱导C57bl/6小鼠肿瘤生长的影响。具体实施方式实施例1：5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮对人黑色素瘤细胞系A2058和A375细胞的生长和细胞周期分布的影响所培养的细胞为人黑色素瘤细胞系A2058和A375细胞，培养基为DMEM培养基，含有100U/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素、10％胎牛血清，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。在每升DMEM培养基中加入100μl质量浓度为2％的DMSO溶液；在每升DMEM培养基中加入100μl含3.125μmol的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的2％DMSO溶液；在每升DMEM培养基中加入100μl含6.25μmol的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的2％DMSO溶液；在每升DMEM培养基中加入100μl含12.5μmol的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的2％DMSO溶液；在每升DMEM培养基中加入100μl含25.0μmol的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的2％DMSO溶液；在每升DMEM培养基中加入100μl含50.0μmol的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的2％DMSO溶液，培养48h后，收集细胞，测定各处理人黑色素瘤细胞系A2058和A375细胞的吸光值，计算半致死率(图1)。为了进一步弄清楚5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮抑制人黑色素瘤细胞生长的作用机理，我们分别在一升体积的不同人黑色素瘤细胞系A375细胞培养基中加入100μl2％DMSO溶液；加入100μl含25μmol的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的2％DMSO溶液；加入100μl含50μmol的5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的2％DMSO溶液，培养细胞48h后，收集细胞至离心管中，用4℃预冷的PBS洗细胞后，加入-20℃预冷的70％乙醇并混匀，4℃放置过夜固定细胞后，1000rpm离心弃掉乙醇，加入适量的PBS溶液，调整细胞密度为(1-2)×106个细胞/ml，加入终浓度为50μg/ml的PI和终浓度为50g/ml无DNA酶污染的RNA酶，室温避光染色30min后，流式细胞仪检测人黑色素瘤细胞系A375细胞的细胞周期分布情况，所有实验结果均重复3次，取平均值。实验结果表明，和只加入2％DMSO相比，细胞培养基中加入25μmol/L或50μmol/L5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮后，能引起人黑色素瘤细胞系A375细胞在亚G1期的积累，处于亚G1期时相的细胞占所有培养细胞的比例由对照组的1.4％提高到9.4％和25％(图2)。结果表明5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮能诱导人黑色素瘤细胞发生细胞凋亡。实施例2：5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮对人黑色素瘤细胞系A375细胞诱导C57bl/6小鼠肿瘤生长的影响将C57bl/6小鼠分为2组，每组8只。按2d灌喂一次的时间间隔，分别灌喂0.4ml质量浓度为2％的DMSO溶液、0.4ml含0.5μmol5-羟基-3,6,7,8,3',4'-六甲氧基黄酮的DMSO溶液，接种人黑色素瘤细胞系A375细胞28天后，处死小鼠，检测各组C57bl/6小鼠体内肿瘤组织的大小(图3)。实验结果表明，5-羟基-3,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多甲氧基黄酮在制备治疗黑色素瘤的药物上的应用。

【技术特征摘要】
1.一种多甲氧基黄酮在制备治疗黑色素瘤的药物上的应用。2.权利要求1所述的应用，其特征在于，多甲氧基黄酮包括陈皮素、川陈皮素、甜橙素、5-羟基-3,6,7,3',4'-五多甲氧基黄酮、5-羟基-3,6,7,8,3′,4′-六甲基黄酮、5-羟基-6,7,4'-三多甲氧基黄酮中的一种、两种或多种。3.权利要求1所述的应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李士明，杨谷良，龙涛，
申请(专利权)人：黄冈师范学院，
类型：发明
国别省市：湖北,42