一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基及其制备方法技术

本发明专利技术属于微生物培养技术领域，提供了一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基，由包括以下原料组分制备而得：马铃薯、藜麦、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。本发明专利技术同时提供了该培养基的制备方法。从试验结果得知，本发明专利技术培养基分离到的沉香内生真菌数量明显增多，在液体摇菌培养中沉香内生真菌在短时间内能达到最大生长量，从而大大缩短了摇菌时间。而且这种培养基营养成分全部来自天然食材食材（马铃薯、藜麦）加葡萄糖，没有任何其他添加剂，对做为入口治病药材的沉香结香菌的培养尤为重要，绿色环保，且制备简便经济实用。

Culture medium for isolation and rapid propagation of fragrant incense endophytic fungi and preparation method thereof

The invention belongs to the technical field of microbial culture, provides a sweet aloes endophytic fungi separation and rapid propagation of culture medium, from the following raw materials were prepared: potato, quinoa, glucose, agar and distilled water. The present invention also provides the preparation method of the culture medium. Learn from the test results, the cultivation of a significant increase in the number of base isolated agilawood endophytic fungi in liquid shake bacteria in a short time to reach the maximum amount of growth in cultured aloes endophytic fungi, thus greatly reducing the time of shaking bacteria. And this kind of medium nutrients from all natural ingredients ingredients (potato and quinoa) with glucose, without any other additives, is particularly important for training as a treatment medicine entrance aloes mushroom green, simple and convenient preparation of economical and practical.

【技术实现步骤摘要】
一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基及其制备方法
本专利技术属于微生物培养
，具体涉及一种用于分离沉香结香内生真菌并实现快速繁殖的培养基，是一种适用于沉香结香菌产业化生产的绿色环保培养基，同时涉及所述培养基的制备方法。
技术介绍
沉香为瑞香科植物沉香属的白木香树Aquilariasinensis(Lour.)Gilg含有树脂的木材。自古以来，沉香被视作一种名贵香料和中药材，在宋代已经有“一两沉香一两金”的说法，具有很高的药用价值和商业价值。沉香具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘之功效。其分布于广东、海南、广西、福建等地，喜生于低海拔的山地、丘陵以及路边阳处疏林中。近年来，由于沉香树自然繁殖率低、人为掠夺式砍伐等原因，国产沉香产量严重不足，而市场需求不断扩大，供需矛盾突出。沉香已被列入国家二级保护濒危树种。普遍观点认为自然界的白木香树中一般不会自然产生沉香树脂，只有在受物理化学的损伤或某些生物的刺激，白木香树出于自身的免疫修复机制，细胞会分泌出特殊的树脂来保护自己，与内生菌次级代谢产物一起形成了沉香，其自然积累过程需要漫长的数十年，且品质不可控。随着研究的深入，目前已有不少研究证实沉香的形成与其内生菌的感染有关，这些沉香内生菌可促进白木香树结香。我们从野生沉香树结香木材组织、健康白木组织和叶片组织中提取和分离出沉香内生真菌，为下一步研究沉香结香机理提供真菌菌群供试材料。目前已经公布的真菌培养基大多数添加的成分很多，其中添加的一些成分来自于化学合成，而沉香其中一个重要用途是做为名贵中药，这些经过化学提取加工得到的成分是否会对人体健康产生不良影响尚未可知。如中国专利(CN105331560A)公开了一种用于诱导沉香结香的内生菌液体培养基，配方为：马铃薯70％，木屑17％、麸皮5％、玉米粉4％、黄豆粉1％、蛋白胨0.5％、葡萄糖1％、磷酸二轻钾0.2％、硫酸镁0.2％、维生素0.1％。微生物生长繁殖速率跟菌种、菌龄、接种量及培养条件有关，如果培养基的营养成分能满足菌种生长的需要，则菌种很易适应，会起到缩短延滞期的作用，其生长速率会加快，进入对数生长期(生长速率达到最高的时期，菌数以几何级数增加)的时间会大大缩短。微生物的代时虽然因种而异，可是同一个种也受培养基成分的影响。在自然环境中，很多菌种的生长速率并不能以几何级数增加，而以算术级数增加，这是因为这些菌种需要某种必需的生长因子，如维生素等，这些生长因子能影响生长速率。而在自然环境中，生长因子的浓度极低，一旦被细菌繁殖用去一部分后，就会影响下一步的细菌生长率，因而造成算术级数生长现象。藜麦，原产于南美洲安第斯山区，是印加土著居民的主要传统食物，有5000-7000多年的食用和种植历史，由于其具有独特的丰富、全面的营养价值，养育了印加民族，古代印加人称之为“粮食之母”。藜麦在1980年代被美国宇航局用于宇航员的太空食品。联合国粮农组织认为藜麦是唯一一种单体植物即可基本满足人体基本营养需求的食物，正式推荐藜麦为最适宜人类的完美的全营养食品。近几年很多国家都在大力发展藜麦种植，中国的专业农业公司也与南美洲一些藜麦专业公司合作，在国内类似南美洲藜麦生长气候的区域开始了大规模种植藜。藜麦胚芽占种子的30％，且具有营养活性，藜麦的蛋白质含量高达16％-22％(牛肉20％)，品质与奶粉及肉类相当，富含多种氨基酸，其中有人体必需的全部9种必需氨基酸，比例适当且易于吸收，尤其富含植物中缺乏的赖氨酸，钙、镁、磷、钾、铁、锌、硒、锰、铜等矿物质营养含量高，富含不饱和脂肪酸、类黄酮、B族维生素和E族维生素、胆碱、甜菜碱、叶酸、α-亚麻酸、β-葡聚糖等多种有益化合物。藜麦的特性为其能够应用于微生物培养基中奠定了基础，由于藜麦营养丰富全面，能够替代传统培养基中多种常规组分满足微生物快速繁殖的需要。如中国专利(CN104718987A)公开了一种以藜麦膨化料和藜麦粉碎料为培养基，接种冬虫夏草和蛹虫草种子液进行发酵生产的方法，膨化藜麦与机械粉碎藜麦混合后进行发酵，一方面使得菌体可以快速利用膨化过程所产生的营养物质，另一方面机械粉碎藜麦相当于是固态发酵载体使发酵基质保持疏松有利菌体生长，当菌体生长旺盛时菌体产生大量胞外酶又可以进一步分解利用机械粉碎藜麦。该过程无需添加其它物质，保证发酵产品的质量高度可控。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种绿色环保、健康对人无害的、适用于沉香结香内生真菌分离和快繁的培养基，该培养基主要由天然原料马铃薯、藜麦配备其他辅料制备而成，制备简便、经济实用。具体的，本专利技术所述沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基，由包括以下重量份数比的原料组分制备而得：马铃薯100-200份、藜麦15-40份、葡萄糖15-25份、琼脂0-20份、蒸馏水700-900份。本专利技术同时提供了所述沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基的制备方法，包括以下步骤：(1)将马铃薯削皮、切片后与水混合，打浆，浆渣分离，得马铃薯汁；或将马铃薯削皮、切块后加水煮沸，浆渣分离，得马铃薯汁；(2)将藜麦用水浸泡过夜，打浆，浆渣分离，得藜麦汁；(3)将马铃薯汁和藜麦汁混合，加入葡糖糖、琼脂(制备固体培养基时加入)和蒸馏水，混匀，调节pH为5.8-6.0,121℃灭菌20min，即得。作为本专利技术沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基的制备方法的进一步说明，所述马铃薯与水的重量比为1:3-8；所述马铃薯削皮、切块后加水煮沸时间为25-35min；所述藜麦用水浸泡时间为8-24h；所述藜麦与水的重量比为1:3-8。本专利技术培养基中添加的藜麦，营养丰富全面，富含四十多种营养物质，包括多种氨基酸、矿物质、维生素及多种有益的化合物，能够全面提供沉香内生真菌生长和快速繁殖的需要。从试验结果得知，本专利技术培养基分离到的沉香内生真菌数量明显增多，在液体摇菌培养中沉香内生真菌在短时间内能达到最大生长量，从而大大缩短了摇菌时间。而且这种培养基营养成分全部来自天然食材食材(马铃薯、藜麦)加葡萄糖，没有任何其他添加剂，对做为入口治病药材的沉香结香菌的培养尤为重要，绿色环保，且制备简便经济实用。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术作进一步详细说明，本实施例仅是对本专利技术作更清楚的说明，而不是对本专利技术的限制。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均落在本专利技术的保护范围之内。实施例中的沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基，由包括以下重量份数比的原料组分制备而得：马铃薯100-200份、藜麦15-40份、葡萄糖15-25份、琼脂0-20份、蒸馏水700-900份。制备方法包括以下步骤：(1)将马铃薯削皮、切片后与水按重量比为1:3-8混合，打浆，浆渣分离，得马铃薯汁；或将马铃薯削皮、切块后加3-8倍重量的水煮沸25-35min，浆渣分离，得马铃薯汁；(2)将藜麦用3-8倍重量的水浸泡8-24h，打浆，浆渣分离，得藜麦汁；(3)将马铃薯汁和藜麦汁混合，加入葡糖糖、琼脂(制备固体培养基时加入)和蒸馏水，混匀，调节pH为5.8-6.0,121℃灭菌20min，即得。下面通过更具体实施例对本专利技术进行说明。实施例1一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基，制备方法包括以下步骤：(1)将马铃薯削皮、切片本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基，其特征在于，由包括以下重量份数比的原料组分制备而得：马铃薯100‑200份、藜麦15‑40份、葡萄糖15‑25份、琼脂0‑20份、蒸馏水700‑900份。

【技术特征摘要】
1.一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基，其特征在于，由包括以下重量份数比的原料组分制备而得：马铃薯100-200份、藜麦15-40份、葡萄糖15-25份、琼脂0-20份、蒸馏水700-900份。2.如权利要求1所述沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将马铃薯削皮、切片后与水混合，打浆，浆渣分离，得马铃薯汁；或将马铃薯削皮、切块后加水煮沸，浆渣分离，得马铃薯汁；（2）将藜麦用水浸泡过夜，打浆，浆渣分离，得藜麦汁；（3）将马铃薯汁和藜麦汁混合，加入葡糖糖、琼脂和蒸馏水，混匀，调节p...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍亭亦，
申请(专利权)人：伍亭亦，
类型：发明
国别省市：广西,45