红贝菌素的制备方法及其在制备抗真菌药物中的应用技术

本发明专利技术公开了红贝菌素的制备方法与其在制备抗真菌药物中的应用。所述红贝菌素来源于药用真菌红贝俄氏孔菌(Earliella scabrosa(Pers.)Gilb.&Ryvarden)。体外抗真菌试验结果表明，红贝菌素具有较强的抗病原真菌活性，可用于制备抗真菌药物。

Process for the preparation of shellfish and the use thereof in the preparation of antifungal agents

The present invention discloses the preparation method of red mushroom and its application in preparing antifungal medicine. The red shell bacterium from red Beieshi medicinal fungi (Earliella hole scabrosa (Pers.) Gilb.& Ryvarden). The results of in vitro antifungal test showed that the cells had strong antifungal activity and could be used for the preparation of antifungal agents.

【技术实现步骤摘要】
红贝菌素的制备方法及其在制备抗真菌药物中的应用
本专利技术涉及一种抗真菌化合物，更具体地说，本专利技术涉及红贝菌素(scabrosone)的制备方法及其在制备抗真菌药物中的应用。
技术介绍
真菌感染是由真菌引起的人和动物的感染性疾病。真菌感染性疾病根据真菌侵犯人体的部位分为4类：浅表真菌病、皮肤真菌病、皮下组织真菌病和系统性真菌病；前二者合称为浅部真菌病，后二者又称为深部真菌病。近年来，由于广谱抗生素、抗肿瘤药物、放射治疗、器官移植、激素治疗、介入治疗及多种侵入性操作的广泛应用，艾滋病和老龄化等多种因素引起的免疫力低下的人群比例逐年增加，导致真菌感染的发病率呈上升趋势，感染菌种也产生了变异，真菌耐药现象愈趋严重，真菌感染的治疗也愈加困难。因此人们迫切需要研发出新型抗真菌药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有药用价值的红贝菌素(scabrosone)的制备方法。本专利技术的另一目的是提供红贝菌素(scabrosone)在制备抗真菌药物中的应用。本专利技术为了达到上述目的采用的技术解决方案如下：本专利技术所述红贝菌素(scabrosone)是一种二萜，其结构式为其中1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20为碳原子序数编号。本专利技术提供了一种红贝菌素(scabrosone)的制备方法，该方法包含以下步骤：(1)取药用真菌红贝俄氏孔菌(Earliellascabrosa(Pers.)Gilb.&Ryvarden)子实体，用有机溶剂提取；(2)所得粗提物用硅胶柱层析粗分得洗脱物；(3)所得洗脱物用饱和亚硫酸氢钠或饱和亚硫酸氢钾处理，得饱和亚硫酸氢钠或饱和亚硫酸氢钾水层；(4)所得饱和亚硫酸氢钠或饱和亚硫酸氢钾水层用饱和碳酸钠或稀盐酸处理后用有机溶剂萃取，得萃取液；(5)萃取液减压回收溶剂后得红贝菌素(scabrosone)。其中步骤(1)所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯中的一种，或它们的混合物。其中步骤(3)所述有机溶剂选自乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿中的一种，或它们的混合物。同时，本专利技术还提供了所述红贝菌素(scabrosone)在制备抗真菌药物中的应用。本专利技术所述红贝菌素(scabrosone)用在医药上时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。可通过喷雾、口服、注射(静脉注射、肌肉注射)方式给药。为了更好地理解本专利技术的实质，下面用本专利技术式(I)所述化合物的体外抗真菌活性试验结果来说明它在制备抗真菌药物中的应用。A.材料和方法1.试剂：二甲基亚砜(DMSO)，对碘硝基四唑紫(INT)。2.培养基：麦芽提取肉汤。3.化合物：检测化合物为红贝菌素(scabrosone)。4.供试病原真菌：灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)、腐皮镰刀菌(Fusariumsolani)、赭曲霉(Aspergillusochraceus)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、须毛藓菌(Trichophytonmentagrophytes)。5.红贝菌素(scabrosone)体外抗真菌活性试验通过微量稀释法测定化合物体外对供试病原真菌的抗真菌活性，氟康唑为阳性对照。首先制作供试菌菌悬液。将供试病原真菌接种于麦芽提取肉汤培养基中，于30℃下静置培养48h，得菌悬液，用麦芽提取肉汤培养基稀释成0.5麦氏浊度接种液。然后将化合物样品用DMSO溶解并配制成起始浓度为1280μg/mL的药液，并用针头滤器滤菌。抗菌试验在无菌96微孔板中进行。先在96微孔板外围孔上加200μL无菌水，其余孔加100μL麦芽提取肉汤培养基。然后将100μL滤菌后药液加到各行的第一孔中，对药液进行倍半稀释。最后将100μL接种液加到各检测孔中以及无药对照孔中。最终药液检测浓度范围为320～0μg/mL。培养板在30℃孵育72h后，每孔加20μL的5％INT水溶液，继续孵育1h后观察。粉红色的板孔为阳性生长。最低抑菌浓度(MIC)定义为阻止颜色变为粉红色的最低药物浓度。试验重复三次。B.试验结果1.红贝菌素(scabrosone)对灰葡萄球菌、腐皮镰刀菌、赭曲霉的MIC值均为160μg/mL。2.红贝菌素(scabrosone)对白色念珠菌、须毛藓菌的MIC值均为320μg/mL。3.体外抗真菌试验结果汇总如表1所示。表1红贝菌素(scabrosone)体外抗真菌活性试验结果汇总表与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1.迄今为止，尚未有关于从红贝俄氏孔菌(Earliellascabrosa(Pers.)Gilb.&Ryvarden)子实体制备式(I)所示红贝菌素(scabrosone)的报道。2.体外抗真菌试验结果表明，红贝菌素(scabrosone)能显著抑制供试病原真菌的生长，对灰葡萄球菌、腐皮镰刀菌、赭曲霉的MIC值均为160μg/mL，对白色念珠菌、须毛藓菌的MIC值均为320μg/mL。表明红贝菌素(scabrosone)可用于制备抗真菌药物。3.本专利技术所述红贝菌素(scabrosone)的原料来源丰富，不仅可通过人工种植，也可以通过发酵生产。化合物制备工艺简单，既可通过喷雾给药，也可以通过口服和注射给药，为人类治疗真菌性感染疾病提供了一种新的候选药物。附图说明无。具体实施方式下面将结合具体实施例来详细说明本专利技术，在此本专利技术的示意性实施例以及说明用来解释本专利技术，但并不作为对本专利技术的限定。实施例1取1000g风干的红贝俄氏孔菌子实体，粉碎，用乙酸乙酯和甲醇室温下各浸泡提取三次，于50℃真空旋转回收溶剂得粗提物，粗提物进行硅胶(200-300目)柱层析，用石油醚-乙酸乙酯梯度(100∶0，80∶20，60∶40，40∶60，20∶80，0∶100，v/v)洗脱，石油醚-乙酸乙酯(80∶20)洗脱组分回收溶剂后用石油醚溶解，在搅拌下加入热的饱和亚硫酸氢钠水溶液，分液，水层在搅拌下慢慢加入饱和碳酸钠水溶液至无气泡产生，然后用乙醚萃取三次，乙醚萃取液回收溶剂后得红贝菌素(scabrosone)纯品135mg。该方法分离出来的红贝菌素(scabrosone)为无色油状液体，分子量为334。易溶于乙醚、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等有机溶剂。有关核磁共振波谱数据见表2。表2红贝菌素(scabrosone)的核磁共振波谱数据(1HNMR，13CNMR，CDCl3，δinppm，JinHz)实施例2软膏剂：红贝菌素(scabrosone)100mg羊毛脂适量凡士林适量实施例3实施例4胶囊剂：按实施例1制得化合物红贝菌素(scabrosone)，按常规胶囊制剂方法制得胶囊。上述实施例仅例示性说明本专利技术的原理及其功效，而非用于限制本专利技术。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本专利技术的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属
中具有通常知识者在未脱离本专利技术所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本专利技术的权利要求所涵盖。本文档来自技高网...

【技术保护点】
红贝菌素(scabrosone)的制备方法，其特征在于该方法包含以下步骤：(1)取药用真菌红贝俄氏孔菌(Earliella scabrosa(Pers.)Gilb.&Ryvarden)子实体，用有机溶剂提取；(2)所得粗提物用硅胶柱层析粗分得洗脱物；(3)所得洗脱物用饱和亚硫酸氢钠或饱和亚硫酸氢钾处理，得饱和亚硫酸氢钠或饱和亚硫酸氢钾水层；(4)所得饱和亚硫酸氢钠或亚硫酸氢钾水层用饱和碳酸钠或稀盐酸处理后用有机溶剂萃取，得萃取液；(5)萃取液回收溶剂后得红贝菌素(scabrosone)，该化合物结构式为

【技术特征摘要】
1.红贝菌素(scabrosone)的制备方法，其特征在于该方法包含以下步骤：(1)取药用真菌红贝俄氏孔菌(Earliellascabrosa(Pers.)Gilb.&Ryvarden)子实体，用有机溶剂提取；(2)所得粗提物用硅胶柱层析粗分得洗脱物；(3)所得洗脱物用饱和亚硫酸氢钠或饱和亚硫酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱峰，冯伟杰，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44