一种苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法技术

本发明专利技术公开一种苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法，属于天然产物试验技术领域，具体包括如下6个步骤：1）准备仪器与材料，2）DPPH储备液配制，3）DPPH实验方法，4）·OH自由基实验方法，5）·O

A fruit procyanidins antioxidant Test Method Research

Test methods for procyanidins antioxidant of the invention discloses a fruit, belonging to the technical field of natural product testing, including 6 specific steps are as follows: 1) preparation equipment and materials, 2) DPPH stock solution, 3 DPPH) experiment method, 4) - OH free radical experiment method, 5) - O

【技术实现步骤摘要】
一种苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法
本专利技术属于天然产物试验
，具体涉及一种苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法。
技术介绍
原花青素Proanthocyanidins,简称PC,是植物王国中广泛存在的一类多酚化合物的总称。起初统归于缩合鞣质或黄烷醇类，随着分离鉴定技术的提高和对此类物质的深入研究与认识。每年春季苹果主产地由于疏果产生大量苹果幼果，一部分苹果幼果被用来喂养猪牛羊等牲畜，利用价值不高，大部分在田里白白扔掉了。据文献研究苹果幼果中原花青素的含量大于成果，因此利用苹果幼果提取原花青素可以实现苹果幼果的高值化利用。原花青素是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂，具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤作用、抗辐射作用、美容抗皱、延缓衰老、抗过敏、保护视力、治疗炎症等功能。目前苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法未见文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法。本专利技术采用如下技术方案：包括准备仪器与材料、DPPH储备液配制、DPPH实验方法、·OH自由基实验方法、·O2－储备液配制、·O2－自由基实验方法6个步骤，完成试验测定。本专利技术的有益之处在于试验方法流程简单，结果准确，数据可靠。附图说明图1是本专利技术苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法的流程图。具体实施方式按图1流程图所示，依次进行以下试验步骤：步骤1：准备仪器与材料分析天平，电热恒温水浴锅，紫外可见分光光度计；DPPH、FeSO4、水杨酸、Tris、邻苯三酚、无水乙醇、H2O2、HCl等。步骤2：DPPH储备液配制精密取DPPH39.8mg定溶于500mL50%乙醇中，充分振摇，完全混匀，配成0.2mol/mL储备液，避光4℃保存，用时稀释一倍。步骤3：DPPH实验方法用50%乙醇配置2mg/mL的苹果原花青素溶液，分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL两组于刻度试管中，50%乙醇补齐至2.0mL向其中一组加入DPPH溶液至2mL，摇匀30min后，用50%的乙醇做参比在517nm波长下测其吸光度，即为Ai；向另一组中加入50%乙醇至2mL，混合后测其吸光度，即为Aj；同时测定2mLDPPH溶液与2mL50%的乙醇混合后的吸光度，即为A0；根据下列公式计算清除率SA：DPPH自由基清除率SA（%）=[1－(Ai－Aj)／A0]×100%步骤4：·OH自由基实验方法用50%乙醇配置4mg/mL的苹果原花青素溶液，吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于刻度试管中，50%乙醇补齐至1.0mL，分别依次加入6mmol/LFeSO4溶液1mL、6mmol/L水杨酸溶液1mL摇匀，最后加入6mmol/LH2O2溶液1mL，摇匀，37℃水浴反应30min后于510nm处测得不同抗氧化剂浓度下的吸光度Ai；如上操作，用50%乙醇代替H2O2时测得苹果原花青素的本底吸光度Aj；同时用1mL50%乙醇代替苹果原花青素测得空白对照吸光度A0；清除率SA（%）=[1－(Ai－Aj)/A0]×100%。步骤5：·O2－储备液配制1）Tris溶液：称取Tris1.211g，用水定容至100mL，得0.1mol/LTris溶液。HCl溶液：量取36%HCl0.429mL，用水溶解定容至100mL，得0.05mol/LHCl溶液，将其稀释5倍得10mmol/LHCl溶液。2）Tris-HCl缓冲液：加入50mL0.1mol/LTris溶液和45mL0.05mol/LHCl溶液,混匀，用0.05mol/LHCl溶液调到pH值分别为8.2。3）邻苯三酚溶液：称取0.0378g邻苯三酚，用10mmol/LHCl溶解定容至100mL,得3mmol/L邻苯三酚溶液。步骤6：·O2－自由基实验方法量取pH值为8.2的Tris-HCl缓冲液5mL分别加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL的4mg/mL苹果原花青素溶液，用双蒸水补充至9.7mL，置于10mL比色管中混均，在25℃水浴中保温20min，取出后立即加入在25℃预热过的3mmol/L邻苯三酚0.3mL，迅速摇匀后倒入比色皿中，在320nm波长处，每间隔1min测吸光值一次，共反应9min，以吸光值A对反应时间t作线性关系图，斜率即为Vt,，计算出抗氧化剂对超氧阴离子的清除率(Y)。V0为邻苯三酚自氧化速率。O2－清除率计算公式：Y(%)=(1-Vt/V0)*100。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法，其特征在于，所述方法包括如下6个步骤： 1）准备仪器与材料，2）DPPH储备液配制，3）DPPH实验方法，4）·OH自由基实验方法，5）·O

【技术特征摘要】
1.一种苹果幼果原花青素抗氧化研究试验方法，其特征在于，所述方法包括如下6个步骤：1）准备仪器与材料，2）DPPH储备液配制，3）DPPH实验方法，4）·OH自由基实验方法，5）·O2－储备液配制，6）·O2－自由基实验方法。2.根据权利要求1所述试验方法，其特征在于，所述步骤2）DPPH储备液配制：精密取DPPH39.8mg定溶于500mL50%乙醇中，充分振摇，完全混匀，配成0.2mol/mL储备液，避光4℃保存，用时稀释一倍。3.根据权利要求1所述试验方法，其特征在于，所述步骤3）DPPH实验方法：用50%乙醇配置2mg/mL的苹果原花青素溶液，分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL两组于刻度试管中，50%乙醇补齐至2.0mL向其中一组加入DPPH溶液至2mL，摇匀30min后，用50%的乙醇做参比在517nm波长下测其吸光度，即为Ai；向另一组中加入50%乙醇至2mL，混合后测其吸光度，即为Aj；同时测定2mLDPPH溶液与2mL50%的乙醇混合后的吸光度，即为A0；根据下列公式计算清除率SA：DPPH自由基清除率SA（%）=[1－(Ai－Aj)／A0]×100%。4.根据权利要求1所述试验方法，其特征在于，所述步骤4)·OH自由基实验方法：用50%乙醇配置4mg/mL的苹果原花青素溶液，吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于刻度试管中，50%乙醇补齐至1.0mL，分别依次加入6mmol/LFeSO4溶液1mL、6mmol/L水杨酸溶液1mL摇匀，最后加入6mmol/LH2O2溶液1mL，摇匀，37℃水浴反应30min后于510nm处测得不同抗氧化剂浓度下的吸光度A...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘涛瑞，
申请(专利权)人：刘涛瑞，
类型：发明
国别省市：山东,37