The invention discloses a method for extracting a bovine tendon collagen, which includes pretreatment, extraction, precipitation, precipitation, purification, drying and preservation of collagen steps. The method for extracting bovine Achilles tendon collagen by enzyme method and HPLC preparation combination can be purified type I collagen from yak tendon, this method has the advantages of high efficiency, high selectivity and easy amplification.
【技术实现步骤摘要】
一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法
本专利技术法涉及一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法。
技术介绍
目前胶原蛋白主要从猪皮、牛皮、鱼皮及动物骨骼中提取。动物皮肤来源的胶原蛋白受污染几率高，动物骨骼来源胶原蛋白提取率低。现有提取体系：有机酸溶液体系、胃蛋白酶-酸溶液体系和中性盐溶液体系，其中胃蛋白酶-酸溶液体系获取率最高。常见的提纯方式只是简单的利用一步柱层析进行，此方法存在生产周期长、分离效率低、产物纯度不高等缺点。长的分离周期和低的分离效率不仅增加了胶原蛋白的生产成本，而且使很多资源无法得到有效的利用。
技术实现思路
本专利技术法的目的是提供一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法，可以从牦牛跟腱中分离纯化I型胶原蛋白，该方法具有高效性、高选择性和易放大性。为解决上述技术问题，本专利技术法采用如下技术方案：一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法，包括如下步骤：A、前处理：新鲜牛跟腱去除软组织、剔除筋膜、脂肪后，粉碎机粉碎至0.2～0.5mm大小组织块，后经质量分数20%NaCL溶液浸泡5min，质量分数5%NaHCO3溶液浸泡30min，去掉血清等成份，消毒，以后操作全部在无菌操作下完成；将用蒸馏水...
【技术保护点】
一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：A、前处理：新鲜牛跟腱去除软组织、剔除筋膜、脂肪后，粉碎机粉碎至0.2～0.5 mm大小组织块，后经质量分数20%NaCL溶液浸泡5 min，质量分数5%NaHCO
【技术特征摘要】
1.一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：A、前处理：新鲜牛跟腱去除软组织、剔除筋膜、脂肪后，粉碎机粉碎至0.2～0.5mm大小组织块，后经质量分数20%NaCL溶液浸泡5min，质量分数5%NaHCO3溶液浸泡30min，去掉血清等成份，消毒，以后操作全部在无菌操作下完成；将用蒸馏水洗涤后的组织小块放入氯仿与乙醇体积比2:1的溶液对其进行脱脂，脱脂2-6h，双蒸水洗涤3次；用含4.5mol/LNaCl的pH为7.5的0.05mol/LTris-HCl缓冲液，充分洗涤12-36h，以去除脂质及血清等成分，低温离心；B、抽提：将沉淀加入1L含胃蛋白酶500mg的0.5mol/L冰醋酸，搅拌并维持在低温，提取72h，每10000g离心10min，去除沉淀；C、沉淀：在上清液中加入0.5mol/L冰醋酸，使溶液pH为2.5～3.0，通常每升提取液中加入30ml的冰醋酸，用磁力搅拌器充分搅拌，离心后弃沉淀；D、盐析：在上清液中加入NaCl至4.4mol/L，搅拌过夜，低温离心，将沉淀溶于0.5mol/L冰醋酸中，再逐级用2.4mol/L、1.7mol/L及1.0mol/L的NaCl溶液反复盐析酸溶，最后得到的上清液即为胶原粗提液；E、将胶原粗提液冷冻干燥得到胶原粗提物冻干品，于低温下保存F、高效液相色谱纯化：将胶原冻干品用超纯水溶解，经滤膜过滤，取滤液上样进行色谱分离。2.根据权利要求1所述的牛跟腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤A中低温离心条件为8000r/min，30min，4℃。3.根据权利要求1所述的牛跟腱胶原蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤F中色谱条件为：ZORBAX300SB-C18半制备色谱柱，9.4m...
【专利技术属性】
技术研发人员：李毅，王洪瑾，吴晓伟，
申请(专利权)人：李毅，王洪瑾，吴晓伟，
类型：发明
国别省市：青海,63
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