一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法，属于化学检测领域。旨在提供一种更简便、快捷控制半枝莲药材及其配方颗粒的质量的方法，该方法采用ASE萃取粉碎后的半枝莲样品，其中ASE萃取方法包括先用石油醚萃取，然后再用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；采用HPLC法测定甲醇萃取液中也黄芩苷的含量。本发明专利技术可用于控制半枝莲药材及其配方颗粒的质量。

Method for determination of scutellarin in Scutellaria barbata D. a ASE - HPLC method

The invention discloses a method for ASE - HPLC method for the determination of scutellarin in Scutellaria barbata, which belongs to the field of chemical detection. In order to provide a more convenient and quick control of Scutellaria barbata and their granule quality, the method of using ASE extraction after crushing of Scutellaria barbata samples, ASE extraction method which includes first with petroleum ether and then methanol extraction, methanol extract collected; mining content of Baicalin in methanol extracts was determined using HPLC method the. The invention can be used for the quality control of Scutellaria barbata and its formula granules.

【技术实现步骤摘要】
一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法
本专利技术属于化学检测领域，尤其是一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法。
技术介绍
半枝莲为唇形科植物半枝莲ScutellariabarbataD.Don的干燥全草，味辛、苦，寒。归肺、肝、肾经。清热解毒，化瘀利尿。可用于疔疮肿毒，咽喉肿痛，跌扑伤痛，水肿、黄疸，蛇虫咬伤。临床多用于治疗肝癌、胃癌、肺癌等疾病，其主要有效成分是黄酮类化合物。野黄芩苷是半枝莲中一种含量较高的活性物质，《中国药典》(2015年版一部)以野黄芩苷含量作为其质量评价的重要指标，具有降低脑血管阻力，改善脑血循环、增加脑血流量及抗血小板凝集的作用，现代药理研究表明野黄芩苷对肿瘤细胞、肝癌细胞增殖及侵袭能力有明显的抑制作用。目前，半枝莲中野黄芩苷的提取方法有醇提回流法、超临界萃取法、索氏提取法、超声提取、大孔树脂纯化法等，测定方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、但上述方法前处理提取时间长、测定步骤繁琐。与传统方法相比，ASE突出的优点是缩短提取时间，减少溶剂消耗，提高萃取效率。本专利技术采用ASE-HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷的含量，操作简便、快速、结果准确。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种更简便、快捷控制半枝莲药材及其配方颗粒的质量的方法，该方法采用ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷的含量。为了解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取粉碎后的半枝莲样品，其中ASE萃取方法包括先用石油醚萃取，然后再用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中也黄芩苷的含量。进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将半枝莲样品粉碎，过三号筛，取过筛后的粉末1g；步骤S2：与1g的硅藻土混合，装于放有纤维滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行，用石油醚萃取；步骤S3：将石油醚萃取液舍弃，加入甲醇溶液对药渣进行二次萃取；步骤S4：收集萃取液，并加甲醇溶液定容至100ml，过滤，得甲醇萃取液。进一步的，步骤S2所述的萃取，参数如下：萃取温度为80℃；萃取时间为5min；萃取次数为1次；冲洗体积为100％；吹扫时间为120s。进一步的，步骤S3所述的萃取，参数如下：萃取温度为120℃；萃取时间为8min；萃取次数为3次；冲洗体积为60％；吹扫时间为60s。进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为ThermoSyncronisC18；流动相为甲醇-醋酸-水；流速为0.3mL/min；检测波长为335nm；柱温为40℃；进样量为5μl。进一步的，所述的色谱柱的规格为3mm×100mm，3μm。进一步的，所述的流动相甲醇‐醋酸‐水的体积比为30:66:4。本专利技术与传统方法相比，具有下述优势：本专利技术与中国药典2015年版一部半枝莲药材项下的样品前处理程序比较，药典方法较繁琐、费时，仅样品提取就需要6‐7小时，花费石油醚与甲醇225ml；而本专利技术药材提取花费13分钟，石油醚与甲醇110ml。本专利技术可准确、简便、快捷地对半枝莲中野黄芩苷进行含量测定。附图说明图1为提取温度的试验结果图；图2为提取时间的试验结果图；图3为循环次数的试验结果图；图4为野黄芩苷线性图。具体实施方法下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围之内。实施例11仪器与试药ASE350型快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)；U3000高效液相色谱仪(美国ThermoFisher公司)，配紫外检测器，四元梯度泵，自动进样器；XA205DU型十万分之一电子天平(瑞士Mettler-Toledo公司)；ELGAPURELABClassicUVF净化系统。野黄芩苷(批号：110824-201207，来源：中国食品药品检定研究院)；甲醇为色谱纯；石油醚(60～90℃)；冰醋酸为分析纯；超纯水(实验室自制)；0.45μm微孔滤膜(美国，Aglient公司)。样品：半枝莲药材(产地湖南，批号1511024；产地湖北，批号150523；产地湖南，批号151001；产地四川，批号：16012017)，均购于梧州或玉林药材市场，经广西梧州食品药品检验所副主任中药师黄蘅鉴定为为唇形科植物半枝莲ScutellariabarbataD.Don的干燥全草。2实验方法2.1色谱条件色谱柱：Thermo-SyncronisC18(3mm×100mm，3μm)；流动相：甲醇-醋酸-水(30:66:4)；流速：0.3mL/min；检测波长：335nm；柱温：40℃；进样量：5μl。2.2对照品溶液的制备取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含80μg的溶液，即得。2.3供试品溶液的制备分别精密称取不同批号的半枝莲粉末(过三号筛)约1g，与约1g硅藻土混合均匀，移入到预先放好纤维滤膜的ASE10ml萃取池中再加入适量硅藻土填满萃池，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖，放入快速萃取仪中进行萃取。先用石油醚对样品进行除酯(80℃，5min，循环1次，冲洗体积100％，吹扫时间为120s)，以甲醇为提取溶剂(120℃，8min，循环3次，冲洗体积为60％；吹扫时间为60s)萃取结束后，把萃取液转移转移至100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。2.4系统适用性试验精密量取“2.2”、“2.3”项下对照品溶液、供试品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱。在该色谱条件下，各成分均能有效分离，分离度＞1.5。结果表明，其他成分测定无干扰。2.5正交试验在上述单因素试验中已选出了最优结果，为消除各因素之间的相互影响，采用L9(33)正交试验对半枝莲中的野黄芩苷提取条件进行优化，以正交试验结果来确定与药典方法提取结果匹配的最优提取工艺条件。正交实验极差分析结果见表1。由表1可知，影响半枝莲中的野黄芩苷提取效果的各因素主次关系为：提取温度>提取时间>循环次数。结合各单因素试验结果，得出与药典方法提取结果相匹配的最优提取工艺组合为：甲醇作为提取溶剂，提取温度为120℃，提取8min，循环3次。表12.5.1提取温度的选择精密称取半枝莲样品1g，加入等量硅藻土混合，装于10ml萃取池，用硅藻土填满萃取池。以甲醇为提取溶剂，分别在80℃、100℃、120℃，5min，提取1次，再按“2.1”色谱条件进行测定分析。结果：温度为120℃时，野黄芩苷的提取率最高，试验选择最优提取温度为120℃(详见图1)。2.5.2提取时间的选择精密称取半枝莲样品1g，加入等量硅藻土混合，装于10ml萃取池，用硅藻土填满萃取池。120℃下分别萃取5、8、10min，提取1次，再按“2.1”色谱条件进行测定分析。结果：随着时间的增加提取量也在增加，在提取时间为8min之后，随着时间的增加野黄芩苷的提取量增加不大，所以为了节省时间提高工作效率，本次试验选择的最优提取时间定为8min(详见图2)。2.5.3循环次数的选择精密称取半枝莲样本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取粉碎后的半枝莲样品，其中ASE萃取方法包括先用石油醚萃取，然后再用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中也黄芩苷的含量。

【技术特征摘要】
1.一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取粉碎后的半枝莲样品，其中ASE萃取方法包括先用石油醚萃取，然后再用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中也黄芩苷的含量。2.根据权利要求1所述的一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将半枝莲样品粉碎，过三号筛，取过筛后的粉末1g；步骤S2：与1g的硅藻土混合，装于放有纤维滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行，用石油醚萃取；步骤S3：将石油醚萃取液舍弃，加入甲醇溶液对药渣进行二次萃取；步骤S4：收集萃取液，并加甲醇溶液定容至100ml，过滤，得甲醇萃取液。3.根据权利要求2所述的一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法，其特征在于，步骤S2所述的萃取，参数如下：萃取温度为80℃；萃取时间为5m...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙良广，王丽丽，陈学松，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45