一种山莨菪碱及其对映体的分离方法技术

本申请公开了一种山莨菪碱及其对映体的分离方法。其能够从购自南京泽朗生物科技有限公司的消旋山莨菪碱标准品中分离得到。其结构式如式I‑IV所示：

【技术实现步骤摘要】
一种山莨菪碱及其对映体的分离方法
本申请涉及一种山莨菪碱及其对映体的分离方法。
技术介绍
山莨菪碱为我国首先从茄科植物唐古特山莨菪中分离出的一种生物碱，5个手性中心。它具有平滑肌松弛，解除血管痉挛因此具有镇痛的作用，成药有片剂和注射剂。临床上多用注射剂，可用于治疗感染中毒性休克、坐骨神经痛、胃及十二指肠溃疡、视网膜色素变性等疾病。理论上，山莨菪碱具有5个(1-,3-,5-,6-和2'-)手性碳，1-,3-,5-,不能自由旋转，故认为只有6-，2'-位存在异构体，即2对对映体。并且目前文献报道关于山莨菪碱的手性结构也只有2对对映体。但在合成过程中，中间体的3-可能发生异构化，故实际应为4对对映体。对于山莨菪碱的手性拆分较多，主要是利用环糊精及其衍生物为手性拆分剂，利用毛细管电泳法、高效毛细管电泳法或高效液相色谱法能够对2对对映体进行手性分离，并达到良好的拆分效果。
技术实现思路
本申请发现山莨菪碱除了现有技术中存在的2对对映体外，还存在2对对映体。即在人工合成的山莨菪碱中，实际上有8个异构体的存在，而非4个。可能是在其中间体外消旋3-羟基-6-乙酰氧基莨菪烷的3-发生异构化，从而产生8个异构体。但是根据现有技术的分离方法，无法对8个异构体进行有效的分离，而本申请通过改变分离条件实现了对8个异构体的分离。本申请之一提供了一种山莨菪碱，所述山莨菪碱的结构式如式I-IV所示：所述山莨菪碱能够从购自南京泽朗生物科技有限公司的消旋山莨菪碱标准品中分离得到。从消旋山莨菪碱标准品中分离所述式I-IV所示的化合物的具体条件如下：利用毛细管电泳法在pH3.0，在电泳缓冲液中的浓度为10mg/mL磺丁基-β-环糊精，电压-15kV，重力进样5s的对映体拆分条件下进行拆分。另外，其也能够从购自杭州民生药业有限公司消旋山莨菪碱药品(批号：T15j033)中分离得到。本申请之二提供了一种分离山莨菪碱对映体的方法，所述方法为毛细管电泳法，包括如下步骤：1)电泳缓冲液中含有手性拆分剂，所述手性拆分剂选自磺丁基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精与羟丙基-β-环糊精的混合物和/或磺酸化-β-环糊精聚合物的混合物中的一种；优选所述手性拆分剂选自磺丁基-β-环糊精，或磺丁基-β-环糊精和羟丙基-β-环糊精的混合物；2)分离电压为-8kV至-18kV。在一个具体实施方式中，所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精。在一个具体实施方式中，所述手性拆分剂在所述电泳缓冲液中的浓度独立地为2.5mg/mL至15mg/mL。在一个具体实施方式中，所述手性拆分剂在所述电泳缓冲液中的浓度独立地为8.5mg/mL至11.5mg/mL。在一个具体实施方式中，当所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精与羟丙基-β-环糊精和/或磺酸化-β-环糊精聚合物的混合物时，磺丁基-β-环糊精的浓度为8.5mg/mL至11.5mg/mL，羟丙基-β-环糊精的浓度为2.5mg/mL至11.5mg/mL，磺酸化-β-环糊精聚合物的浓度为2.5mg/mL至11.5mg/mL；优选地当所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精与羟丙基-β-环糊精和/或磺酸化-β-环糊精聚合物的混合物时，磺丁基-β-环糊精的浓度为8.5mg/mL至11.5mg/mL，羟丙基-β-环糊精的浓度为2.5mg/mL至8.5mg/mL，磺酸化-β-环糊精聚合物的浓度为2.5mg/mL至8.5mg/mL。例如，在一个具体实施方式中，当所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精和羟丙基-β-环糊精的混合物，或磺丁基-β-环糊精和磺酸化-β-环糊精聚合物时，磺丁基-β-环糊精的浓度、羟丙基-β-环糊精的浓度和磺酸化-β-环糊精聚合物的浓度独立地为2.5mg/mL至15mg/mL。在一个具体实施方式中，当所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精和羟丙基-β-环糊精的混合物时，磺丁基-β-环糊精的浓度为8.5mg/mL至11.5mg/mL，羟丙基-β-环糊精的浓度为2.5mg/mL至11.5mg/mL；优选地当所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精和羟丙基-β-环糊精的混合物时，磺丁基-β-环糊精的浓度为8.5mg/mL至11.5mg/mL，羟丙基-β-环糊精的浓度为2.5mg/mL至8.5mg/mL。在一个具体实施方式中，当所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精和磺酸化-β-环糊精聚合物时，磺丁基-β-环糊精的浓度为8.5mg/mL至11.5mg/mL，磺酸化-β-环糊精聚合物的浓度为2.5mg/mL至11.5mg/mL；优选地当所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精和磺酸化-β-环糊精聚合物的混合物时，磺丁基-β-环糊精的浓度为8.5mg/mL至11.5mg/mL，磺酸化-β-环糊精聚合物的浓度为2.5mg/mL至8.5mg/mL。在一个具体实施方式中，所述电泳缓冲液的pH值为2至5。在一个具体实施方式中，所述电泳缓冲液的pH值为2.5至4。在一个具体实施方式中，所述电泳缓冲液中含有20mM至40mM的磷酸盐。在一个具体实施方式中，所述电泳缓冲液中含有28mM至32mM的磷酸盐。在本申请中，经过试验证实，所述电泳缓冲液不适合使用Tris缓冲液。根据实验结果，可明显的得知在缓冲液中最好不含甲醇。不过，在一个具体实施方式中，所述电泳缓冲液中可以还包括体积含量在30％以下的甲醇。在一个具体实施方式中，优选所述电泳缓冲液中还包括体积含量为0.001％至20％的甲醇。在一个具体实施方式中，所述分离电压为-11kV至-17kV。在一个具体实施方式中，毛细管电泳操作条件：采用的石英毛细管柱总长度为60cm，其有效长度40cm，内径为50μm；实验条件为25℃±5℃；山莨菪碱样品和缓冲液分别经过0.45μm滤膜过滤；检测波长：山莨菪碱-214nm；进样条件：重力进样，3-7s(例如5s)；毛细管柱的处理：分析前依次用1mol/L的氢氧化钠溶液、电泳缓冲液对毛细管进行冲洗；并且在每次分析之间用电泳缓冲液冲洗2min；溶液及样品配置：磷酸储备液配制方法：精密量取磷酸5.080mL(0.075mol)，溶于约200mL的纯水中，移入250mL容量瓶中配成300mmol/L的磷酸储备液；磷酸盐缓冲液配制方法：配制30mM的pH3-9磷酸盐缓冲液；即精密量取磷酸储备液25mL，溶于约180mL的纯水中，用1mol/LNaOH溶液调节酸度至所需pH；调节好pH后，移入250mL容量瓶中定容；电泳缓冲液配制方法：按实验所需条件计算好β-环糊精衍生物的用量，称量好后，溶于少量所需pH的磷酸盐缓冲液，移入10mL容量瓶中定容；再用0.45μm滤器过滤，装入电泳缓冲液进样瓶中，每瓶容积约4.5mL；样品的配置：将含有山莨菪碱的样品研碎，加入适量所需纯水，超声20min；10000r/min离心10min，取上清液，用0.45μm滤膜过滤，配成浓度为1mg/mL的溶液；电泳实验前缓冲液超声脱气15min。附图说明图1为在pH3.0，10mg/mL磺丁基-β-环糊精，电压-15kV，重力进样5s的对映体拆分条件下的毛细管电泳图。图2为在pH4.0，10mg/mL的磺丁基-β-环糊精和甲基化-β-环糊精，电压-15kV，重力进样7s的对映体拆分条件下的毛细管电泳图。图3为在pH3.0，10mg本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山莨菪碱，其特征在于，所述山莨菪碱的结构式如式I‑IV所示：

【技术特征摘要】
1.一种山莨菪碱，其特征在于，所述山莨菪碱的结构式如式I-IV所示：2.一种分离山莨菪碱对映体的方法，其特征在于，所述方法为毛细管电泳法，包括如下步骤：1)电泳缓冲液中含有手性拆分剂，所述手性拆分剂选自磺丁基-β-环糊精、或磺丁基-β-环糊精与羟丙基-β-环糊精和/或磺酸化-β-环糊精聚合物的混合物中的一种；优选所述手性拆分剂选自磺丁基-β-环糊精，或磺丁基-β-环糊精和羟丙基-β-环糊精的混合物；2)分离电压为-8kV至-18kV。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述手性拆分剂在所述电泳缓冲液中的浓度独立地为2.5mg/mL至15mg/mL；优选所述手性拆分剂在所述电泳缓冲液中的浓度独立地为8.5mg/mL至11.5mg/mL。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，当所述手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精与羟丙基-β-环糊精和/或磺酸化-β-环糊精聚合物的混合物时，磺丁基-β-环糊精的浓度为8.5mg/mL至11.5mg/mL，羟丙基-β-环糊精的浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁瑞娟，王雄飞，孙毅坤，詹雪艳，孙科，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：北京,11