基于复合脉冲电场诱导细胞融合的方法技术

本发明专利技术公开了基于复合脉冲电场诱导细胞融合的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将不同尺寸的细胞和融合液置于细胞培养槽内；2)将正弦交流电压施加于细胞培养槽的两极，细胞将排队且彼此紧贴；3)通过开关切换，将培养槽两极上所施加的正弦交流电压切换为纳秒脉冲电压，槽内细胞发生微小电穿孔；4)继续通过开关切换，将纳秒脉冲电压切换为微秒脉冲电压，作用于已经处于穿孔状态的槽内细胞，已处于开孔状态的细胞上的孔进一步增大，彼此紧贴的两个细胞的外膜彼此连接，两细胞内遗传物质互相融合，最终形成一个完整的融合细胞。

【技术实现步骤摘要】
基于复合脉冲电场诱导细胞融合的方法
本专利技术涉及细胞融合的方法，具体是一种基于复合脉冲电场诱导细胞融合的方法。
技术介绍
细胞融合能够实现远源杂交，其意义在于打破了仅仅依赖有限杂交重组基因创造新种的界限，有可能形成有性杂交方式无法获得的新型的杂交动物或植物细胞，扩大了遗传物质的重组范围。细胞融合是生物制备的基本途径。细胞能否有效融合是决定生物制备是否可行的关键，甚至成为制约生物制备技术发展的瓶颈。因此，如何发展和改进现有的细胞融合方法、提升细胞融合的效果和效率，已成为国内外生物制备领域的一个研究热点。根据电融合的基本原理，细胞膜上出现足够数量和尺寸的孔洞(即细胞电穿孔)，是细胞融合的先决条件。而细胞要发生电穿孔，细胞的跨膜电压必须大于其细胞膜穿孔所需的电压阈值。传统的微秒脉冲在细胞融合时存在一定的缺陷，电穿孔的理论研究表明，在微秒脉冲作用下，细胞跨膜电压值与细胞半径呈显著正相关。因此，微秒脉冲对细胞膜的电穿孔效应与细胞尺寸有直接关系，当融合不同尺寸的细胞时，作用相同场强的脉冲，半径较大的细胞会先发生穿孔，半径小的细胞后发生穿孔，换言之，当小细胞发生穿孔的时候，大细胞可能已经处于过度本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于复合脉冲电场诱导细胞融合的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将不同尺寸的细胞和融合液置于细胞培养槽内；2)将正弦交流电压施加于细胞培养槽的两极，细胞将排队且彼此紧贴；3)通过开关切换，将培养槽两极上所施加的正弦交流电压切换为纳秒脉冲电压，槽内细胞发生微小电穿孔；4)继续通过开关切换，将纳秒脉冲电压切换为微秒脉冲电压，作用于已经处于穿孔状态的槽内细胞，已处于开孔状态的细胞上的孔进一步增大，彼此紧贴的两个细胞的外膜彼此连接，两细胞内遗传物质互相融合，最终形成一个完整的融合细胞。

【技术特征摘要】
1.基于复合脉冲电场诱导细胞融合的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将不同尺寸的细胞和融合液置于细胞培养槽内；2)将正弦交流电压施加于细胞培养槽的两极，细胞将排队且彼此紧贴；3)通过开关切换，将培养槽两极上所施加的正弦交流电压切换为纳秒脉冲电压，槽内细胞发生微小电穿孔；4)继续通过开关切换，将纳秒脉冲电压切换为微秒脉冲电压，作用于已经处于穿孔状态的槽内细胞，已处于开孔状态的细胞上的孔进一步增大，彼此紧贴的两个细胞的外膜彼此连接，两细胞内遗传物质互相融合，最终形成一个完整的融合细胞。2.根据权利要求1所述的基于复合脉冲电场诱导细胞融合的方法，其特征在于：所述步骤1)中不同尺寸的细胞包括大细胞或小细胞，所述大细胞的半径范围为:5～15μm，所述大细胞的半径是小细胞半径的2～7倍；所述大细胞的密度为2×107～5×107个/L，所述小细胞的密度是大细胞密度的五倍；所述步骤1)中的细胞为植物细胞或动物细胞；如选择的细胞为植物细胞，融合前需对植物细胞进行去壁处理再进行融合。3.根据权利要求1所述的基于复合脉冲电场诱导细胞融合的方法，其特征在于：所述步骤1)中的融合液包括体积比为(1～3):(1～3):(2～4)的PM缓冲液、酶液和CPW盐溶液；所述PM缓存液由MgCl2、CaCl2、山梨醇和三蒸水配制而成；所述MgCl2的浓度为0.05～0.4mmol/L，CaCl2的浓度为0.05～0.5mmol/L，山梨醇的浓度为200～500mmol；所述酶液由CellulaseOnzukaR-10、MecerozymeR-10和甘露醇配制而成；所述CellulaseOnzukaR-10的浓度为0.5％～3％，MecerozymeR-10的浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：李成祥，柯强，姚陈果，米彦，张媛媛，董守龙，吕彦鹏，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50