体内细胞表面工程化制造技术

本发明专利技术提供了使用一种或多种免疫共刺激多肽在体内工程化细胞表面如肿瘤细胞表面的方法和组合物。该方法、组合物和工程化的细胞例如可用于刺激对抗细胞的免疫应答。当工程化的细胞表面是肿瘤细胞表面时，该方法、组合物和工程化的细胞可用于提高患者对抗癌症的免疫应答以及用于降低肿瘤大小和抑制肿瘤生长。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总地涉及为了刺激对抗细胞的免疫应答，通过在细胞表面 上展示一个或多个内源免疫刺激分子来体内工程化细胞表面的方法。 还提供了实现工程化的组合物。
技术介绍
已经广泛描述了针对加强宿主的免疫应答来处理特征在于缺乏免 疫力或通过4曼略性更大的免疫应答可解决的疾病和病症的方法。示例 性的疾病或病症是癌症。通过免疫系统来靶向肺瘤，因为它们表达胂 瘤相关抗原，其是突变的或超表达/异常表达的自体蛋白，或源自致癌 病毒的蛋白。认为癌症的发作是缺乏由T-细胞介导的获得性免疫的免 疫监视作用而引起的。通常使用外科手术、化疗和放疗的癌症处理方法，但是认为这些 方法缺乏肿瘤特异性，导致不利的副作用和不太满意的临床应答。因 此，通过特异性针对目标癌细胞的应答来加强对癌症的免疫应答而对 正常细胞没有显著有害影响的方法将呈现出超过传统癌症疗法的明显 优势。由于可以防止癌症复发的免疫系统的特异性、安全性、功效和长 期记忆的前景，包括来自癌症的抗原的癌症疫苗引起了特别的关注。 然而，如果癌细胞不再表达特定的抗原和/或如果肿瘤能够抑制免疫应 答或使免疫应答无反应性，该方法将得到破坏。由于肿瘤细胞可以有效地表达任何肿瘤相关抗原并因此可以激活 各种用于有效治疗的免疫应答，基于自体肿瘤细胞表达目标免疫分子7的遗传操纵的疫苗表示了有吸引力的用于癌症的方法。例如，已经报道了遗传修饰的表达CD80的细胞诱导强有力的抗肺瘤免疫应答，具有 有效的治疗功效。Ramarathinam等，1994，丄她d ， 179: 1205-14; Townsend & Allison, S"e騰，259: 368-70;请参阅，Lane, 1997, v4肌 TV. K爿cad ， 815: 392-400;和VanGool等，1996, /m/mmo/. Wev., 153: 47-83。认为基因疫苗对各种免疫逃避机制不太敏感，如抗原转移 和对免疫优势抗原决定部位的耐受性，这在肺瘤进展的过程中产生。 迄今为止提出的基于自体肿瘤细胞的疫苗需要外科手术除去胂瘤，将 表达目标免疫分子的肿瘤ex vivo遗传操纵，以及通过接种将操纵过的 细胞再次引入患者中。有几个障碍与该方法相关，如需要相当大的肿 瘤块来制备疫苗，与初级胂瘤细胞的遗传操纵相关的困难以及用于基 于基因治疗的方法的疫苗制备需要很长的时间(几周至数月)。专利技术概述本专利技术总地涉及在体内有效工程化细胞表面的方法，如胂瘤细胞 表面，涉及用于实现体内工程化的组合物并涉及工程化的细胞表面。根据一个实施方案，本专利技术提供了工程化细胞表面来展示免疫共 刺激多肽的方法。该方法包括将细胞表面接触(a)包括第一个结合对 成员和结合细胞表面的分子的双功能分子和(b)包括免疫共刺激多肽 和结合对的第二个成员的第一免疫共刺激分子。根据该方法，通过结 合对的第一个和第二个成员之间的结合，免疫共刺激多肽展示在细胞 表面上。根据一个实施方案，该方法是在体外实现的。根据另一个实 施方案，该方法是在体内实现的。在一个实施方案中，细胞表面是肿瘤细胞表面。另一个实施方案 中，免疫共刺激多肽选自CD86、 ICOSL(包括B7h、 B7-H2、 B7RP-1、 GL-50和LICOS )、 PD國L1、 PD-L2、 B7-H3、 B7-H4、 OX40L、 4-lBBL、 CD27L、 CD30L、 LIGHT、 BAFF和APRIL。在另一个实施方案中，结合对的第一个成员包括生物素，而结合 对的第二个成员包括抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白，如核心链霉 抗生物素蛋白。在一个实施方案中，双功能分子包括磺基-NHS-LC-生 物素。根据另一个实施方案，本专利技术提供了包括免疫共刺激和结合对成员的嵌合蛋白，结合对成员如抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白，如 核心链霉抗生物素蛋白。在一个实施方案中，免疫共刺激多肽选自CD86、 ICOSL(包4舌B7h、 B7-H2、 B7RP國1、 GL-50和LICOS )、 PD-L1、 PD-L2、 B7-H3、 B7-H4、 OX40L、 4-lBBL、 CD27L、 CD30L、 LIGHT、 BAFF和APRIL。本专利技术还提供了包括嵌合蛋白和药物学上可接受载体 的药物组合物。根据另一个实施方案，本专利技术提供了工程化细胞表面来展示一种 或多种免疫共刺激多肽的方法。该方法包括将(a)包括第一个结合对 成员和结合细胞表面的分子的双功能分子；(b)包括第一个共刺激多 肽和结合对的第二个成员的第一免疫共刺激部分；和任选的，(c)包 括第二免疫共刺激多肽和结合对的第二个成员的第二免疫共刺激部分 给予个体。根据该方法，通过结合对的第一个和第二个成员之间的结 合，第一和任选的第二免疫共刺激多肽展示在细胞表面上。在一个实施方案中，细胞表面是肿瘤细胞表面。在另一个实施方 案中，至少一个免疫共刺激多肽选自CD86、 ICOSL(包括B7h、 B7-H2、 B7RP-1、 GL-50和LICOS)、 PD隱L1、 PD-L2、 B7國H3、 B7-H4、 OX40L、 4-lBBL、 CD27L、 CD30L、 LIGHT、 BAFF和APRIL。在另一个实施 方案中，第一和第二免疫共刺激多肽选自CD86、 ICOSL (包括B7h、 B7國H2、 B7RP-1、 GL-50和LICOS )、 PD-L1、 PD画L2、 B7-H3、 B7國H4、 OX40L、 4画1BBL、 CD27L、 CD30L、 LIGHT、 BAFF、 APRIL、 CD80 和CD40L。在另一个实施方案中，结合对的第一个成员包括生物素，而结合 对的第二个成员包括抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白，如核心链霉 抗生物素蛋白。在一个实施方案中，双功能分子包括磺基-NHS-LC-生物素。在一个实施方案中，通过肿瘤内注射来给予结合对的第 一个成员。 在另一个实施方案中，通过肿瘤内注射或通过与结合对的第一个成员 相同或不同的途径来给予第一和第二免疫共刺激部分中的至少一个。在另一个实施方案中，对于给予的第一或笫二免疫共刺激部分， 至少约5%最初阳性的细胞在注射后约2天保持阳性。本专利技术的另一个方面提供了包括第一融合蛋白和第二融合蛋白的 组合物，第一融合蛋白包括第一免疫共刺激多肽和结合对的成员，而第二融合蛋白包括第二免疫共刺激多肽和相同的结合对成员。在一个实施方案中，至少一个免疫共刺激多肽选自CD86、 ICOSL(包括B7h、 B7-H2、 B7RP-1、 GL-50和LICOS )、 PD-L1、 PD-L2、 B7-H3、 B7-H4、 OX40L、 4-lBBL、 CD27L、 CD30L、 LIGHT、 BAFF和APRIL。在另 一个实施方案中，第一和第二免疫共刺激多肽选自CD86、 ICOSL (包 4舌B7h、 B7-H2、 B7RP画1、 GL-50牙口 LICOS )、 PD-L1、 PD-L2、 B7-H3、 B7-H4、 OX40L、 4隱1BBL、 CD27L、 CD30L、 LIGHT、 BAFF、 APRIL、 CD80和CD40L。本专利技术的另 一个方面提供了包括第 一组合物和第二组合物的组 合，第一组合物包括第一融合蛋白，本文档来自技高网...

【技术保护点】
工程化细胞的表面来展示一种或多种免疫共刺激多肽的方法，所述方法包括将以下物质给予含有所述细胞的个体：　ａ）包括结合对的第一个成员和结合细胞表面的分子的双功能分子；　ｂ）包括第一免疫共刺激多肽和所述结合对的第二个成员的第一免疫共刺 激部分；和，任选，　ｃ）包括第二免疫共刺激多肽和所述结合对的第二个成员的第二免疫共刺激部分，　其中所述第一和任选的第二免疫共刺激多肽通过所述结合对的所述第一个成员和所述结合对的所述第二个成员之间的结合展示于所述细胞表面上，和　 　其中所述第一和任选的第二免疫共刺激多肽中的至少一个选自ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＢＡＦＦ和ＡＰＲＩＬ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：H什尔万，KG埃尔佩克，ES尤尔库，
申请(专利权)人：路易斯维尔大学研究基金会有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]